Влияние клатратного комплекса 3-(2 -фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом на ан-тиоксидантный статус и на становление естественной резистентности организма кроликов

В настоящее время весьма перспективным является класс соединений, относящийся к роданинам, на основе которых можно разработать средства медицинского и ветеринарного применения. Соединения роданинового ряда – это органические молекулы, содержащие остатки 4-оксо-2-тиоксо-1,3-тиазолидина [12]. Имеются сведения, что роданины проявляют широкий спектр физиологических эффектов и в связи с этим они являются теми соединениями, на основе которых следует разрабатывать как лекарственные средства, так и биологически активные добавки к кормам. Одним из фармакологически активных соединений из вышеупомянутого класса является 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4. По данным литературы установлено его ингибирующее действие в отношении фермента киназы гликогенсин-тазы 3β (GSK3β). Для производного роданина 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазо-лидин-4-она ингибирующая активность, выраженная в виде IC50, составляет 35 мкМ [9, 10]. GSK3β участвует в регуляции примерно 50 белков и локализован, как в цитозоле, так и внутри ядра. GSK3β играет ключевую роль в регуляции усвоения глюкозы и ее конверсии в гликоген, усиления синтеза мышечного белка, увеличения пула рецепторов стероидных гормонов, готовых к активации агонистами, следовательно, возможно получение анаболического эффекта при применении 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она [2, 3, 6, 7, 8].

На сегодняшний день 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он относится к малоисследованным молекулам, а по физико-химическим свойствам -к нерастворимым в водной среде соединениям. В связи с этим актуальным является создание на основе данного соединения клатратного комплекса с бетадексом, позволяющего повысить показатели растворимости и конечном счете биодоступности, и исследовать его антиоксидантные и другие свойства.

Целью исследований являлось изучение влияния нового клатрартного комплекса 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиа-золидин-4-она с бетадексом на антиоксидантный статус и на становление ествест-венной сопротивляемости организма кроликов.

Материал и методы исследований. Клатратный комплекс 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом был синтезирован твёрдофазным методом получения на мельнице Активатор 2S. Размеры полученных частиц измеряли на приборе Zetasizer Nano ZS. Анализизировали наработанные клатратные комплексы 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом при их разных соотношениях методами спектроскопий в УФ диапазоне.

Эксперимент по изучению влияния клатратного комплекса 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом на антиоксидантный статус и становление естественной резистентности животных был проведен на 18 кроликах породы cо-ветская iиншилла в период 6-18 недельного возраста. В начале эксперимента сформировали 3 группы по 6 кроликов в каждой. Кроликам 1 группы (контроль) вводили суспензию бетадекса в крахмальном геле; 2 группы - клатратный комплекс 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом в дозе 10 мг/кг массы тела; 3 группы - клатратный комплекс 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом в дозе 20 мг/кг массы тела. В ходе проведения эксперимента кровь брали через 71 сутки после начала введения препаратов. Взятие крови осуществляли из краевой вены уха кролика в объеме 2,5-3,0 мл. Кровь для определения показателей естественной сопротивляемости организма кроликов отбиралась в полипропиленовые пробирки без антикоагулянтов с целью получения сыворотки крови. Также кровь отбиралась в пробирки с антикоагулянтом для получения плазмы крови. Естественную резистентность организма подопытных кроликов устанавливали на основе определения бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК) и лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК). БАСК определяли по методике Мюнселя и Треффенса в модификации О.В. Смирновой и Т.Н. Кузьминой, а ЛАСК - по Доро-фейчуку [4]. Антиоксидантный статус организма кроликов оценивали на основе определения концентрации малонового диальдегида (МДА) и активности ферментативного звена антиоксидантной системы в крови. Определение концентрации МДА в плазме крови проводили с применением KMnO4 и FeSO4 [11]. Состояние ферментативного звена антиоксидантной системы оценивали на основе определения активности супероксиддисмутазы (СОД, КФ 1.15.1.1) и каталазы (CAT, КФ 1.11.1.6). Определение активности СОД в эритроцитах производили энзиматическим методом на биохимическом анализаторе RX Monza (Великобритания) с применением коммерческих наборов Randox SD 125 (Великобритания). Метод основан на ингибировании ферментом реакции взаимодействия супероксид анион-радикалов и  2-(4- иодофенил)-3-(4-нитрофенол)-5-фенилтетразолиумхлорид с образованием окрашенного в красный цвет соединения -формазана. Активность каталазы в лизате эритроцитов определяли спектрофотометрическим методом [5] при длине волны 420 нм, принцип которого основан на спо- собности перекиси водорода образовывать с молибдатом аммония стойкий окрашенный комплекс. Активность каталазы эритроцитов выражали в количестве утилизированной перекиси водорода в мкмоль за 1 мин из расчета на один эритроцит, пкат/эритроцит.

Статистическая обработка результатов исследований была проведена с применением параметрических и непараметрических методов. Различия между группами считались статистически значимыми при Р <0,05 [1].

Результаты исследований. В процессе разработки впервые синтезированы новые клатратные комплексы производного роданина с бетадексом при масс соотношении от 1:5 до 1:10. Новые клатратные комплексы представляют собой порошок со средним размером частиц 40,5 нм. Для дальнейших исследований был выбран клатратный комплекс производного роданина с бетадексом при масс соотношении

1:5.

Иммунный статус организма может быть определён с помощью различных показателей, характеризующих уровень защитных свойств животного и человека. В качестве критериев оценки формирования естественной сопротивляемости у подопытных кроликов при введении предлагаемого комплекса были рассмотрены БАСК и ЛАСК.

Результаты исследований естественной сопротивляемости показали, что введение клатратного комплекса производного роданина с бетадексом кроликам в дозах 10 и 20 мг/кг массы тела по сравнению с контролем в течение 71 суток статистически значимо повышает уровни БАСК и ЛАСК (Таблица 1).

Следует при этом отметить, что сопоставимые результаты были получены при введении клатратного комплекса кроликам как в дозе 10 мг/кг, так и 20 мг/кг массы тела.

Таблица 1 – Показатели естественной сопротивляемости организма кроликов при введении клатратного комплекса производного роданина с бетадексом (М±m, n=6)

Примечание: в табл.: *Р <0,05; **Р <0,03; ***Р <0,01 по U-тесту при сравнении c контролем

Полученные данные по антиоксидантной системе организма кроликов свидетельствуют о том, что введение клатратного комплекса производного роданина с бетадексом кроликам в дозах 10 и 20 мг/кг массы тела по сравнению со значениями контрольной группы статистически значимо повышает активности ферментов антиоксидантной системы. В частности, активность ферментов CAT и СОД в лизате эритроцитов у кроликов, получавших клатратный комплекс в дозах 10 и 20 мг/кг массы тела, статистически значимо была выше по сравнению с контролем (Таблица 2). При этом по содержанию МДА в плазме крови сравниваемые группы не отличались, что может свидетельствовать об отсутствии влияния клатратного комплекса на перекисное окисление липидов в организме животных.

Таблица 2 – Показатели антиоксидантной системы организма кроликов при введении кла- тратного комплекса производного роданина с бетадексом (М±m, n=6)

Примечание: *Р <0,05; ***Р <0,01 по U-тесту при сравнении c контролем

Заключение. Установлено, что клатрартный комплекс производного роданина с бетадексом при его введении кроликам в дозах 10 и 20 мг/кг массы тела способствует статистически значимому повышению уровней БАСК и ЛАСК в сыворотке крови. Также клатрартный комплекс производного роданина с бетадексом усиливает активность ферментативного звена антиоксидантной системы, в частности СОД и CAT в лизате эритроцитов. В то же время клатрартный комплекс производного роданина с бетадексом не влияет на процесс перекисного окисления липидов. При этом наилучшие результаты получены при введении клатратного комплекса производного роданина с бетадек-сом в дозе 10 мг/кг массы тела кроликов.

Резюме

Клатратный комплекс 3-(2 - фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она с бетадексом был впервые получен твёрдофазным методом синтеза на шаровой планетарной мельнице и имеет кристаллическую форму в виде наночастиц со средним размером частиц 40,5 нм. Изучено влияние разработанного клатратного комплекса в дозах 10 и 20 мг/кг массы тела на антиоксидантный статус и резистентность организма кроликов породы Советская Шиншилла. Установлено, что введение кроликам клатратного комплекса производного роданина с бета-дексом обеспечивает повышение ферментативного звена антиоксидантной системы, резистентности организма кроликов, при этом не влияет на содержание малонового диальдегида (МДА) в плазме крови, соответственно и на перекисное окисление липидов.