Уровень глутатиона в эритроцитах и плазме крови коров, больных эндометритом

Акушерские заболевания крупного рогатого скота, регистрируемые в послеродовой период, протекают на фоне интенсификации свободно-радикального окисления и разнонаправленных изменений ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной системы организма животных [1–3]. Глутатион (трипептид – γ-глутамилцистеинилглицин) является важным неферментативным компонентом антиокислительной системы организма. Антиоксидантные свойства глутатиона, проявляемые как вне-, так и внутриклеточно, основаны на его взаимодействии с активными формами кислорода непосредственно либо в качестве субстрата ферментов антиокислительной системы [4]. Поэтому уменьшение содержания восстановленного глутатиона крови крупного рогатого скота в послеродовый период может приводить к развитию оксидативного стресса, а его определение может служить в качестве маркера нарушения окислительного статуса животных. Кроме того, уровень глутатиона при

акушерских патологиях позволит оценить эффективность и целесообразность применения лечебных препаратов, своевременно скорректировать лечение.

Материалы и методы исследования

Исследования выполнены в летне-стойловый период, на базе хозяйств лесостепной зоны Омской области. В работе изучали кровь коров 2–3-летнего возраста черно-пестрой породы, полновозрастных (1–2-й лактации), средней упитанности с массой тела 500–700 кг. Животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания. В соответствии с анамнестическими данными, результатами вагинальных и ректальных исследований коровы были распределены на группы: 1-я (контрольная) – клинически здоровые животные, первой половины стельности; 2-я – коровы с диагнозом острого послеродового эндометрита (ОПЭ), 10–12-й день после отела, 3-я – гнойно-катаральный эндометрит (ГКЭ), 27–30-й день после отела, 4-я – животные, реконвалесценты, без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ), 25–30-й день после отела. Коровы 2–4-й групп получали комплексные ветеринарные препараты антимикробного и противовоспалительного действия по одинаковой схеме лечения. Учитывали общее клиническое состояние, характер течения родов, послеродовых инволюционных процессов в половых органах и сроки их завершения. Эндометрит подтверждался клиническими исследованиями.

Кровь для биохимических исследований брали из яремной вены в утреннее время до кормления в вакуумные пробирки с гепарином фирмы Bodywin. Эритроциты и плазму разделяли центрифугированием при 2000 об./мин в течение 15 мин. Эритроциты промывали 0,9%-ным NaCl и лизировали холодной дистиллированной водой. Плазму и гемолизат использовали для дальнейших биохимических исследований. Содержание восстановленного глутатиона (GSH) определяли по образованию комплекса с 5,5-дитио-бис-(2-нитробензой-ной) кислотой с максимумом поглощения 412 нм. Исследования проведены на биохимическом анализаторе «Screen Master» производства фирмы «Hospitex» (Швейцария, Италия) с использованием реактивов фирмы «RANDOX» (Великобритания). Статистическая обработка проводилась с помощью пакета программ Statistica 6.0 for Windows [5]. Выборки не подчинялись нормальному закону распределения на уровне значимости p < 0,001, поэтому полученные результаты представлены в таблицах в виде медианы ( Ме) , верхнего и нижнего квартилей ( Q 1 –Q 3 ) . Достоверность различий выборок оценивали непараметрическим критерием Манна – Уитни при уровне значимости р ≤ 0,05.

Результаты исследований

Полученные данные свидетельствуют: в эритроцитах коров, больных послеродовым эндометритом (ОПЭ), содержание глутатиона возрастало в 1,5 раза на 10–12 сут. после отела (таблица). Однако в 3-й группе животных больных гнойно-катаральным эндометритом (ГКЭ) на 27–30-й день после отела содержание восстановленного глутатиона эритроцитов крови значительно снижалось (на 50%) как по сравнению с показателями 2-й группы больных коров ОПЭ, так и со значениями клинически здоровых животных (на 34%).

Содержание глутатиона в эритроцитах и плазме крови коров, больных эндометритом

Примечание . Данные представлены как медиана и квартили – Ме (Q1–Q3). Статистически значимые различия «*» – с контрольной группой, «^х» – 2-й и 3-й групп (р < 0,05).

В противоположность этому в плазме крови уровень глутатиона сохранялся повышенным как во 2-й, так и в 3-й группе животных. Наибольшие изменения глутатиона в плазме крови выявлены во 2-й группе животных: увеличение на 58% в сравнении с контрольной группой. Возрастание глутатиона установлено и в 3-й группе на 27%, однако его содержание в плазме значительно ниже по сравнению со 2-й группой.

У животных, получавших лечение, без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ) на 25–30-й день после отела не выявлено значимого изменения содержания глутатиона как в эритроцитах, так и в плазме крови по сравнению с контрольной группой.

Заключение

Адаптация организма при развитии окислительного стресса проявляется в повышении активности ферментов антиокислительной защиты, в том числе и глутатионредуктазы, что приводит к возрастанию уровня восстановленного глутатиона в эритроцитах. Резкое снижение содержания глутатиона в эритроцитах может быть вызвано тем, что при более тяжелой форме заболевания ферменты глутатионового звена АОС расходуют GSH на обезвреживание АФК и ксенобиотиков в большей степени, чем он восстанавливается ГР из окисленной формы GSSG.

В предыдущих исследованиях нами отмечена [6] интенсификация свободнорадикальных процессов, возрастание оксидативной модификации липидов и карбонильных производных белков крови коров при послеродовых эндометритах. Повышение проницаемости клеточных мембран эритроцитов в этих условиях может способствовать выходу восстановленного глутатиона из эритроцитов и повышению его уровня в плазме крови больных животных.