Анализ зараженности бактериями рода Borrelia клещей, собранных на территории Кировской области

5-7% инфицированных клещей. В остальных случаях передача инфекта осуществляется через 1-2 дня после присасывания [6].

Официальная регистрация клещевого боррелиоза ведется с 1992 г. В настоящее время заболевание регистрируется в 70 субъектах Российской Федерации, средний показатель заболеваемости составляет 5,1 на 100 тыс. населения [6]. Мониторинг зараженности клещей осуществляется медицинскими учреждениями, поэтому анализируют только клещей, снятых с человека. Однако в прокормлении клещей и заносе их в места возможного контакта с человеком участвуют также домашние животные, прежде всего собаки, поэтому важен анализ клещей, снятых не только с человека, но и с домашних животных, а также изъятых из среды свободно живущих клещей. Важным вопросом является также оценка зараженности клещей в зависимости от их пола. Считается, что инфекционные агенты передаются в организм человека при укусе самкам, но не исключено, что инфекция передается и при укусе самцами. Кратковременный и безболезненный укус самца можно и не заметить. Скорее всего, достаточно часто встречающиеся случаи боррелиоза, когда больные отрицают укус клеща, связаны именно с нападением самцов. Основными переносчиками боррелий в Кировской области являются таежные клещи Ixodes persul-catus, однако в связи с изменениями климата, отмечаемыми в последние годы, в некоторых районах Кировской области были выделены луговые клещи ( Dermacentor reticulatus ), и, следовательно, появилась задача мониторинга клещей и этого вида [7].

Цель исследования: определение процента инфицированных боррелиями клещей в зависимости от их видовой и половой принадлежности, а также от места и объекта сбора на территории Кировской области.

Анализ видовой и половой принадлежности клещей. В период с 2007 по 2012 гг. было исследовано 325 клещей из 9 районов Кировской области: Афанасьевского (5 клещей), Нижне–Ивкинского (5), Зуевского (27), Кирово-Чепецкого (11), Котельнического (11), Советского (3), Юрьянского (10), Оричевского (40), Куменского (10), Арбажского (66), Тужинского (29), Яранского (10), Кильмезского (10) и окрестностей г. Кирова (97). Из 325 исследованных клещей было 254 самки, 70 самцов, одна нимфа. Основная часть клещей относилась к таежным клещам ( Ixodes persulcatus), но 41

клещ, собранный в Яранском и Тужинском районах, принадлежали к виду Dermacentor reti-culatus (луговой клещ). С растительного покрова было собрано 106 клещей; с людей – 58, с кошек – 8, с собак – 167. Все образцы клещей были проанализированы на предмет зараженности боррелиями.

ПЦР анализ зараженности клещей бактериями рода Borrelia. Зараженность боррелия-ми определяли при исследовании суммарной ДНК, выделенной из каждого клеща, по наличию ампликона размером 220 пар нуклеотидов при постановке ПЦР с праймерами к участку между генами 16S и 23S рибосомных РНК. Данный фрагмент уникален для бактерий рода Borrelia [9]. Пример гель-электрофореза продуктов амплификации показан на рис. 1.

12345678 9 М

Рис. 1. Результат гель-электрофореза в 6% нативном полиакриламидном геле продуктов амплификации суммарной ДНК, выделенной из клещей. Праймеры 5S-23S spacer F/5S и 23S spacer R. Дорожки с 1-й по 8-й – образцы ДНК, выделенные из клещей с № 39 по № 46; дорожка 9 – отрицательный контроль; дорожка М – маркер «Sybenzyme» . Стрелкой отмечен продукт амплификации

За 2007 г. исследовано 28 клещей, из них 10 были инфицированы боррелиями (36%), за 2008 г. – 33 клеща (11 заражены – 33,3%), за 2009 г. – 88 клещей (22 заражены – 25%), за 2010 г. – 68 клещей (22 заражены – 32,3%), за 2011 г. – 79 (13 заражены – 16,5%), за 2012 г. – 49 (15 заражены – 30,6%). Доля зараженных клещей изменялась незначительно. Статистический анализ достоверных различий между результатами, полученными в 2007-2012 гг., не выявил. По данным Роспотребнадзора среди укушенных клещами людей наблюдалось увеличение процента зараженности [3]. Подобные различия, возможно, связаны с недостаточной статистической выборкой и тем, что в учреждениях

Роспотребнадзора исследовали только клещей, снятых с человека.

При анализе зараженности клещей, собранных в разных районах, было установлено, что процент зараженности варьирует от 8,3% (Арбажский район) до 66,6% (Советский район). Также высокая доля зараженных клещей выявлена не только в центральных, но и в южных, и северных районах области. По данным Роспотребнадзора, за тот же период сбора наибольшие показатели инфицированности клещей были отмечены в центральных районах (среди них Верхошижемский, Богородский, Куменский, Ар-бажский, Оричевский). При этом минимальный уровень заболеваемости клещевым боррелиозом отмечен в южных районах, расположенных в подзоне широколиственно-хвойных лесов [5]. Это может быть связано с меньшим поступлением клещей на исследование из других районов, а также исследованием переносчиков, снятых только с людей. Также стоит отметить, что зараженность клещей на территориях, обработанных акарицидами (окрестности г. Кирова), достаточна высока и составляет примерно 22,6% за период 2007-2012 гг. Данные по зараженности клещей из разных районов Кировской области представлены на табл. 1.

Таблица 1. Распределение собранных клещей по различным районам Кировской области и доля клещей, зараженных боррелиями

Предполагают, что случаи заболевания клещевым боррелиозом, когда больные отрицают укус клеща, связаны именно с нападением самцов. При этом в сборах клещей, снятых нами с людей, доля самцов варьировала от 0 до 100%. В ходе исследования были проанализированы 273 самки, из них зараженных было 73 (26,7%), из 70 самцов – 19 (27%). Статистическая оценка по показателю зараженности между группами самцов и самок различий не выявила. Таким образом, как самцы, так и самки в равной мере могут исполнять роль переносчиков боррелий, а их укус — приводить к развитию заболевания.

В Кировской области основными переносчиками боррелий являются клещи вида Ixodes persulcatus. Осенью 2010 г. в Яранском районе в большом количестве были обнаружены клещи другого вида – Dermacentor reticulatus. Данный вид клещей нетипичен для Кировской области [7]. Однако в 2010 г. погодные условия в южных районах области были сходны с отмеченными в Крыму во время осенней вспышки численности клещей этого вида [4]. Кроме того, в ходе дальнейшего исследования в 2011-2012 гг. доля клещей данного вида увеличилась. Из 41 исследованного клеща Dermacentor reticulatus зараженными боррелиями оказалось 19,5%, тогда как среди исследованных Ixodes persulcatus переносчиками боррелий было 28%.

В медицинских учреждениях на зараженность боррелиями исследуются только клещи, снятые с человека, хотя их природными прокормителями являются дикие животные, поэтому для получения более полной картины зараженности возникает необходимость исследования клещей, снятых с домашних и диких животных (собак, кошек, ежей, лосей и др.), а также извлеченных из растительного покрова (сбор на флаг). Известны данные серологического и бактериологического анализа диких животных и собак, проведенного в 2006-2009 гг. М.А. Перевозчиковой [3]. Эти исследования выявили наиболее высокий уровень заболеваемости иксодовым клещевым боррелиозом у зайца-беляка ( Lepus timidus L. ): 52,7% (2006 г.), 20,0% (2007 г.) и 47,0% (2008 г.) и лисицы ( Vulpes vulpes L. ): 38,4% (2006 г.), 37,5% (2007 г.). Несколько более низкий уровень отмечен у енотовидной собаки ( Nycte-reutes procyonoides Gray ) – 12,5% (2006 г.) и лося ( Alces alces L. ): 10,0% (2006 г.), 7,4% (2008 г.), 27,2% (2009 г.). Наименьший уровень зараженности выявлен у тетеревиных птиц ( Lyrurus tetrix L., Tetrao urogallus L., Tetrastes bonasia L .) – 5,8% (2006 г.) [3]. Однако исследование домашних животных, которые значительно теснее контактируют с человеком, было менее полным: всего было обследовано 24 собаки, и 8,3% из них имели в крови антитела к возбудителю боррелиоза [3].

В нашей работе исследованию подвергали клещей, собранных как с домашних животных и человека, так и с растительного покрова. Обобщенные по результатам исследований данные представлены в табл. 2.

Таблица 2. Зараженность клещей, собранных с различных объектов на территории Кировской области

Процент зараженных клещей, снятых с собак, всего в 0,6-0,7 раза меньше такового, отмеченного у клещей, собранных другими способами, что необходимо учитывать при проведении эпидемиологических исследований и разработке мер борьбы с переносчиками. Это позволяет отнести собак к прокормителям иксо-довых клещей и резервуарным хозяевам возбудителя боррелиоза, а также считать их индикаторами неблагополучия местности по клещевому боррелиозу. Показано, что самцы клещей являя-ются носителями возбудителей боррелиоза и, как и самки, могут быть переносчиками данного заболевания. Рекомендация: необходимо более тщательно контролировать эпидемиологическую обстановку по боррелиям не только в центральных, но и в южных районах области.