Валидация метода пламенной фотометрии для определения натрий иона в препарате альбумин, 20%-й раствор для инфузий

Валидация аналитических методов является неотъемлемой частью системы обеспечения качества наряду с программами валидации производственных помещений, оборудования, технологических процессов. Прошедший валидацию метод гарантирует, что выбранная методика будет давать воспроизводимые и достоверные результаты. Результаты валидации аналитических методов могут либо подтвердить, что процедура анализа проводится стандартно и тем самым повышается степень гарантии качества продукции, либо указать на наличие несоответствий и проблем, которые необходимо решать [1].

При внедрении в производство нового препарата (20%-го раствора альбумина) возникла необходимость провалидировать методы контроля данного препарата. Цель исследования: валидация метода определения на-трий-иона в препарате альбумин, раствор для инфузий 20%-м методом пламенной фотометрии.

Материал и методы

Согласно ФСП на препарат “Альбумин, раствор для инфузий 20%” определение натрий-иона в растворе проводили на пламенно-фотометрическом анализаторе жидкости ПАЖ-2, а количественное содержание натрий-иона рассчитывали по калибровочному графику.

Для проведения валидации использовали три коммер- ческие серии препарата альбумин, раствор для инфузий 20% и государственный стандартный образец (ГСО) раствора иона натрия. Для построения калибровочной кривой применяли рабочие стандартные растворы натрия хлорида (ГОСТ 4233-77, квалификация “хч”). Планирование эксперимента и статистическую обработку данных проводили согласно РМГ 61-2003 [2].

Результаты и обсуждение

При оценке результатов исследования (табл. 1) было установлено, что коэффициент корреляции линейной зависимости калибровочного графика меньше критерия приемлемости, предусмотренного ГФ XI. В связи с этим возникла необходимость дополнительного изучения и выявления причин несоответствия метода требованию ГФ XI по корреляции.

Для проверки точности построения калибровочной кривой и оценки правильности работы прибора был использован ГСО раствора иона натрия. С помощью данного ГСО были приготовлены растворы концентрации 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,4; 1,6 ммоль/л, совпадающие с концентрациями рабочих стандартных растворов, используемых при построении калибровочной кривой. На первом этапе калибровочная кривая линейной зависимости содержания определяемого компонента в рабочих стандартных растворах от интенсивности эмиссии ионов натрия

Таблица 1

Содержание натрий-ионов в растворах ГСО*

№ п.п	Теоретическая концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, ммоль/л	Концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, найденная по калибровочной кривой, ммоль/л	Погрешность определения, %	Коэффициент корреляции линейной зависимости
1	0,300	0,306	2,0	0,9978
2	0,400	0,418	4,6	0,9993
3	0,400	0,433	8,3	0,9978
4	0,400	0,397	0,8	0,9993
5	0,600	0,615	2,6	0,9993
6	0,600	0,623	3,8	0,9993
7	0,600	0,580	3,3	0,9978
8	0,800	0,785	1,9	0,9993
9	0,800	0,765	4,3	0,9978
10	1,000	0,959	4,1	0,9993

Примечание: * – диапазон построения калибровочной кривой (0,2–2,0) ммоль/л; шкала прибора настроена по раствору 2,0 ммоль/л.

строилась в полном соответствии с ФСП на препарат, в диапазоне (0,2–2,0) ммоль/л. Коэффициент корреляции линейной зависимости составил не более 0,9787, что меньше критерия приемлемости: 0,98 по ГФ XI. Погрешность определения содержания ионов натрия в растворах ГСО от теоретических концентраций в диапазоне (0,2–1,0) ммоль/л, составила около 25%, в диапазоне (1,0– 2,0) ммоль/л – не более 7%.

Калибровочная кривая зависимости содержания определяемого компонента в рабочих стандартных растворах от интенсивности эмиссии ионов натрия представлена на рисунках 1 и 2. Из рисунка 1 видно, что наблюдается полиномиальная зависимость. Следовательно, необходимо разбить данный диапазон определяемых концентраций на поддиапазоны и построить калибровочный график отдельно для каждого поддиапазона.

Ожидаемые значения концентрации натрий-иона в растворе альбумина лежат в диапазоне (0,3– 0,7) ммоль/л. Перед нами возникла задача максимально уменьшить разность полученных результатов от действительных (теоретически рассчитанных) значений ГСО, т.к.

Рис. 1. Калибровочная кривая для определения содержания натрий-иона в препарате альбумин. Линейная зависимость

Полиномиальная зависимость

Рис. 2. Калибровочная кривая для определения содержания натрий-иона в препарате альбумин. Полиномиальная зависимость

это непосредственно влияет на точность определения натрий-иона в препарате данным методом. Было решено калибровочную кривую начинать с раствора, содержащего натрий-ион в концентрации 0,1 ммоль/л, а верхнюю точку кривой снизить до 1,0 ммоль/л. При построении калибровочного графика в поддиапазоне (0,1–1,0) ммоль/л (шкала прибора настроена по раствору 2,0 ммоль/л), коэффициент корреляции линейной зависимости получился не менее 0,9859, что удовлетворяет критерию приемлемости. Теоретические расчеты растворов ГСО с концентрациями 0,3; 0,4; 0,6 ммоль/л отличаются от результатов полученных опытным путем не более чем на 8% (табл. 2).

В соответствии с паспортом на прибор, шкала фотометра с отметкой “100” должна настраиваться по раствору с концентрацией, равной максимально ожидаемой, т.е. в данном случае 1,0 ммоль/л. В диапазоне концентраций натрий-иона (0,1–1,0) ммоль/л коэффициент корреляции линейной зависимости калибровочного графика получился удовлетворительным, не менее 0,9818. Значения концентрации на-трий-ионов в растворах ГСО в диапазоне ожидаемых концен-

Таблица 2

Содержание натрий-ионов в растворах ГСО*

№ п.п.	Теоретическая концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, ммоль/л	Концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, найденная по калибровочной кривой, ммоль/л	Погрешность определения, %	Коэффициент корреляции линейной зависимости
1	0,300	0,306	2,0	0,9868
2	0,400	0,418	4,6	0,9859
3	0,400	0,433	8,3	0,9937
4	0,400	0,397	0,8	0,9868
5	0,600	0,615	2,6	0,9859
6	0,600	0,623	3,8	0,9937
7	0,600	0,580	3,3	0,9868
8	0,800	0,785	1,9	0,9937
9	0,800	0,765	4,3	0,9868
10	1,000	0,959	4,1	0,9937

Примечание: * – Диапазон построения калибровочной кривой (0,1–1,0) ммоль/л; шкала прибора настроена по раствору 2,0 ммоль/л.

Таблица 3

Содержание натрий-ионов в растворах ГСО*

№ п/п.	Теоретическая концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, ммоль/л	Концентрация натрий-ионов в растворах ГСО, найденная по калибровочной кривой, ммоль/л	Погрешность определения, %	Коэффициент корреляции линейной зависимости
1	0,300	0,316	5,2	0,9818
2	0,400	0,393	1,9	0,9943
3	0,400	0,425	6,2	0,9965
4	0,400	0,407	1,8	0,9818
5	0,600	0,613	2,2	0,9943
6	0,600	0,616	2,7	0,9965
7	0,600	0,567	5,5	0,9818
8	0,800	0,788	1,5	0,9965
9	0,800	0,688	13,9	0,9818
10	1,000	0,947	5,3	0,9965

Примечание: * – диапазон построения калибровочной кривой (0,1–1,0) ммоль/л; шкала прибора настроена по раствору 1,0 ммоль/л.

траций (0,3–0,7) ммоль/л воспроизводились с точностью до 6% (табл. 3).

Результаты анализа для расчета метрологических характеристик метода определения натрий-иона в препарате “Альбумин раствор для инфузий 20%” были получены в диапазоне построения калибровочной кривой (0,1– 1,0) ммоль/л; шкала прибора была настроена по раствору 1,0 ммоль/л. В результате валидации установлены основные метрологические характеристики метода при доверительной вероятности Р=0,95:

– показатель повторяемости σr=3,0%;

– показатель внутрилабораторной воспроизводимости σR*=5,0%;

– показатель правильности ±Δc=1,0%;

– показатель точности ±Δ=10,0%;_

– предел повторяемости r=0,083⋅Х ммоль/л;

– предел в н утрилабораторной воспроизводимости R*=0,139⋅Х ммоль/л.

Выводы

• 1.    Рекомендовано внести изменение в методику измерения количественного содержания натрий-иона в

• 2.    Для исключения ошибки оператора при определении линейной зависимости необходима компьютерная обработка калибровочной кривой и результатов анализа.

• 3.    Метрологические характеристики метода оценены с учетом вышеизложенных рекомендаций.

растворе альбумина: калибровочный график строить по растворам с содержанием натрий-ионов в диапазоне (0,1–1,0) ммоль/л; шкалу прибора настраивать по раствору с максимальной концентрацией, т.е. 1,0 ммоль/л.