Влияние аквапунктуры на реологические свойства крови крупного рогатого скота

Аквапунктура (инъекционная терапия) – введение в акупунктурные или болевые точки дистиллированной воды или растворов лекарственных веществ. Аква-пунктура является одной из разновидностей рефлексотерапии, экологически чистого и экономически оправданного метода профилактики, стимуляции и лечения незаразных заболеваний животных [9].

Клинический эффект реализуется благодаря изменениям биохимических процессов и выработке биологически активных веществ на местном, органном и системном уровнях организма в ответ на инъекционную терапию, что приводит к нормализации функционирования клеток, тканей, органов, систем и всего организма в целом. Благодаря непосредственному воздействию на основные проводящие системы организма (нервную, сосудистую, лимфатическую) и опосредованной активизации главных управляющих систем (центральная нервная система, эндокринная, иммунная), аквапунктура является эффективным методом в лечении широкого ряда заболеваний [1, 5, 6].

Кроме того, в настоящее время интерес многих исследователей прикован к изучению системы гемостаза. Факторы гемостаза принимают участие в сохранении жидкого состояния крови, регуляции транскапиллярного обмена, резистентности сосудистой стенки, влияют на интенсивность репаративных процессов и многие другие процессы [5, 7]. При этом гемостатический процесс всегда включается в компенсаторно-приспособительные реакции организма, становясь непременным патогенетическим звеном различных заболеваний. В связи с этим раскрытие закономерностей реагирования системы гемостаза на аквапунтктуру представляет фундаментальный интерес для разработки методов эффективного предупреждения и лечения различных проявлений внутрисосудистого свертывания крови, влекущего за собой нарушения системного кровообращения.

Целью исследования данной работы явилось изучение изменений реологических свойств крови по показателям системы гемостаза у коров черно-пестрой породы после применения аквапунктуры с использованием физиологического раствора.

Материалы и методы. Исследования проводили в феврале-марте 2014 года в ОАО «Заря» отделение Молочное на здоровых телках случного возраста черно-пестрой породы (n=10). В процессе исследования все животные содержались в одинаковых условиях в соответствии с зоогигиеническими требованиями.

Кровь животных исследовалась до и после аквапунктуры с применением физиологического раствора.

Аквапунктуру проводили дважды, в поясничной области. Зоны инфильтрации располагались по сторонам от срединной линии туловища на протяжении от остистого отростка 3-4-го поясничного до 1-2-го крестцового позвонков. Ширина участка инфильтрации достигала 3-4 см. Подогретый до температуры тела физиологический раствор вводили внутрикожно с помощью безыгольного инъектора Би-7М. Первоначально производили внутрикожное введение до образования сплошной припухлости типа «лимонной корочки» на всей площади участка кожи. При этом уколы располагали в шахматном порядке. В одну точку укола вводили от 0,1 до 0,2 мл раствора; расстояние между уколами оставляли 1 см. Повторные инъекции проводили через два дня. Кровь повторно исследовали через два дня после второй инъекции.

Для оценки тромбоцитарного звена системы гемостаза определяли количество тромбоцитов и их агрегационные свойства.

Подсчет количества тромбоцитов проводился по Фонио в мазке крови, стабилизированной ЭДТА, и окрашенных по Романовскому. [4]

Агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом с применением фотоэлектроколориметра КФК-2 по Howard M.A. с использованием активаторов свертывания (АДФ, коллаген, ристомицин) [2]. Исследование агрегации тромбоцитов является наиболее универсальным методом анализа, цель которого – оценка «качественных» функциональных характеристик тромбоцитов, т. е. способность тромбоцитов к активации посредством образования агрегатов после активации. У коров определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ).

Для оценки плазменного звена системы гемостаза использовали одноканальный коагулометр – THROMBOSTAT производства Behnk Elektronik (Германия), на котором определяли следующие показатели: ПВ (протромбиновое время), ТВ (тромбиновое время), АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время), количественный анализ фибриногена.

Противосвертывающие механизмы системы гемостаза оценивали с помощью измерения активности антитромбина III с хромогенным субстратом в бедной тромбоцитами плазме с применением фотоэлектроколориметр КФК-2.

Полученные в ходе исследования результаты обрабатывались с помощью программного пакета Microsoft Excel. Значения полученных результатов в работе представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней (M±m). Сравнение между собой данных проводилось с применением t-критерия Стьюдента. Результаты исследования со значением вероятности допущения альфа-ошибки, равные либо менее 5 % (P<0,05) расценивались как статистически значимые.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Количество тромбоцитов у опытных животных до аквапунктуры было несколько ниже справочно-нормативных значений. После аквапунктуры количество тромбоцитов недостоверно снизилось [7]. Эти данные отличаются от результатов исследований на опытных животных, полученных в 2011-2012 годах, где подсчет количества тромбоцитов осуществлялся на гематологическом анализаторе ВС-3000 PLUS [10].

Несмотря на уменьшение количества тромбоциты были более активны под воздействием индукторов АДФ и коллагена после аквапунктуры, о чем говорит повышение суммирующего индекса агрегации тромбоцитов (СИАТ). Однако образовавшиеся агрегаты были менее устойчивы, о чем свидетельствует повышение индекса дезагрегации тромбоцитов (ИДТ).

Недостоверное повышение СИАТ с одновременным снижением ИДТ при индукции ристомицином после аквапунктуры с физиологическим раствором говорит о повышении адгезивной способности тромбоцитов с образованием более прочных комплексов. Адгезивные свойства тромбоцитов являются, пожалуй, самыми характерными для них. Способность приклеиваться и распластываться на стекле, коллагеновых волокнах, на стенке поврежденного сосуда, лишенного эндотелиального покрова, меняется при изменении электрического потенциала на наружной поверхности пластинок. Молодые пластинки гораздо быстрее прилипают к коллагеновым волокнам и друг к другу [3, 4, 8].

Таблица 1 – Показатели системы гемостаза.

Показатели                        До аквапунктуры          После аквапунктуры

Количество тромбоцитов 10ˆ9/л	161	± 1918	14466	± 2534
Реакция тромбоцитов с АДФ
СИАТ, %	12,90	± 3,19	19,42	± 1,75
ИДТ %	747	± 128	991	± 145
Реакция тромбоцитов с коллагеном
СИАТ, %	11,06	± 2,00	19,57	± 1,27•
ИДТ, %	4,48	± 1,02	5,63	± 0,70
Реакция тромбоцитов с ристомицином
СИАТ, %	11,52	± 4,98	15,60	± 2,23
ИДТ %	483	± 1008	328	± 038
Показатели плазменного гемостаза
Протромбиновое Время,с	42,65	± 2,14	42,64	± 4,5
Тромбиновое Время,с	19,4	± 0,69	23,21	± 2,31
АЧТВ,с	87,03	± 7,32	63,43	± 2,91•
Фибриноген, г/л	2,297	± 0,07	2,118	± 0,19
АТ-3,%	93,97	± 4,87	196,6	± 9,11•

•- разность с контрольной группой достоверна (р < 0,05) для всех значений, представленных в таблице р< 0,01

Агрегация тромбоцитов, особенно под влиянием АДФ нуждается в ряде плазменных кофакторов, одним из которых является фибриноген. Фибриноген необходим для агрегации в очень небольших количествах. Аквапунктура недостоверно не оказала влияния на его концентрацию.

Одновременно с тромбоцитарными активируются плазменные факторы свертывания крови. Плазменный гемостаз начинается по двум направлениям – внешнему (тканевому) и внутреннему (кровяному), а завершается общим.

АЧТВ характеризует внутренний путь – протромбиназообразование и представляет собой многоступенчатый процесс, в результате которого в крови накапливается комплекс факторов, способных превратить протромбин в тромбин. Активность внутреннего пути свертывания после аквапунктуры достоверно повышалась.

На активность внешнего пути свертывания указывают показатели протромбинового времени. Протромбиновое время характеризует активность так называемого протромбинового комплекса (факторов V, VII, X и собственно протромбина – фактора II). Аквапунктура на данный показатель влияния не оказала.

Тромбиновое время характеризует конечный этап свертывания. Тест измеряет скорость превращения фибриногена в фибрин под действием тромбина. При этом скорость образования фибринового сгустка зависит, главным образом, от количества и функциональной полноценности фибриногена и присутствия в крови антикоагулянтов. После аквапунктуры мы наблюдали недостоверное удлинение тромбинового времени.

Сохранение крови в жидком состоянии во многом определяется наличием в кровотоке естественных веществ, обладающих антикоагулянтной активностью. Вещества, обладающие антикоагулянтной активностью, постоянно синтезируются в организме и с определенной скоростью выделяются в кровоток. Одним из антикоагулянтов является антитромбин 3. После аквапунктуры его концентрация достоверно увеличилась. Возможно это является компенсаторной реакцией на повышение агрегационной активности тромбоцитов и активацию внутреннего пути свертывания крови [4, 6, 8].

Выводы. Под влиянием аквапунктуры наблюдали достоверное усиление коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов с образованием нестабильных агрегатов. Плазменный гемостаз изменялся разнонаправленно, что характерно для реакций напряжения. При этом повышение активности внутреннего пути свертывания крови достоверно сопровождалось усилением противосвертывающих механизмов, что оптимизирует процессы микроциркуляции в органах и тканях.