Стабильность штаммов листерий

Автор: Балясова Н.А., Алимов А.М.

Журнал: Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана @uchenye-zapiski-ksavm

Статья в выпуске: 2 т.230, 2017 года.

Бесплатный доступ

Изучены биологические свойства вакцинного штамма АУФ и патогенных штаммов листерий после длительного хранения в лиофилизированном виде и в полужидком агаре. Показано сохранение жизнеспособности листерий при хранении в лиофилизированном виде под азотом в течение 25 лет, а в жидких средах в течение 6-7 лет без существенного изменения основных свойств.

Вакцинный штамм, возбудитель листериоза, листерии, стабильность свойств, хранение

Короткий адрес: https://sciup.org/14288942

IDR: 14288942

Текст научной статьи Стабильность штаммов листерий

Листериоз – инфекционное заболевание, имеет широкое распространение, поражает многие виды животных и представляет серьезную угрозу здоровью людей [1, 2]. Клиническое проявление данного заболевания имеет сходство с другими инфекционными болезнями, поэтому диагностика листериоза связана с определенными трудностями [6]. Возбудитель L.monocytogenes – является Грам положительной, полиморфной палочкой, не образующей спор и капсул, подвижные [7]. Не смотря на это, листерии в объектах окружающей среды способны не только длительно сохранять жизнеспособность, но и размножаться [5].

В микробиологической практике, зачастую, возникает необходимость хранения отдельных штаммов. При этом важное значение имеет сохранение биологических свойств эпизоотических и вакцинных штаммов, которые при длительном хранении могут менять-ся[3,4,8,9].

В связи с этим, изучение с культурально-морфологических и патогенных свойств различных штаммов листерий является актуальной проблемой.

С учетом вышеизложенного, целью данной работы является изучение отдельных свойств листерий после длительного хранения.

Методы и материалы. В опытах использовали: вакцинный штамм (L.monocytogenes) – АУФ и эпизоотические штаммы- 9-127, 9-128, 9-129, 9-130, 9-72, 1194 – первого и второго серотипов, выделенные от различных животных в разных регионах страны.

Вакцинный штамм АУФ и вышеперечисленные эпизоотические штаммы поддерживали на среде Китта-Тароци под вазелиновым маслом, путем периодических пересевов.

Кроме того, вакцинный штамм АУФ хранили в лиофилизированном состоянии во флаконах заполненных азотом.

Лиофилизация была произведена в сахарозо-желатиновой среде. Жидкие и лиофилизированные штаммы листерий хранили при t = +2..4°С в условиях холодильника.

Исследуемые штаммы освежали путем посева в мясопептонный бульон. Затем производили посевы на питательные среды (с гидролизатом лактоальбумина, бульон и агар Хоттингера).

Изучали морфологические свойства культур путем микроскопирования мазков, окрашенных по Граму. Ферментативную активность определяли на средах Гисса.

Для определения патогенности производили заражение белых мышей массой 1618г.

Результаты исследований. Вакцинный штамм листерий, хранившийся в лиофилизированном состоянии в течении 25 лет, сохранил жизнеспособность. Культуры листерий в полужидком агаре Китта-Тароци под вазелиновым маслом, при хранении в температуре +2…4°С, сохраняли жизнеспособность в течении 6-7 лет.

После пересева одно- и двухсуточные культуры листерий по Граму окрашивались положительно, имели форму полиморфных палочек с закругленными концами. Спор и капсул не образовывали. При рассмотрении в висячей капле бактерии проявляли подвижность. На МПА через 20…40 часов инкубации при t=37°С появлялись мелкие прозрачные колонии. При культивировании в жидких питательных средах, помутнение наблюдалось через 12-18 часов инкубации при t=+37°С. Результаты исследований свойств штаммов после освежения приведены в таблице 1.

Таблица 1- Культурально-морфологические и антигенные свойства штаммов листерий после длительного хранения

№ п/п	Показатели			Наименование штаммов
№ п/п	Показатели	АУФ	9-129	1194	9-127	9-128	9-130	9-72
1.	Окраска по Граму	+	+	+	+	+	+	+
2.	Подвижность	+	+	+	+	+	+	+
3.	Рост в МПБ	Помутнение
4.	Рост в МПА	Мелкие прозрачные колонии
5.	Агглютинабельность полиспецифической листериозной сывороткой	+	+	+	+	+	+	+
6.	Агглютинабельность сывороткой 1-го серотипа	+	-	-	+	-	-	-
7.	Агглютинабельность сывороткой 2-го серотипа	-	+	+	-	+	+	+
8.	Конъюнктивальная проба на морских свинках	+	+	+	+	+	+	+
9.	Доза для белых мышей, млн. микр.клет.	2 млрд.	20	20	25	30	30	20

Результаты изучения сахаролитических лице 2.

свойств штаммов листерий приведены в таб-

Таблица 2- Ферментативная активность штаммов листерий

№ п/п	Наименование субстратов	Наименование штаммов
№ п/п	Наименование субстратов	АУФ	9-129	1194	9-127	9-128	9-130	9-72
1.	Глюкоза	+	+	+	+	+	+	+
	Рамноза	-	-	-	-	-	-	-
	Левулеза	+	+	+	+	+	+	+
	Сахароза	-	-	-	-	-	-	-
	Салицин	+	+	+	+	+	+	+
	Рабиноза	+	+	+	+	+	+	+
	Дульцит	-	-	-	-	-	-	-
	Инулин	-	-	-	-	-	-	-
	Сарбит	-	-	-	-	-	-	-
2.	Каталазная активность	+	+	+	+	+	+	+
3.	Образование сероводорода в бульоне Хаттингера	+	+	+	+	+	+	+
4.	Гемолитическая активность	+-	+	+	+	+	+	+

Минимальная смертельная доза для свежих эпизоотических штаммов, при подкожном способе заражения составила 1-2 млн. микробных клеток. Однако, у культур, после длительного хранения, патогенность значительно снижалась, и минимальная смертельная доза варьировала в пределах 20…30 млн. микробных клеток. Однако после 2-3 пассажей через организм белых мышей вирулентность эпизоотических штаммов повышалась и составила 2-3 млн. микробных клеток.

Белые мыши, инфицированные подкожно вакцинным штаммом листерий АУФ в дозе 1 млдр. микробных клеток, не погибали.

Обсуждение результатов. Результат проведенных исследований свидетельствует о длительном сохранении жизнеспособности штаммов листерий при хранении в лиофилизированном состоянии под азотом, а так же при хранении в полужидком агаре Китта-Тароци под вазелиновым маслом при t=+2…4°С.

Результаты определения их культурально-морфологических свойств показали, что основные признаки листерий после длительного хранения не изменились . Однако, вирулентность культур, после освежения, оказалось значительно ниже исходных показателей (1-2 млн. микробных клеток). Вирулентность этих культур восстанавливалась после двух и трех пассажей через организм белых мышей.

Заключение . Таким образом, полученные данные свидетельствуют о длительном сохранении жизнеспособности культур листерий при хранении в полужидкой питательной среде и лиофилизированном виде в условиях холодильника.

канд. биол. наук. –Казань. -1974.-28с.

Резюме

Список литературы Стабильность штаммов листерий

Бакулов, И.А., Листериоз как пищевая инфекция./Бакулов И.А. Васильева Д.А.-Ульяновск, 1991-36с.
Бакулов, И.А. Основные вехи истории изучения листериоза животных и людей./И.А. Бакулов.//Мат-лы межд. симп. «Листерио на рубеже тысячалетий». -Покров 1999-43-47с.
Алимов, А.М. Изучение аминокислотного обмена и иммунохимии листерий различной вирулентности: автореф. дисс. канд. биол. наук. -Казань. -1974.-28с.
Алимов, А.М. Сравнительная оценка питательных сред при культивировании листерий штамма АУФ./А.М. Алимов, О.А. Котылев.//Ученые записки КГВИ. Том 119.-Казань.-1975.-158-162с.
Бакулов, И.А. Листерии и листериоз: монография./Бакулов И.А., Васильева Д.А., Колбасов Д.В., Кольпикова Т.И., Селянинов Ю.О., Егорова И.Ю., -Ульяновск: УГСХА.-2008.-168с.
Поздеев, О.К. Медицинская микробиология. -М.:ГЭОТАР-Медиа, -2006.-302-310с.
Тартаковский, И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика.//Медицина для всех, -2002.-200с.
Середа, А.Д., Иммунитет при листериозе./А.Д. Середа, В.М. Котляров, И.А.Бакулов. Ж-л микробиол. -2000; 5:98-102с.
Омаров, С.М. Питательные среды для выделения и накопления листерий./С.М. Омаров, Ш.М. Меджидов Ш.М., Э.М. Ахметов.//ЖМЭИ, -2000. 1:45-48с.

Еще

Статья научная