Влияние сочетаний витаминов-антиоксидантов на толерантность к тромбину

Введение. Анализ данных литературы, касающихся влияния витаминов-антиоксидантов (А, Е, В₅, В]2 и С), наиболее часто используемых с целью направленного воздействия на состояние гемостаза при заболеваниях, сопровождающихся гемостатическими нарушениями, не позволил сформулировать представление об их эффективности как средств ограничения тромбофилических сдвигов [1, 2, 10]. Экспериментальные исследования выявили, что эффекты этих витаминов на гемостаз сопряжены со степенью их влияния на процессы липидпероксида-ции (ЛПО) в тромбоцитах [13], хотя и не обнаруживается равно выраженная зависимость между влиянием дефицита или избытка в рационе того или иного витамина-антиоксиданта на интенсивность ЛПО и антиоксидантный потенциал (АОП) тромбоцитов, на уровень маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) и фибринолиз. Отклонения от нормы интегрального показателя состояния гемостаза - толерантности к тромбину - при авитаминозах А, Е, С и В5 примерно одинаковы, и лишь при исключении из рациона витамина Bi₂ снижение толерантности к тромбину (ТкТР) менее выражено, чем при других видах ави-таминного питания. По степени влияния на ТкТР избытка витаминов они располагаются иначе: на первом месте витамин А, на втором - витамин Е, на третьем - витамин В₁₂, на четвертом - витамины С и Р₅ (это сочетание повысило ТкТР при наибольшей из доз). По приросту эффекта в разные периоды наблюдений витамины располагаются в той же последовательности [И]. Отсутствуют, однако, экспериментальные данные о влиянии перечисленных витаминов на гемостаз в сочетаниях, хотя чаще витамины используются в комбинациях по два и более. Важным представляется выяснить в какой мере и по какому типу кооперируются их эффекты на состояние гемостаза.

Цель настоящего исследования - установить, как влияют все возможные сочетания витаминов-антиоксидантов А, Е, В5, В12 и С на толе рантность организма к тромбину, следовательно, на его способность адекватно реагировать на воздействия, ускоряющие тромбиногенез.

Материалы и методы исследований. Опыты проведены на белых крысах-самцах (280 ± 27 г), число п в отдельных группах и разных этапах опытов представлено в табл. 1-4). При выборе показателя состояния гемостаза — толерантность к тромбину - принято во внимание важное значение толерантности как интегрального показателя состояния многих систем, обеспечивающих реакцию организма на экзо- или эндогенную гипертромбинемию. Такая роль ТкТР, установленная ещё в начале XX века [8], экспериментально подтверждена при разработке количественного метода оценки ТкТР [13], апробированного при многих экспериментальных ситуациях [3, 6,7, 9].

Принимая во внимание множество сочетаний (всего 20), мы начали с простейшего (по 2 из 5), используя две дозы витаминов, в четыре и в восемь раз превосходящих суточную потребность (это эквиваленты лечебных доз).

Вводили каждое из сочетаний в течение восьми недель, чтобы сопоставить их эффекты при возможно максимальных изменениях ТкТР. Результаты экспериментов в виде интенсивных величин (изменение ТкТР, выраженное в процентах относительно контроля, принимаемого за 100 %) представлены в табл. 1. Здесь же помещены для сравнения данные, полученные при введении с рационом такого же избытка витаминов, при их введении порознь.

Данные табл. 1 свидетельствуют, что при введении витаминов во всех возможных сочетаниях по два увеличивается степень их влияния на ТкТР в сравнении с влиянием, выявленным при введении каждого из них порознь.

Далее в опытах, проведенных по такой же схеме, изучили влияние на ТкТР сочетаний по три, по четыре и эффект одновременного введения избытка всех пяти изучавшихся витаминов на ТкТР (табл. 2).

Таблица 1

Значения ТкТР при сочетании по два витамина А В5, В12, С и Е (4- и 8-кратный избыток каждого в рационе в течение 4 и 8 недель - верхняя и нижняя строки соответственно)

Сочетания витаминов	ТкТР в контроле (п= 10)	Крысы (п = 10 на каждом этапе) получали в избытке витамины, обозначенные в столбце 1-м
		4-кратный избыток	8-кратный избыток
Е+С	100,0 + 4,1	125,0 ±2,3* 129,0 ±2,1*	125,0 ±2,4* 140,0 ± 2,7*
Е+РР		125,0 ±2,7* 127,0 ±2,3*	126,0 ± 2,4* 139,0 ±2,7*
Е+А		140,0 ±2,1* 147,0 ± 2,4*	150,0 ±2,8* 174,0 ±3,1*
Е+В12		127,0 ± 2,2* 135,0 ±2,7*	138,0 ±2,2* 154,0 ± 2,9*
С+РР		120,0 ± 2,6 132,0 ± 1,8	130,0 ±3,4* 137,0 ±3,1*
С+А		131,0 ±2,8 140,0 ± 3,7	139,0 ±4,1 148,0 ± 2,7
с+в12		115,0 ±2,2 118,0 ± 1,3	120,0 ±3,2 128,0 ±2,9
РР+А		143,0 ± 3,2* 162,0 ± 4,5*	152,0 ± 3,6* 165,0 ±4,1*
РР+В12		129,0 ±2,1* 137,0 ±2,6*	133,0 ±3,1* 154,0 ± 4,7*
АиВ12		134,0 ±2,1* 140,0 ± 2,6*	152,0 ± 3,4* 159,0 ±4,3*

* Достоверное отличие от контроля.

Таблица 2

Значения ТкТР при сочетании по три, четыре и пять витаминов Е, С, РР, А и Bi2 (4- и 8-кратный избыток каждого) в рационе в течение 4 и 8 недель (верхняя и нижняя строки соответственно)

Перечень сочетаний витаминов по три, четыре и пять	ТкТР в контроле (п=10)	Крысы (п = 10 на каждом этапе) получали в избытке витамины, обозначенные в первом столбце
		4-кратный избыток	8-кратный избыток
Е+С+РР	100,0 ± 5,0	129,0 ± 2,2* 136,0 ±2,1*	129,0 ±2,1* 146,0 ± 2,8*
Е+С+А		157,0 ±3,1* 179,0 ±4,1*	150,0 ± 2,8* 198,0 ±5,1*
Е+С+В12		140,0 ± 3,3* 167,0 ± 2,9*	162,0 ±4,5* 189,0 ±5,2*
С+РР+А		143,0 ±3,2* 159,0 ±4,1*	166,0 ±3,7* 176,0 ±5,2*
С+РР+В12		125,0 ± 2,3 145,0 ± 2,7	133,0 ±3,4 148,0 ± 3,9
РР+А+В12		145,0 ± 3,0* 150,0 ±3,2*	161,0 ±3,6* 165,0 ±4,2*
Е+С+РР+В12		149,0 ± 4,0* 171,0 ±4,3*	157,0 ±3,8* 178,0 ±4,3*
Е+С+РР+А		153,0 ±3,5* 175,0 ±4,6*	160,0 ± 3,9* 181,0 ±4,4*
с+рр+в12+а		160,0 ± 3,5* 173,0 ±4,7*	163,0 ±4,2* 178,0 ±4,7*
Е+С+Р Р4-В ] 2+А		157,0 ±3,6* 193,0 ± 4,6*	166,0 ±4,5* 198,0 ±4,8*

* Достоверное отличие от контроля.

Бышевский А.Ш., Шаповалова Е.М.

Здесь видно, что при сочетаниях витаминов по три эффекты несколько заметнее, чем при сочетаниях по два (сравнить с табл. 1), и становятся ещё значительнее при сочетаниях по четыре. Наибольший эффект найден в случае одновременного введения избытка всех пяти испытывавшихся витаминов.

Несомненно и то, что при всех испытанных сочетаниях влияние витаминов на ТкТР нарастает при большей продолжительности введения - через 8 недель эффект во всех случаях выше, чем через 4 недели.

Являются ли эффекты сочетаний по два и более аддитивными, либо отражают антагонизм или синергизм, позволяет выяснить их анализ приемом М. Диксона и Э. Уэбба [5], результаты использования которого представлены в табл. 3. Здесь видно, что при всех сочетаниях (исключая сочетания с витамином С) обнаруживается неполная суммация эффектов на ТкТР.

Во всех сочетаниях, включающих витамин С, выявился антагонизм во влиянии на степень изменения ТкТР или отсутствует суммация эффектов (в случае сочетания витаминов Е и С). Исключение составляет лишь сочетание всех пяти исследуемых витаминов - здесь обнаружился относительно небольшой, по-крайней мере, меньший, чем в других случаях, прирост ТкТР.

Дело в том, что витамин С в высоких дозах проявляет прооксидантные свойства, активируя ЛПО и ускоряя НВСК, что снижает ТкТР [12]. В связи с этим возник вопрос, не связано ли ограничение влияния на ТкТР с этим свойством высоких доз витамина С. Чтобы ответить на этот вопрос мы провели опыт, в котором животные получали комбинацию из пяти витаминов, с той разницей, что витамин С вводили в количестве, проявляющем антиоксидантную активность, - 22 мг/кг, т.е. в четырехкратном против потребности количестве (табл. 4). В этом случае ТкТР у животных увеличилась до 232,0 ± 5,1 (т.е. на 132 %), следовательно, в большей степени, чем в случае введения того же сочетания, содержащего витамин С в восьмикратной дозе (сравнить с табл. 3, где видно, что в аналогичных условиях толерантность к тромбину выросла только на 98,0 ± 4,8 %).

Таким образом, снижение дозы витамина С с 8-кратной до 4-кратной (в сочетании из пяти витаминов) увеличило влияние на толерантность к тромбину.

Видимо, ограничение прироста эффекта в присутствии витамина С в сочетании, в количестве, превосходящем потребность в 8 раз, связано тем, что эта доза не обладает прооксидантными свойствами.

Таблица 3 Сдвиг (в процентах к контролю) величин ТкТР (выделены полужирным шрифтом)

при введении витаминов А, Е, В12, В5 и С порознь и в сочетаниях по два, три, четыре и пять в течение 8 недель (доза каждого витамина 8-кратна против суточной потребности)

Вводили порознь витамины	Сдвиг ТкТР при введении витаминов порознь, %, п = 10	Степень сдвига ТкТР и характер взаимодействия при попарном введении витаминов, п=10	Степень сдвига ТкТР и характер взаимодействия при введении витаминов в сочетаниях по три, четыре и пять, п = 10
А	54	Вводили (А+Е) 74 (неполная суммация)	Вводили (Е+С+В5) 46 (антагонизм)
Е	42	Вводили (А+В12) 59 (неполная суммация)	Вводили (Е+С+А) 98 (антагонизм)
В12	28	Вводили (А+В5) 65 (неполная суммация)	(Е+С+В12) 89 (антагонизм)
В5	33	Вводили (А+С) 48 (антагонизм)	Вводили С+В5+А) 76 (антагонизм)
с	12	Вводили (Е+В12) 54 (неполная суммация)	Вводили (С+В5+В12) 48 Вводили (антагонизм)
		Вводили (Е+В5) 39 (неполная суммация)	Вводили (В5+А+В12) 65 (неполная суммация)
		Вводили (Е+С) 40 (отсутствие суммации)	Вводили (Е+С+В5+В12) 78 (антагонизм)
		Вводили (В12+В5) 54 (неполная суммация)	Вводили (Е+С+В5+А) 81 (антагонизм)
		Вводили (В12+С) 28 (антагонизм)	Вводили (С+В5+В12+А) 78 (антагонизм)
		Вводили (В5+С) 37 (антагонизм)	Вводили (E+C+B5+Bi2+A) 98 (антагонизм)

Примечание. После выделенных полужирным шрифтом чисел в столбцах 3 и 4 в скобках указан характер взаимодействия, установленный с помощью уравнения Уэбба [6].

Таблица 4 Значения ТкТР при введении сочетания витаминов (А, Е, В5, и В12 в 8-кратном, и С в 4-кратном избытке) в течение 8 недель

ТкТР в контроле (п=10)	Крысы (п = 5 на каждом этапе) получали в избытке витамины
100 ±4,1	232 ±5,1*

* Достоверное отличие от контроля.

Выводы

• 1.    Наиболее часто используемые в практике витамины-антиоксиданты в дозах, эквивалентных лечебным, примерно в одинаковой степени повышают толерантность животных к тромбину, т.е. их способность адекватно реагировать на воздействия, ускоряющие тромбинообразование.

• 2.    При введении тех же витаминов во всех возможных сочетаниях их эффекты на толерантность к тромбину суммируются, исключая сочетания с витамином С в дозах, проявляющих проок-сидантные свойства.

• 3.    При введении витаминных сочетаний, включающих витамин С, у лиц с наклонностью к тромбофилии следует избегать использования доз, проявляющих прооксидантные свойства.