Стандартизация сиропа одуванчика лекарственного как перспективного лекарственного препарата

Одуванчик лекарственный ( Taraxacum offi cinale Wigg.) – многолетнее травянистое растение, имеющее широкий ареал распространения [6; 7]. В настоящее время в Государственную Фармакопею СССР XI издания включены лишь корни одуванчика лекарственного. Данное сырье входит в состав желудочных и аппетитных сборов, используется в качестве средства, стимулирующего аппетит [2; 5]. В то же время, за рубежом находит применение трава одуванчика лекарственного [4]. Кроме того, данный вид сырья входил в Российскую фармакопею до VII издания включительно [4]. В настоящее время имеются результаты исследований российских и зарубежных ученых, доказывающие наличие у травы одуванчика лекарственного таких свойств, как желчегонное, диуретическое, противовоспалительное, гипохолестеринемическое и др. [5; 6]. Благодаря этим и многим другим свойствам трава одуванчика лекарственного до сих пор применяется в народной медицине многих стран [1; 5].

Для введения лекарственного препарата в медицинскую практику необходима разработка разделов фармакопейной статьи «Качественный анализ» и «Количественное определение» [4]. Таким образом, разработка методик стандартизации лекарственных форм, в том числе сиропов,

на основе травы одуванчика лекарственного является актуальным вопросом. Сироп – удобная в применении лекарственная форма, которая широко используется в педиатрической практике. Сиропы на основе сорбита и фруктозы могут также применяться пациентами, страдающими сахарным диабетом. Кроме того, в данном случае находят медицинское применение до 80% фитомассы растения, которые до настоящего времени не использовались.

Цель исследования: разработка и апробация методик качественного анализа и количественного определения действующих веществ в сиропе травы одуванчика лекарственного.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектом настоящих исследований стали образцы сиропов на основе травы одуванчика лекарственного, приготовленные на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета. В качестве основы сиропа использовались сахароза, фруктоза и сорбит. В качестве действующего компонента в сироп добавляли настойку травы одуванчика лекарственного на 40% и 70% спирте этиловом (Приоритет «Сироп одуванчика лекарственного», заявка № 2014133928 от 18.08.2014).

Для определения состава биологически активных соединений (БАС) использовали метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ». Пластинку предварительно активировали в сушильном шкафу при температуре 100оС в течение 40 мин. Перед нанесением образцов на пластинку сиропы под- вергали пробоподготовке, разработанной ранее [3]. 5 мл сиропа помещали в делительную воронку, добавляли 1 каплю ледяной уксусной кислоты (ЛУК), тщательно перемешивали, добавляли 5 мл ацетона и экстрагировали в течение 10 мин. Ацетоновый слой отделяли и упаривали на водяной бане досуха. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл 96% спирта этилового. Полученный раствор наносили на линию старта микропипеткой в объеме 0,05 мл. Разделение проводили в вертикальной камере, которую предварительно насыщали не менее 24 ч смесью растворителей бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:2). Полученные хроматограммы высушивали и просматривали в ультрафиолетовом свете при λ = 254 нм и λ = 366 нм, после чего обрабатывали свежеприготовленным щелочным раствором диазобензолсульфокислоты (ДСК) и раствором фосфорно-молибденовой кислоты (ФМК). В качестве образцов-свидетелей выступали настойка травы одуванчика лекарственного на 70% спирте этиловом, государственный стандартный образец (ГСО) лютеолина и ГСО рутина.

Спектральные характеристики сиропов определяли методом спектроскопии на спектрофотометре Specord 40 (Analytik Jena). Для приготовления раствора А 5 мл сиропа помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили водой очищенной до метки. 2 мл полученного раствора А помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 96% (раствор Б).

Количественное определение суммы фенольных соединений проводили методом дифференциальной спектрофотометрии. Для приготовления испытуемого раствора 2 мл раствора помещали в мерную колбу на 25 мл, добавляли 3 мл раствора комплексообразователя – алюминия (III) хлорида, и доводили спиртом этиловым 96% до метки. Пересчет проводили на ГСО лютеолина, в качестве аналитической длины волны использовали λ = 365 нм [8].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведения ТСХ-анализа, были получены хроматограммы (рис. 1).

Во всех образцах, содержащих извлечение из травы одуванчика лекарственного, обнаруживается доминирующая зона вещества с Rf = 0,40. Также в сиропах и настойке травы одуванчика лекарственного обнаруживается зона флавоноида рутина с Rf = 0,48 и флавоноида лютеолина с Rf = 0,73. Кроме того, другие БАС, присутствующие в настойке одуванчика лекарственного, также обнаруживаются в образцах сиропа.

Таким образом, использованная методика пробоподготовки может применяться для стандартизации сиропов на основе настойки травы одуванчика лекарственного.

В результате проведения спектрального анализа сиропов травы одуванчика лекарственного получены электронные спектры, имеющие идентичные максимумы поглощения с настойкой травы одуванчика лекарственного, а также с извлечением из травы одуванчика лекарственного (рис. 2).

Согласно полученным данным, на электронных спектрах сиропов обнаруживается максимум при λ = 330±2 нм и «плечо» при λ = 290±2 нм. Таким образом, в сиропах травы одуванчика лекарственного обнаруживаются те же БАС, которые вносят основной вклад в электронный спектр водно-спиртового извлечения из травы одуванчика лекарственного, а также настойки на ее основе.

Количественное определение суммы веществ фенольной природы проводили методом дифференциальной спектрофотометрии. Для расчета количественного содержания суммы фенольных соединений в исследуемых образцах сиропов использовали формулу:

A

Б

Рис. 1. Хроматограмма сиропа травы одуванчика лекарственного (бутанол - уксусная кислота - вода 4:1:2).

А – вид хроматограммы при УФ-свете λ = 254 нм; Б – вид хроматограммы при УФ-свете λ = 366 нм;

В – вид хроматограммы после обработки реактивом ДСК;

Г – вид хроматограммы после обработки реактивом ФМК

Обозначения: 1 – сироп 5% на фруктозе; 2 – сироп 10% на фруктозе; 3 – сироп 5% на сахарозе; 4 – сироп 10% на сахарозе; 5 – сироп 5% на сорбите; 6 – сироп 10% на сорбите; 7 – ГСО лютеолина; 8 – ГСО рутина; 9 – настойка травы одуванчика лекарственного на 70% спирте этиловом

Г

Известия Самарского научного центра Российской академии наук, т.17, №2(2), 2015

Рис. 2 . Электронные спектры препаратов на основе травы одуванчика лекарственного:

А – электронный спектр извлечения из травы одуванчика лекарственного; Б – электронный спектр сиропа 10% травы одуванчика лекарственного; В – электронный спектр настойки травы одуванчика лекарственного на 70% спирте этиловом

D ∗ 25 ∗ 25 X =           ,

464 ∗ 5 ∗ 2

где D – оптическая плотность исследуемого раствора; 464 – удельный показатель поглощения (Е^1%_{1 см}) комплекса лютеолина с алюминия (III) хлоридом при аналитической длине волны λ = 365 нм.

Содержание суммы веществ фенольной природы в 10% сиропах травы одуванчика лекарственного, согласно полученным результатам, должно составлять не менее 0,015%. Содержание суммы веществ фенольной природы в 5% сиропах травы одуванчика лекарственного – не менее 0,0075%.

На основании полученных результатов можно сделать вывод, что метод дифференциальной спектрофотометрии может использоваться для количественного определения суммы фенольных соединений в сиропах на основе сахарозы, фруктозы и сорбита.

ВЫВОДЫ

В рамках фитохимических исследований был разработан состав и технология получения сиропа травы одуванчика лекарственного.

Разработана методика качественного анализа сиропа травы одуванчика лекарственного методом ТСХ и спектроскопии.

Методика количественного определения суммы фенольных соединений, разработанная для настойки травы одуванчика лекарственного, адаптирована для лекарственной формы – сиропа одуванчика лекарственного.

Рекомендуемое содержание суммы веществ фенольной природы в 10% и 5% сиропе одуван- чика лекарственного должно составлять не менее 0,015% и 0,0075% соответственно.

В качестве наиболее перспективной лекарственной формы был выбран 10% сироп из настойки травы одуванчика лекарственного на 70% спирте этиловом.