Тромбоцитарный гемостаз и его взаимосвязь с кортизолом и прогестероном у коров при беременности

Физиологический статус самок во время беременности, рост и развитие плода, подготовка организма матери к родам и лактации во многом сопряжены с состоянием тромбоцитарного звена гемостаза [4], который определяет реологические свойства крови и скорость её циркуляции по кровеносным сосудам, морфофункциональные особенности клеточных элементов, а также кровоснабжение тканей [7].

Состояние системы гемостаза и её изменения во время беременности являются результатом формирования в организме коровы-матери дополнительного круга кровообращения (маточно-плацентарного) [14]. В соответствии со сроком беременности и затратами фетоплацентарного комплекса в их организме возрастает активность органов кроветворения, увеличивается объем крови в циркуляторном русле [8], количество антикоагулянтов на фоне снижения уровня фибринолитических факторов. При этом функционирование тромбоцитарного звена гемостаза определяет характер течения беременности и развитие физиологических систем плода путем регуляции притока крови к матке и плаценте, влияя на его обеспеченность кислородом [3, 10].

Как известно, беременность сопровождается существенными изменениями в гормональном статусе организма коров за счет повышения секреторной активности гипофиза, яичников и плаценты [9, 13]. В настоящее время имеются данные, что система гемостаза в организме матери, как при физиологической беременности, так и при гестозе взаимосвязана с уровнем гормонов. Так, биологические эффекты половых [11], тиреоидных гормонов [15] и кортизола [6] включают регуляцию реологических свойств крови и поддержание её оптимальной текучести в кровеносных сосудах.

Состояние системы гемостаза и её сопряженность с эффективностью, осложнениями беременности, здоровьем, ростом и развитием новорожденных давно привлекают внимание исследователей в области гуманной медицины [1, 2, 6, 14]. Однако данная проблема у сельскохозяйственных животных, в том числе и у крупного рогатого скота, практически не изучена, что и актуализирует рассматриваемую тему.

В связи с вышесказанным, целью нашей работы явилась сравнительная оценка состояния тромбоцитарного звена гемостаза у мясных и молочных коров в ходе подготовки их организма к родоразрешению и взаимосвязь его показателей с уровнем кортизола и прогестерона в крови.

Материал и методы исследований. Работа выполнена в 20182020 г.г на базе ТОО «Пшеничное» (Республика Казахстан, Костанайская область, Федоровский район). Объектом исследования служили коровы чернопестрой и аулиекольской пород, готовящиеся ко второму отелу, для осеменения которых использовали быков-производителей Абердин-ангусской породы путем вольной случки. В период исследований животные содержались беспривязно, на полу с подстилкой, с постоянным свободным доступом к кормам и воде [9, 10].

Для выполнения эксперимента из коров по породному признаку с учетом принципа сбалансированных групп было сформировано две группы (n=20): I группа – аулиекольская порода, II группа – чернопестрая [9, 10].

Кровь (материал исследований) брали у коров из подхвостовой вены вакуумным методом за 60 и 1-3 суток до предполагаемой даты родов. Показатели тромбоцитарного звена гемостаза определены на автоматическом гематологическом анализаторе «Sysmex, XS-500I» (Япония), в их состав входили следующие параметры: 1) PLT – абсолютное количество тромбоцитов (109/л); 2) MPV – средний объем тромбоцита (фл); 3) PDV – относительная ширина распределения тромбоцитов по объему, показатель анизоцитоза (фл); 4) PCN – тромбокрит (%); 5) P-LGR – число мегалотромбоцитов (%). Для определения концентрации гормонов использовали сыворотку крови и наборы готовых реактивов «Вектор-Бест», (г. Новосибирск, Россия), предназначенных для иммуноферментного анализа.

Результаты лабораторных исследований статистически обработаны методом вариационной статистики на ПК при использовании табличного процессора «Microsoft Ехсе1-2010».

Результат исследований. Клетками крови, играющими ведущую роль в процессах тромбообразования, являются тромбоциты. Большинство методик, позволяющих охарактеризовать их морфологические и функциональные особенности, трудоемки и трудно воспроизводимы. Поэтому в клинической практике наиболее часто используют тромбоцитарные индексы, которые определяются при помощи гематологического анализатора и входят в стандартный анализ крови. В большинстве современных исследований доказана их прогностическая и диагностическая значимость в оценке тромбоцитогенеза и агрегационной активности тромбоцитов [5]. Наиболее ярко выраженные сдвиги в тромбоцитарном звене гемостаза происходят в последнем триместре беременности и являются результатом подготовки организма матери к родам и возможной кровопотери [12].

Таблица 1 – Характеристика тромбоцитарного звена гемостаза в организме беременных коров (n=20), Х±Sх

Показатель	I группа (аулиекольская порода)		II группа (черно-пестрая порода)
	срок исследования перед родами, сут
	60	1-3	60	1-3
Тромбоциты (PLT), 109/л	323,60±5,14	285,60±2,74*1	256,40±12,90*2	194,50±15,02*1*2
Тромбокрит (PCN),%	0,31±0,02	0,29±0,01	0,25±0,012	0,22±0,02*2
Средний объем тромбоцита (MPV), фл	9,51±0,21	10,16±0,12*1	9,81±0,46	11,33±0,32*1*2
Число мегалотромбоцитов (P-LGR), %	15,45±0,31	17,98±0,25*1	12,43±0,65*2	14,42±0,28*1*2
Широта распределения PLT по объему (PDV), фл	9,17±0,35	10,54±0,32*1	7,72±0,33*2	9,04±0,29*1*2

Примечание: * ¹ ; * – р<0,05 по отношению к уровню «за 60 суток до родов» * ² – р<0,05 по отношению к I группе

При анализе тромбоцитарных показателей было выявлено, что их уровень, во-первых, определялся породой коров и соответственно направлением продуктивности (Таблица 1). Так, коровы аулиеколь-ской (мясного направления продуктивно- сти) породы превосходили своих аналогов молочного направления продуктивности (черно-пестрой породы) по величине определяемых параметров во все сроки исследования от 3,15 до 31,89 %. Наименьшие породные различия были выявлены по по- казателю «средний объем тромбоцита», они колебались в интервале 3,15–11,51%. Если исходить из того, что эффективность беременности сопряжена с использованием функциональных резервов в организме матери [1, 12], обеспечивающих вынашивание и развитие плода, то состояние тромбоцитарного звена гемостаза отражает адаптационные ресурсы коров, позволяющие при воздействии неблагоприятных факторов адекватно реагировать и предотвращать явления избыточной гиперкоагуляции. При этом мясные коровы, имеющие большую живую массу и соответственно объем крови, а также специфическую конституцию обладают большими функциональными резервами для поддержания гемостаза, чем молочные коровы.

Во-вторых, тромбоцитарное звено гемостаза в последнем триместре беременности изменялось по мере приближения даты родов (Таблица 1). Так, в крови коров, независимо от их породы, уменьшалось общее количество тромбоцитов: в I группе на 11,74 % (р<0,05), во II-ой – на 24,14%, что связано с увеличением объема крови в организме коровы-матери, укорочения времени жизни клеток в кровотоке в заключительный период гестации, как результат их повышенного использования в маточно-плацентарном круге кровообращения за счет возрастающих потребностей плаценты и плода. Это инициировало уменьшение уровня тромбокрита, величина которого отражала объемную долю PLT в составе крови. Убыль параметра к концу беременности, по сравнению с «за 60 суток до родов», составила 6,45 (I группа) и 12,00 % (II группа). Возрастание функциональной нагрузки на тромбоциты отразилось на их морфофункциональных характеристиках. Об этом свидетельствовало увеличение:

• -    величины среднего объема тромбоцитов. Прирост данного параметра у коров аулиекольской породы составил 6,83 %, черно-пестрой –15,49 %. В исследованиях [1] отмечено, что объем PLT зависит от содержания в них белков, в том числе и каталитических, и углеводов. Количество данных соединений сопряжено с их биологической активностью. Следовательно, по

мере приближения родов в крови животных росло количество тромбоцитов, склонных к реализации своих функций;

• -    числа мегалотромбоцитов, имеющих диаметр более 10 мкм, объем более 18 фл [14]: в I группе коров на 16,37 %, во II-ой – на 16,01 %. Данные клетки обладают значительным запасом гликогена, митохондрий и α-гранул [1], что влияет на их энергетический потенциал. Значит, в крови коров к родам возрастает количество тромбоцитов, обладающих повышенной склонностью к агрегации;

• -    показателя анизоцитоза тромбоцитов. Величина PDV у коров аулиекольской породы возрастает на 14,94 %, чернопестрой – на 17,19 %, как результат потребления клеток плацентой [1, 14].

Следовательно, по мере приближения даты родов, которые для организма коров являются стрессовым фактором, снижается продукция тромбоцитов, но модифицируются их морфологические свойства. Это направлено на повышение функциональных резервов в клетках, а также их адгезивной и агрегационной способности.

Согласно исследованиям [1] чувствительность PLT к агрегативным индукторам является результатом изменения гормонального фона организма матери в ходе гестационного процесса. При этом важнейшую роль играют гормоны плаценты, синтез которых не контролируется ги-поталамо-гипофизарным путем.

В своих исследованиях [8, 9] мы отмечали, что в последние месяцы беременности в крови коров снижается уровень прогестерона на 10,74 % (I группа) и 14,74 % (II группа) и увеличивается концентрация кортизола на 18,56 и 38,26 % соответственно. В поддержании их уровня в крови коров важная роль принадлежит секреторной активности плаценты [11]. Для оценки сопряженности показателей тромбоцитарного звена гемостаза с данными гормонами мы определили их корреляционную взаимосвязь. При этом мы основывались на том, что система гемостаза, определяющая реологию крови, является результатом проявления биологических эффектов гормонов, уровень которых сопряжен с гестационным процессом. Ана- лиз данных позволил установить следующее (Таблица 2):

• 1.    Корреляционные связи и их сила в последний триместр беременности не столько были сопряжены с породой коров, сколько со сроком гестации. Об этом свидетельствовала однотипная вариабельность значений коэффициентов корреляции между изучаемыми признаками. Так, уровень кортизола и прогестерона не был статистически значимо связан с общим количеством тромбоцитов, их объемной долей в кровотоке и показателем анизоцитоза в организме коров аулиекольской и чернопестрой пород. Однако концентрация гормонов влияла на число активных (моло-

• дых) тромбоцитов, обладающих повышенной коагуляционной способностью [12].

• 2.    Кортизол в последние месяцы беременности достоверно коррелировал с количеством P-LGR, как в I-ой, так и II-ой группах коров (r=0,72±0,24 – 0,88±0,17). Это отражало влияние гормона, как на процессы тромбопоэза в целом, так и выброс молодых форм клеток в кровоток. Логично предположить, что кортизол, как гормон общеметаболического действия, контролировал энергетический статус активных тромбоцитов, определяющий их агрегационные способности в ходе подготовки организма матери к родам.

• 3.    Независимо от породы коров и соответственно направления продуктивности, прогестерон достоверно коррелировал с количеством мегалотромбоцитов в крови за 1-3 суток до предполагаемой даты родов. Значение коэффициентов корреляции между данными признаками в первой группе было равно r=-0,83±0,20 и во II-ой r= -0,72±0,24. При этом у коров аулиеколь-ской породы выявлялась достоверная связь в паре признаков прогестерон - MPV (r=-

• 0,73±0,24), а у черно-пестрой породы, хотя и не достоверная, но существенная корреляционная связь между прогестероном и PLT (r=-0,58±0,29), прогестероном и PCN (r=-0,67±0,26). Следовательно, гормон участвовал в регуляции агрегационной активности тромбоцитов или за счет поддержания уровня молодых форм тромбоцитов (в I и II группе), или за счет контроля количества тромбоцитов и их объемной доли в кровотоке (II группа). Дан-
• ные эффекты [2] сопряжены с его способностью влиять не синтез цитокинов Th2-типа, которые непосредственно определяют коагуляционную способность тромбоцитов и обеспечивают кровоснабжения плода.

Таблица 2 – Коэффициенты корреляции между гормонами и параметрами тромбоцитарного звена гемостаза (n=20), Х±Sx

Показатель	Аулиекольская порода (I группа)				Черно-пестрая порода (II группа)
	срок исследования п				еред родами, сут
	60		1-3		60		1-3
	В В H О л г ° и	в ° в о в о 4 о 2 В S О 6 в	В в Н о	о в о 4 о 2 О В в	В в Н о л г § и	в о 4 о 2 О В в	Н о § и	в о в о 4 о 2 О В в
Тромбоциты (PLT),	-0,31±	0,43±	-0,12±	0,29±	0,01±	0,23±	0,39±	-0,58±
109/л	0,34	0,32	0,35	0,34	0,35	0,34	0,32	0,29
Тромбокрит (PCN),%	-0,42±	0,28±	-0,53±	0,39±	0,30±	0,13±	0,41±	-0,67±
	0,32	0,28	0,30	0,32	0,34	0,35	0,32	0,26
Средний объем тром-	0,36±	-0,45±	-0,06±	-0,73±	-0,25±	-0,08±	0,08±	0,02±
боцита (MPV), фл	0,33	0,31	0,35	0,24*	0,34	0,35	0,35	0,35
Число мегалотромбоци-	0,88±	-0,19±	0,72±	-0,83±	0,77±	-0,17±	0,76±	-0,72±
тов (P-LGR), %	0,17*	0,34	0,24*	0,20*	0,22*	0,35	0,23*	0,24*
Широта распределения	-0,41±	-0,28±	0,61±	-0,47±	0,33±	-0,01±	0,14±	-0,11±
PLT по объему (PDV), фл	-00,,4312±	0,34	0,27	0,31	0,34	0,35	00,1,345±	0,35

Примечание: * – р<0,05

Заключение. Показатели тромбоцитарного звена гемостаза в организме беременных коров мясного (аулиекольская порода) и молочного (черно-пестрая порода) направления продуктивности имеют количественные различия. При этом их уровень преобладает у мясных коров от 3,15 до 31,89 %. В то же время динамика изменений тромбоцитарных параметров в ходе подготовки животных к родам однотипна и характеризуется уменьшением общего количества тромбоцитов на 11,74 и 24,14 % и их объемной доли в крови (тромбокрита) на 6,45 и 12,00 % соответственно. Однако при этом возрастает средний объем тромбоцитов, число мегало-тромбоцитов и широта их распределения по объему (показатель анизоцитоза) на 6,83; 16,37 и 14,94 % у аулиекольской породы и 15,49; 16,01 и 17,19 % у чернопестрой породы, что отражает степень активации тромбоцитарного звена гемостаза в ходе подготовки организма коров к родоразрешению с целью снижения уровня будущих кровопотерь. Данные изменения сопряжены с концентрацией гормонов (кортизола и прогестерона), биологические эффекты которых предусматривают регуляцию агрегационной способности тромбоцитов за счет контроля уровня молодых клеток (мегалотромбоцитов) в крови животных. Об этом свидетельствуют статистически значимые значения коэффициентов корреляции в парах признаков: кортизол – P-LGR r=0,72±0,24 – 0,88±0,17; прогестерон – P-LGR r=-0,72±0,24 – -0,83±0,20.

Резюме

Дана оценка состояния тромбоцитарного гемостаза в организме коров аулиекольской и черно-пестрой пород в последний триместр беременности и взаимосвязь её показателей с уровнем кортизола и прогестерона. Лабораторные исследования выполнены за 60 и за 1-3 суток до предполагаемой даты родов. Установлено, что порода коров влияла на уровень тромбоцитарных параметров. При этом их величина в крови коров аулиекольской породы превышает уровень животных черно-пестрой породы на 3,15-31,89 %. Динамика изменений тромбоцитарных параметров в ходе подготовки организма матери к родам однотипна и характеризуется уменьшением общего количества тромбоцитов на 11,74 и 24,14% и их объемной доли в крови (тромбокрита) на 6,45 и 12,00 % соответственно. При этом возрастает средний объем тромбоцитов, число мегалотромбоцитов и широта их распределения по объему на 6,83; 16,37 и 14,94 % (у аулиекольской породы) и 15,49; 16,01 и 17,19% (у чернопестрой породы). Данные изменения сопряжены с уровнем гормонов кортизола и прогестерона, биологические эффекты которых предусматривают регуляцию агрегационной способности тромбоцитов за счет контроля уровня молодых клеток (мегалотромбоцитов) в крови коров. Об этом свидетельствуют статистически значимые значения коэффициентов корреляции в парах признаков: кортизол - P-LGR r=0,72±0,24 – 0,88±0,17; прогестерон - P-LGR r=-0,72±0,24 – -0,83±0,20.