Сравнительное изучение реактогенности и антигенной активности коммерческих адъювантов в составе эмульсионной вакцины против хламидиоза животных

Несмотря на то, что хламидии чувствительны к ряду антибактериальных препаратов, таких как тетрациклины, макролиды и фторхинолоны, особенности их жизненного цикла существенно снижают эффективность применения антибиотиков для лечения инфицированных животных на фермах в условиях вспышки заболевания. Поэтому для эффективной профилактики хламидиоза сельскохозяйственных животных обязательно использование средств специфической профилактики [5, 6].

Тем не менее, несмотря на разнообразие существующих средств профилактики хламидиоза, их усовершенствование и создание новых вакцин является актуальной задачей [7].

Доказано, что для повышения иммуногенности обязательным при создании инактивированных вакцин является использование масляных адъювантов [8, 9, 10]. Однако, стандарты надлежащей производственной практики, ограничивают использование ряда веществ и субстанций, а также продуктов из них произведенных, без соблюдения требований GMP, что практически исключает возможность производства собственных адъювантов и предполагает замену их на готовые продукты, произведенные по стандартам GMP.

Положение осложняется тем, что почти все такие адъюванты являлись импортируемыми из-за рубежа продуктами и в настоящее время требуется их замещение на аналоги. Поэтому подбор новых адъювантов для создания и повышения качества вакцин на сегодняшний день является актуальной задачей.

Целью исследования явилось сравнительное изучение реактогенности и антигенной активности коммерческих адъювантов в составе эмульсионной вакцины против хламидиоза животных.

Условия, материалы и методы. Исследовательская работа проходила на базе лаборатории хламидийных инфекций ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Оценка реактогенности вакцин проводилась ежедневно, в течение первых 10 суток после иммунизации. В ходе проведения клинических осмотров животных фиксировались и учитывались: общее состояние, температура тела, аппетит животных, переносимость вакцин.

Антиген для создания экспериментальных вакцин был изготовлен из следующих штаммов: штамм Chlamydia psittaci «АМК-16», штамм Chlamydia psittaci «250» и штамм Chlamydia psittaci «РС-85».

Путем эмульгирования антигена с адъювантами при соответствующих режимах в лабораторных условиях было изготовлено шесть экспериментальных эмульсионных вакцинных препарата.

Адъюванты, для эмульгирования с антигеном, были взяты в различных пропорциях, соответственно их характеристикам:

• -    «БС-50» эмульгировали с антигеном в соотношении 50/50;

• - «БС-60» эмульгировали с антигеном в

соотношении 60/40;

• - «БС-70» эмульгировали с антигеном в

соотношении 70/30;

• -    «CORALVAC RZ 506» эмульгировали с антигеном в соотношении 60/40;

• -    «CORALVAC RZ 528» эмульгировали с антигеном в соотношении 70/30;

• -    «МЛА-70» эмульгировали с антигеном в соотношении 70/30.

Вакцины представляли собой обратную эмульсию типа «вода в масле».

Оценка антигенной активности вакцин проводилась в реакции связывания комплемента (РСК). Для этого 28 морских свинок разделили на семь групп по четыре животных в каждой: шесть экспериментальных групп и одна контрольная (контрольной группе не вводились препараты). Всех животных иммунизировали экспериментальными вакцинами внутримышечно в область внутренней поверхности бедра в дозе 0,5 см3.

Серологические исследования проводили в РСК на 30, 60 и 90, 120 и 150 сутки после иммунизации морских свинок.

Серологические исследования проводили с применением диагностической тест-системы: «Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных» (г. Казань). Технологические режимы постановки РСК соответствовали инструкции используемого диагностикума.

Результаты и обсуждение . В ходе проведения ежедневных клинических осмотров иммунизированных морских свинок никаких патологий у животных шести групп выявлено не было, животные были активны и не отказывались от корма. На протяжение двух недель, после введения вакцин, у некоторых иммунизированных животных наблюдали небольшие припухлости в месте введения биопрепаратов, которые полностью рассасывались к 12-15 суткам, что является допустимым для эмульсионных вакцин.

В таблице 1 представлены результаты постановки реакции связывания комплемента с сыворотками крови морских свинок, полученных на 30, 60, 90, 120 и 150 сутки после иммунизации экспериментальными вакцинами на основе различных адъювантов.

Таблица 1 – Результаты исследований сывороток крови вакцинированных морских свинок в РСК

Номер группы	Адъювант	Номер животного	Титр антител в РСК
			30 сут	60 сут	90 сут	120 сут	150 сут
1	2	3	4	5	6	7	8
1	БС-50	1	1:20	1:20	1:40	1:10	1:10
		2	1:20	1:20	1:20	1:20	1:20
		3	1:20	1:80	1:20	1:20	1:10
		4	1:80	1:40	1:40	1:40	1:20
Средний титр антител			1:35	1:40	1:30	1:22,5	1:15
2	БС-60	5	1:80	1:20	1:20	1:10	1:10
		6	1:80	1:80	1:80	1:40	1:40
		7	1:20	1:40	1:20	1:20	1:10
		8	1:20	1:40	1:80	1:80	1:80
Средний титр антител			1:50	1:45	1:50	1:37,5	1:35
3	БС-70	9	1:20	1:10	1:10	1:10	1:10
		10	1:20	1:20	1:40	1:40	1:20
		11	1:20	1:20	1:20	1:20	1:20
		12	1:40	1:80	1:40	1:20	1:10
Средний титр антител			1:25	1:32	1:27	1:22,5	1:15

Продолжение Таблицы 1

1	2	3	4	5	6	7	8
4	«CORALVAC RZ 506»	13	1:10	1:40	1:20	1:20	1:10
		14	1:10	1:10	1:10	1:5	1:5
		15	1:20	1:40	1:40	1:20	1:10
		16	1:10	1:20	1:20	1:10	1:10
Средний титр антител			1:12,5	1:27,5	1:22,5	1:13,7	1:8,7
5	«CORALVAC RZ 528»	17	1:5	1:20	1:10	1:5	1:5
		18	1:5	1:40	1:40	1:20	1:5
		19	1:10	1:40	1:40	1:20	1:10
		20	1:10	1:10	1:10	1:5	1:5
Средний титр антител			1:7,5	1:27,5	1:25	1:12,5	1:6,2
6	«МЛА-70»	21	1:80	1:80	1:80	1:80	1:40
		22	1:20	1:20	1:20	1:20	1:20
		23	1:80	1:80	1:80	1:40	1:40
		24	1:20	1:40	1:20	1:20	1:20
Средний титр антител			1:50	1:55	1:50	1:40	1:30

Как видно из таблицы 1, на 30 сутки после вакцинации животных экспериментальными сериями вакцин, сыворотки крови всех морских свинок реагировали со специфическим хламидийным антигеном в РСК. Однако следует отметить, что их концентрация в крови иммунизированных животных разных групп значительно отличалась.

В группах морских свинок, иммунизированных вакцинами, изготовленными из адъювантов «БС-50», «БС-70», «CORALVAC RZ 506», «CORALVAC RZ 528» и «МЛА-70» максимальная концентрация комплементсвязыва-ющих антител была выявлена на 60 сутки после вакцинации. В первой группе на второй месяц после вакцинации уровень противохла-мидийных антител находился в пределах титров от 1:20 до 1:80. Далее наблюдали плавное снижение их концентрации. К 90 суткам исследования концентрация хламидийных иммуноглобулинов варьировалась в пределах титров 1:20 – 1:40. Минимальная концентрация специфических хламидийных антител в сыворотках крови животных была выявлена на 150 сутки после вакцинации и варьировалась в пределах титров от 1:10 до 1:120.

Во второй группе животных иммунизированных вакциной, изготовленной с применением адъюванта «БС-60» максимальные значения титров специфических противохлами-дийных антител были выявлены на 30 и 90 сутки после вакцинации и варьировались в пределах титров от 1:20 до 1:80. Концентрация комплементсвязывающих антител на 150 сутки после вакцинации находилась в пределах титров 1:10 – 1:80.

В третьей группе животных (адъювант «БС -70») уровень хламидийных антител на 60 сутки находился в пределах титров 1:10 – 1:80. Далее концентрация специфических иммуноглобулинов начала снижаться и к 150 суткам после вакцинации варьировалась в пределах титров 1:10 – 1:20.

Наименьшие уровни специфических противохламидийных антител на протяжении всего исследования были зафиксированы в группах морских свинок, иммунизированных вакцинами с адъювантами серии «CORALVAC RZ». В обеих группах на 60 сутки после вакцинации концентрация проти-вохламидийных иммуноглобулинов находилась в пределах титров 1:10 – 1:40. Далее концентрация хламидийных антител в обеих группах плавно снижалась. В четвертой группе морских свинок, иммунизированных вакциной, изготовленной с применением адъюванта «CORALVAC RZ 506» уровень комплемент-связывающих антител на 120 сутки варьировался в пределах титров 1:5 – 1:20. К 150 суткам концентрация противохламидийных антител в сыворотках крови иммунизированных животных еще снизилась и находилась в пределах титров 1:5 – 1:10.

В пятой группе лабораторных животных (адъювант ««CORALVAC RZ 528») концентрация специфических иммуноглобулинов на 120 и 150 сутки после вакцинации находилась в пределах титров 1:5 – 1:20 и 1:5 – 1:10 соответственно.

В шестой группе морских свинок, иммунизированных биопрепаратом, изготовленным из эталонного адъюванта «МЛА-70» были выявлены самые максимальные титры специфических противохламидийных антител. Их концентрация, на протяжение всего исследования находилась в пределах титров 1:20 – 1:80. Максимальный титр был выявлен на 60 сутки после вакцинации. Далее концентрация специфических антител снижалась. На 150 сутки после вакцинации уровень специфических антител варьировался в пределах титров от 1:20 до 1:40.

На рисунке 1 представлены средние титры комплементсвязывающих противо-хламидийных антител по группам вакцин, изготовленных с применением адъювантов серии БС и эталонного адъюванта «МЛА-70».

Рисунок 1 – Динамика накопления комплементсвязывающих хламидийных антител в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных эталонной вакциной и экспериментальными биопрепаратами на основе адъюванта серии «БС»

Из рисунка 1 видно, что среди вакцин, изготовленных с применением адъювантов серии «БС», самые низкие средние титры специфических хламидийных антител были выявлены в группе животных, иммунизированных препаратом на основе адъюванта «БС-70». На 30 сутки после иммунизации средний титр антител составил 1:25. К 60 суткам был выявлен максимальный уровень специфических хламидийных антител, который равнялся 1:32. Последующие три месяца наблюдали снижение уровня специфических иммуноглобулинов. На 90, 120 и 150 сутки исследования средние титры противохламидийных антител были равны 1:27, 1:22,5 и 1:15 соответственно.

В группе «БС-50» показатели средних титров антител на протяжение первых 90 суток после введения биопрепарата были немного выше и равнялись 1:35 на 30 сутки, 1:40 на 60 сутки и 1:30 на 90 сутки. На протяжении последующих двух месяцев средние титры антител находились в пределах 1:22,5 и 1:15 на 120 и 150 сутки соответственно.

В группах морских свинок, иммунизированных вакцинами, изготовленными из адъювантов «БС-60» и «МЛА-70» на протяжение всего исследования уровень специфических противохламидийных антител был значительно выше, чем в группах животных иммунизированных вакцинами, изготовленными с применением адъювантов «БС-50» и «БС -70». На 30 сутки после введения биопрепаратов в обеих группах средний титр антител равнялся титру 1:50. На 60 сутки после вакцинации в группе морских свинок иммунизированных вакциной с адъювантом «БС-60» средний титр составил 1:45, тогда как в группе животных иммунизированных вакциной с адъювантом «МЛА-70» средний титр составил 1:55. На третий месяц после иммунизации средние титры специфических антител в группах «БС-60» и «МЛА-70» были равны 1:50. К 120 суткам средние титры комплементсвязываю-щих антител в группе «БС-60» имели значение 1:37,5, а в группе «МЛА-70» 1:40. На 150 сутки исследования средний титр специфических иммуноглобулинов в обеих группах снизился, но все равно оставался на достаточно высоком уровне, а именно 1:35 в группе «БС-60» и 1:30 в группе «МЛА-70».

На рисунке 2 представлены средние титры специфических противохламидийных антител в группах лабораторных животных, иммунизированных вакцинами, изготовленными с применением адъювантов CORALVAC RZ 528», «CORALVAC RZ 506» и эталонного адъюванта «МЛА-70».

Рисунок 2 – Динамика накопления комплементсвязывающих хламидийных антител в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных эталонной вакциной и экспериментальными биопрепаратами на основе адъюванта серии «CORALVAC RZ»

На протяжение 150 суток исследования концентрация комплементсвязывающих хламидийных антител в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных экспериментальными вакцинами, изготовленными с применением адъювантов серии «CORALVAC RZ была значительно ниже аналогичных показателей антигенной активности вакцины, изготовленной с использованием эталонного адъюванта «МЛА-70».

Из рисунка 2 можно сделать вывод, что значительной разницы в средних титрах хламидийных антител в группах животных привитыми биопрепаратами на основе адъювантов «CORALVAC RZ 506» и «CORALVAC RZ 528». На 60 сутки был выявлен максимальный средний титр антител в обеих группах -1:27,5. На протяжении последующих трех месяцев концентрация специфических иммуноглобулинов в крови иммунизированных животных плавно снижалась. Средний титр антител на 90 сутки равнялся 1:22,5 и 1:25, на 120 сутки 1:13,7 и 1:12,5, а к 150 суткам исследования были зафиксированы минимальные значения — 1:8,7 и 1:6,2 в группах «CORALVAC RZ 506» и

«CORALVAC RZ 528» соответственно.

Выводы. Как показали проведенные исследования, изготовленные экспериментальные серии хламидийных вакцин на основе адъювантов серии «БС», «CORALVAC RZ» и эталонного адъюванта «МЛА-70» являются ареактогенными и обладают способностью вызывать выработку противохламидийных антител в крови лабораторных животных после их иммунизации.

При оценке антигенной активности экспериментальных серий эмульсионных вакцин было установлено, что наиболее высокий титр специфических антител наблюдался в группе животных, иммунизированных вакциной, изготовленной на основе адъюванта «БС-60».

Полученные результаты говорят о том, что адъювант «БС-60» оказался наиболее оптимальным из всех исследуемых препаратов, соответствующих требованиям надлежащей производственной практики. Поэтому в дальнейшем, изготовление экспериментальных серий вакцины против хламидиозадля доклинических и клинических испытаний, рекомендуется проводить с использованием адъюванта «БС-60».