Структурный анализ инкапсулированных рецепторов биологически активных точек животных

Введение. В последние тридцать лет в отечественной и зарубежной литературе огромное внимание уделяется исследованиям анатомо-гистологического строения участков кожного покрова, имеющих пониженное электрическое сопротивление, где и располагаются биологически активные точки (БАТ). Многие авторы обращают внимание, что основой активных точек являются нервы и их окончания. Так, В.А. Рябуха, А.В. Рябуха, О.Л. Самусенко (2007), Т.В.Миллер (2008), используя макро- и микроскопические методы исследования, обнаружили в зонах акупунктуры многочисленные нервные стволы и их разветвления [3].

Цель исследований. Изучить структурный анализ телец Фатер-Пачини (ФПТ) у животных в местах проекции биологически активных точек, лишенных и покрытых волосяным покровом.

Материал и методика исследований. Экспериментальные исследования проводились на крупном рогатом скоте (голштинофризской породы), собаках (такса, той-терьер и беспородные) и трупах собак. Подбор животных проводили с учетом породной принадлежности, возраста и пола. Для исследований брали клинически здоровых половозрелых животных: крупный рогатый скот – старше 24 месяцев; собаки – старше 18 месяцев, так как в этом возрасте прекращается рост и развитие скелета.

Для определения анатомо-топографического расположения БАТ на собаках и трупах собак использовали прибор для поиска и стимуляции точек акупунктуры и нервно-мышечных структур «Светлана РТ-05» [2]. У крупного рогатого скота использовали аппараты «ДиаДЭНС-ПК» с модифицированным пассивным электродом [1, 3].

Для гистологического и гистохимического исследования БАТ проводили биопсию кожи вместе с подкожной жировой клетчаткой и фасциями, после чего фиксировали в 10%-м водном растворе нейтрального формалина. После из подготовленного материала, кусочков тканей и кожи, изготавливали срезы на замораживающем микротоме с термоэлектрическим охлаждающим столиком ТОС-1 толщиной 5–10–15–20–30 мкм и парафиновые срезы на санном микротоме «C. Reichertwien» толщиной 5–7 мкм. Серийные срезы окрашивали гематоксилином и эозином, коллагеновые волокна методом Ван Гизона, эластические волокна – по Вейгерту, импрегнацию элементов микроглии – по В.К. Белецкому.

Для электронной микроскопии проводили биопсию кожи, отделив под микроскопом ее верхний слой размером 1 мм². Затем 2–4 часа материал фиксировали в забуферном 2,5%-м растворе глутаральдегида и промывали в фосфатном буфере. Фиксировали в 1%-м забуферном растворе осмиевой кислоты (OsО 4 ) и промывали в 50°-м спирте. Далее проводили обезвоживание спиртом и ацетоном, перед пропиткой смолами образцы помещали в пропиленоксид. Окрашивали 0,5%-й раствор уранилацетата в 70°-м спирте и проводили заливку в желатиновых капсулах эпоксидной смолой (смесь эпона 812 и аралдита М с отвердителем метилэндиновым ангидридом). На ультрамикротоме готовили полутонкие срезы толщиной 0,5–2,0 мкм. Контрастирование проводили цитратом свинца. Окрашивали толуидиновым синим.

Подсчет количества морфологических структур на единице площади среза проводили с использованием аппаратно-программного комплекса, состоящего из программного обеспечения для количественного анализа ВидеоТесТ - Морфология 5.0, окулярной цифровой камеры DCM 130, светового микроскопа «Микромед-1» и персонального компьютера. Измерения гистологических структур кожи проводили на изображениях стандартного размера в формате JPEG, полученных при съемке парафиновых срезов. Для калибровки использовались стандартные отрезки с известной величиной (объект-микрометр), полученные при соответствующих увеличениях микроскопа. Применяли способ количественного визуального сравнения (Стефанов С.Б., Кухаренко Н.С., 1988) с применением окулярной вставки, предложенной Г.Г. Автандиловым (1984). Для статистической обработки количественных данных применяли методы вариационной статистики [1-3].

Результаты исследований и их обсуждение. Изучая строение ФПТ в местах залегания БАТ, лишенных и покрытых волосяным покровом, был выявлен ряд особенностей.

У собак в точках акупунктуры, лишенных волосяного покрова, ФПТ имеют овальную форму и достигают: ширина 78,80±3,55 мкм, длина 157,08±1,95 мкм, а в точках акупунктуры, покрытых волосяным покровом, ширина 277,60±1,30 мкм, длина 592,30±2,54 мкм. С одной стороны к ним подходят миелонизированные нервные волокна. Диаметр входящих нервных волокон в ФПТ во всех биологически активных точках в среднем равен 20,50±1,30 мкм, а входящие нервные волокна в виде расширенного участка с шляпообразными отростками имеют размеры 38,70±2,00 мкм.

У крупного рогатого скота в БАТ, лишенных волосяного покрова, инкапсулированные нервные окончания ФПТ лежат в сосочковом слое дермы и в среднем имеют ширину 175,5±6,67 мкм и длину 300,73±9,44 мкм. Инкапсулированные нервные окончания в БАТ, покрытых волосяным покровом, располагаются на границе сетчатого и сосочкового слоев и имеют ширину 496,60±6,88 мкм, длину 824,63±5,36 мкм.

В результате накопленных исследований определено, что иннервация биологически активных точек собак и крупного рогатого скота, независимо от вида и породной принадлежности, осуществляется за счет наличия в них нервных окончаний.

Инкапсулированные нервные окончания наиболее чаще встречаются там, где меньше волосяных фолликул, и в виде телец Фатер-Пачини. Причем в биологически активных точках, расположенных в этих областях, они имеют небольшой диаметр, но в количественном составе их больше, чем в точках акупунктуры, содержащих большое количество волосяных фолликулов. Диаметр их значительно увеличен, а тельца Фатер-Пачини имеют овальную форму.

Во всех БАТ в инкапсулированных тельцах нервные волокна в проксимальной части капсулы теряют миелин. В тельцах Фатер-Пачини немиелизированное нервное волокно вблизи дистального полюса заканчивается небольшим булавовидным утолщением. В тельцах внешняя капсула выполнена в виде эллипса и состоит из протоплазматических оболочек, представленных в виде узких пластинок, расширяющихся в области ядра. Каждая оболочка состоит из нескольких клеток, чашеобразно наложенных друг на друга. В межкапсулярных пространствах содержится жидкость, где располагаются коллагеновые волокна, которые не позволяют растягиваться оболочке. Оболочки внешней капсулы являются продолжением переневрия и образуются из окружающей их соединительной ткани.

Формирование оболочек внешней капсулы за счет фибробластов и вхождения соединительнотканных волокон в наружную оболочку капсулы и наличие в капсуле коллагеновых волокон, являющихся соединительнотканными элементами, подтверждают соединительнотканное происхождение оболочек внешней капсулы. Окраска препаратов проводилась по Ван-Гизон и Вейгерту, четко выявляет волокнистые структуры соединительной ткани в наружных оболочках внешней капсулы.

При электронной микроскопии в проксимальной части капсулы телец Фатер-Пачини вокруг миелизированной части нервного волокна в дугообразном изгибе просматривается трубчатая структура, соприкасающаяся с краями клеток наружной капсулы. Пучки фибрилл коллагена образуют кольца вокруг нервного волокна по бокам от дугообразного изгиба, также пучки лежат параллельно нервному волокну. В дистальной части капсулы тела клеток наружной капсулы тесно прилегают друг к другу и образуют центральный узкий канал, заканчивающийся в области внутренней колбы. Внутри канала лежит пучок протофибрилл коллагена. В продольных срезах между периферическими клетками встречается гомогенное бесструктурное вещество.

Большинство фибрилл между оболочками внешней капсулы выглядят в виде стержней, расположенных под углом друг к другу. Между оболочками имеются ячейки различной ширины, заполненные капсулярной жидкостью, похожей на плазму крови. Эллипсоидная форма капсулы с заполненными капсульной жидкостью просветами представляет собой замкнутую элепстическую мембрану, стремящуюся держать свою форму за счет эластических волокон.

Внутри телец располагается внутренняя колба (хорошо окрашиваемая метиленовой синью, гематоксилин-эозином по Ван Гизон) и импрегнируется солями серебра за счет того, что в ней содержится белок. Внутренняя колба занимает среднее положение, а форма её зависит от протяженности и хода нервного волокна. Внутренняя оболочка очень плотная и четко выделяется на фоне оболочки внешней капсулы. Внутренняя колба представлена пластиной с ядрами, в районе нервного окончания располагается дифференциальная зона, состоящая из отростков клеток промежуточной зоны, их плазматические мембраны уплощены, за счет чего и увеличивается электронная плотность.

Внешняя капсула тельца Фатер-Пачини и внутренняя колба четко разделяются широким промежутком, где располагаются периферические отростки рецепторных клеток.

Заключение. Тельца Фатер-Пачини в количественном и качественном отношении более выражены в БАТ, лишенных волосяного покрова. В БАТ, покрытых волосяным покровом, телец, меньше, но объем их больше. Однако длина и ширина их относительно нейтральной кожи больше на 33,3 и 13,2 % соответственно. Телец Фатер-Пачини в точках акупунктуры больше, чем в нейтральной коже, по ширине и длине на 50,8 и 49,0 % соответственно.

Морфологическое строение инкапсулированных нервных окончаний имеет не случайное характерное состояние структурных образований, а носит определенную закономерность, присущую всем биологически активным точкам.