Сравнительная оценка влияния растительных экстрактов на холинореактивность гладкой мускулатуры при активации внутриклеточных механизмов сокращения

Арсенал современной фитотерапии во многом пополняется знаниями традиционной медицины. В тибетской медицине для лечения многих заболеваний применяли шлемник байкальский, панцерию шерстистую, горечавник бородатый, в том числе при «болезнях жара», имеющих схожие симптомы с воспалительным процессом: определяется «пульс жара ускоренный, широкий, сильный, головная боль, жар в теле и др.» [4]. Известно, что воспаление часто сопровождается спазмом гладкой мускулатуры. Спастические реакции могут быть вызваны разными факторами: усилением действия симпатического или парасимпатического отделов вегетативной нервной системы, изменением концентрации ионов внутри клетки или одновременной активацией этих процессов [3]. Лекарственные средства могут оказывать ингибирующее влияние на медиаторные реакции по типу конкурентного, неконкурентного, бесконкурентного и смешанного антагонизма [2].

Целью данного исследования явилось изучение влияния экстрактов шлемника байкальского (ЭШБ), панцерии шерстистой (ЭПШ), горечав-ника бородатого (ЭГБ) на холинореактивность гладкой мускулатуры при активации внутриклеточных механизмов сокращения.

Материалы и методы . Опыты проведены на изолированных отрезках тонкой кишки крыс линии Вистар массой 150-250 г, которые помещали в термостатируемую камеру с аэрированным раствором Тироде, реакцию мускулатуры регистрировали в изотоническом режиме. В первой серии экспериментов в инкубационную среду вводили в ацетилхолин (1х10^-6 М) или бария хлорида (4,8х10^-4 М), использующийся в фармакологических опытах для активации кальциевых каналов. Затем отрезок кишки отмывали, инкубировали 10 минут в растворе Тироде и вводили в камеру экстракты исследуемых растений в дозах, уменьшающих реакцию мускулатуры примерно на 80-90 %. После 5-минутной инкубации в среду добавляли ацетилхолин или бария хлорид в указанных концентрациях, полученные данные принимали за опыт. По этим данным рассчитывали константы ингибирования (Ки), количественно характеризующие действие исследуемых экстрактов на сократительную способность гладкой мускулатуры.

В следующей серии экспериментов определяли исходные параметры холинергической реакции: константу диссоциации (К), численно равную половине максимальной, и величину максимальной реакции (Рm), пропорциональную количеству активных холинорецепторов. Эти данные принимали за контроль. Чувствительность холинорецепторов оценивали по величине Ка (Ка=1/К) – константе ассоциации. После 10минутной отмывки препарата в камеру вводили исследуемые экстракты, в дозах, соответствующих Ки. Через 5 минут инкубации вновь определяли реакцию на ацетилхолин для расчета Ка1 и Рm1, Ка2 и Рm2, Ка3 и Рm3, на фоне ЭШБ, ЭПШ, ЭГБ соответственно. При изучении влия- ния растительных экстрактов на холинореактив-ность гладкой мускулатуры на фоне действия бария хлорида, опыты проведены по аналогичной схеме [3]. Результаты обработаны с использованием критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение . В первой серии экспериментов установлено, что исследуемые экстракты оказывают ингибирующее влияние на спастические реакции, вызванные ацетилхолином. Данные приведены в таблице 1.

Влияние растительных экстрактов на константы ингибирования реактивности гладкой мускулатуры

Таблица 1

Полученные при этом константы ингибирования свидетельствуют о том, что ЭШБ и ЭГБ примерно в одинаковой степени уменьшают холино-реакивность гладкой мускулатуры. ЭПШ оказывает менее выраженное ингибирующее влияние на холинозависимый спазм. При активации внутриклеточных механизмов сокращения установлено, что ЭШБ и ЭПШ оказывают выраженное влияние на барийзависимые сокращения, а ЭГБ в меньшей степени ослабляет эти реакции. Затем исследовали влияние растительных экстрактов на кинетику холинергической реакции. При этом было установлено, что ЭШБ уменьшает холинергическую реакцию за счет снижения чувствительности рецепторов в 5,4 раза, ЭПШ оказывает ингибирующее влияние на холинозависимый спазм за счет уменьшения количества холинорецепторов в 1,8 раза, ЭГБ – за счет уменьшения чувствительности рецепторов в 1,7 раза.

Таблица 2

Влияние растительных экстрактов на основные параметры холинергической реакции

Примечание: *– здесь и далее означает, что разница между контролем и опытом достоверна, при р≤0,05.

После этого определяли влияние бария хлорида на основные параметры холинергической реакции. Было установлено, что бария хлорид увеличивает холинозависимый спазм за счет усиления чувствительности с (0,127±0,013)х10-8

М до (0,196±0,017)х10-8 М и увеличения количества холинорецепторов с 17,2±1,6 мм до 31,5±1,68 мм. Данные Ка и Рm на фоне бария хлорида принимали за контроль. Результаты помещены в таблицу 3.

Таблица 3

Влияние растительных экстрактов на холинореактивность на фоне бария хлорида

По результатам первой серии экспериментов установлено, что в условиях спазма гладкой мускулатуры, вызванного субмаксимальными концентрациями ацетилхолина и бария хлорида, все иссле- дуемые экстракты оказывают ингибирующее влияние на сокращения гладкомышечных клеток.

При исследовании влияния растительных экстрактов на кинетику холинергической реакции на фоне бария хлорида определили, что

ЭШБ и ЭГБ, по-видимому, оказывают бесконкурентное действие на холинорецепторы гладкой мускулатуры, ЭПШ уменьшает активность холинорецепторов по неконкурентному типу. При активации сократительных реакций, вызванных барием, ЭШБ и ЭПШ, оказывают бесконкурентное и неконкурентное влияние на хо-линорецепторы соответственно, тогда как ЭГБ увеличивает холинозависимый спазм. Вероятно, это обусловлено тем, что ЭГБ в меньшей степени ингибирует барийзависимые сокращения гладкой мускулатуры в сравнении с ЭШБ и ЭПШ. Таким образом, исследованные экстракты являются ингибиторами холинергической реакции, при этом механизмы их воздействия отличаются. Поэтому при одновременной активации сокращений гладкой мускулатуры, обусловленных активацией холинергических рецепторов и ионами бария, ЭШБ и ЭПШ сохраняют способность купировать спастические реакции, а ЭГБ не оказывают ингибирующего влияния. Вероятно, это обусловлено наличием в их составе комплекса различных биологически активных веществ.