Частота выявления вируса папилломы человека высокого онкогенного риска у пациенток с сердечно-сосудистыми заболеваниями

* ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, 630091, Новосибирск, Красный просп., 52

** Екатеринбургская государственная медицинская академия, 620028, Екатеринбург, ул. Репина, 3

*** ЗАО «Вектор-Бест», 630117, Новосибирск, п/я 492

(571.52)

ВАК 14.01.12

Поступила в редакцию 10 февраля 2011 г.

М.А. Караськова,

И.Н. Кононова, Е.В. Фоляк, О.Н. Гришаева, 2011

Одна из актуальных проблем здравоохранения – профилактика рака шейки матки, который по распространенности занимает второе место среди онкологических заболеваний органов репродуктивной системы. Обсуждаются вопросы, касающиеся факторов риска вируса папилломы человека как основной причины рака шейки матки, проблем цитологического скрининга (вторичной профилактики) в России, возможностей и ожидаемых результатов организованного скрининга, достоинств и недостатков цитологического исследования. Представлены новые скрининговые тесты в профилактике рака шейки матки, приводятся перспективы молекулярных маркеров. Ключевые слова: рак шейки матки; вирус папилломы человека.

Рак шейки матки (РШМ) является вторым по распространенности онкологическим заболеванием органов репродуктивной системы в мире и занимает первое место среди причин смерти от рака у женщин развивающихся стран. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) за 2007 г., ежегодно диагностируются почти 500 тысяч новых случаев РШМ. Ежегодно в России раком шейки матки заболевают более 13 000 женщин и более 6 000 умирают [1, 8, 10]. За последние годы рак шейки матки очень «помолодел». Заболевание манифестирует в молодом возрасте, 31% женщин заболевают в возрасте до 45 лет.

Рак шейки матки является первой злокачественной опухолью, в отношении которой установлена вирусная этиология. Имеется огромное количество эпидемиологических и молекулярно-биологических данных, свидетельствующих о том, что вирус папилломы человека (ВПЧ), передающийся половым путем, является основной причиной возникновения дисплазии и РШМ [1, 6, 7, 9].

С помощью метода гибридизации было показано наличие ДНК ВПЧ в 90–100% злокачественных опухолей шейки матки [2]. Однако полученные с помощью перечисленных методов доказательства не укладываются в триаду Коха, поэтому говорят не об этиологической роли данного мик- роорганизма, а о его ассоциации с конкретной соматической или злокачественной патологией. Тяжесть патологического процесса зависит от индивидуальной вариабельности взаимоотношений микро-и макроорганизма и от вариабельности общего иммунного и местного ответов.

Нарушения кровообращения и процессы, протекающие в организме больного с сердечно-сосудистыми заболеваниями, снижают биологические факторы защиты организма (иммунитета), в результате чего происходит нарушение барьерных функций, эндоэкологии человека и внедрение в организм инфекционных агентов – бактерий и вирусов.

Вирус папилломы человека представляет собой ДНК-содержащий вирус и имеет специфические гены – белки (Е6 и Е7), которые играют ключевую роль в индукции цервикального канцерогенеза, в норме не экспрессируются в клетках цервикального эпителия, но значительно интенсивнее синтезируются вследствие неконтролируемой экспрессии вирусных онкогенов, что является одной из сфер поиска эффективных маркеров [2–4].

Активность этих генов контролируется вирусными и клеточными факторами. Для возникновения моноклональной популя- ции и селекции клона с неконтролируемой пролиферацией необходима мутация клетки [2–4].

В мире основным подходом для предотвращения РШМ является тактика раннего скрининга, которая включает не только цитологическое и кольпоскопичес-кое обследование, но и тест на ДНК ВПЧ, что позволяет повысить чувствительность и специфичность ранней диагностики рака шейки матки до 99–100% [5, 6].

Современные тесты на ДНК ВПЧ позволяют определять не только типы, но и концентрацию наиболее распространенных при РШМ вирусов папилломы, что необходимо как для прогнозирования возможности развития злокачественной трансформации, так и для мониторинга инфекции [3, 4], где в качестве одного из критериев клинически значимой инфекции рассматривается количество вируса (вирусная нагрузка). Было установлено, что показатель спонтанной элиминации вируса ниже, а риск прогрессии выше в случаях папилломавирусной инфекции (ПВИ) с большой вирусной нагрузкой [2, 5, 9].

Рост населения в Новосибирской области прекратился в 1992 г., и начиная с 1993 г. число жителей области стало сокращаться. По данным Министерства здравоохранения Новосибирской области, в 2009 г. показатель рождаемости составил 13% на тысячу населения, показатель смертности 14,1%, таким образом, медико-демографическая ситуация в Новосибирской области характеризуется депопуляцией.

Изучение распространенности ВПЧ в регионах Сибири крайне важно для организации в нашем регионе целевых мероприятий по ранней диагностике ПВИ, профилактике ее персистенции, формированию групп риска и, следовательно, для реализации потенциальной возможности снижения риска развития очаговых диспластических и злокачественных трансформаций эпителия урогенитального тракта, что и обусловило актуальность данного исследования.

Цель настоящей работы – оценить распространенность вируса папилломы человека высокого онкогенного риска и вирусную нагрузку у пациенток с сердечно-сосудистыми заболеваниями.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Работа не ущемляла права и не подвергала опасности благополучия субъектов в соответствии с требованиями биомедицинской этики, утвержденными Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации от 2000 г. «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками от 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Приказом Минздрава РФ № 266 от 19.06.2003 г.

Согласно протоколу, критериями включения для всех групп явилось: добровольное осведомлен- ное согласие пациентки на участие, наличие клинических симптомов, подтвержденных результатами микроскопического и микробиологического исследования. Критерии исключения: беременность и лактация, воспалительный процесс специфической этиологии. В исследование были включены сотрудники ННИИПК во время профилактического осмотра за 2009–2010 гг. Лабораторная диагностика осуществлялась в лаборатории ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск).

Обследовано 178 пациенток в ННИИПК (средний возраст 37±2,5 лет) с сердечно-сосудистой патологией. Cтруктура сердечно-сосудистой патологии у обследованных пациенток выглядела следующим образом: с нарушением сердечного ритма 23 пациентки (12,9%), с системным атеросклерозом и синдромом дисплазии соединительной ткани 11 пациенток (6,2%), с вегето-сосудистой дистонией 88 пациенток (49,4%), с ишемической болезнью сердца 17 пациенток (9,6%), с приобретенными пороками сердца 14 пациенток (7,9%), с тромбозами и тромбоэмболическими осложнениями 8 пациенток (4,5%), с артериальной гипертензией 17 пациенток (9,6%).

Пациентки с сердечно-сосудистой патологией были разделены на две группы по состоянию шейки матки: первая – пациентки с фоновыми заболеваниями шейки матки (n = 141; 79,2%). В эту группу включены пациентки с такими заболеваниями шейки матки, как эктопии, цервициты, кисты, полипы цервикального канала и шейки матки, гиперплазии и деформации шейки матки. Вторая группа – здоровые, не имеющие визуальных изменений эпителия шейки матки (n = 37; 20,8%).

Забор материала проводился с помощью современных одноразовых инструментов (специальные щетки – эндобраши) из цервикального канала. Полученный клинический материал мы исследовали на наличие ДНК ВПЧ 16 и 18 типов методом ПЦР по конечной точке и наличие Е7 белка ВПЧ типов 16 и 18 методом ИФА.

В работе использовали комплект реагентов для ПЦР с типоспецифическими праймерами производства фирмы «Интерлабсервис». Детекцию Е7 белка (потенциального онкогена ВПЧ типов 16 и 18) осуществляли методом ИФА с использованием МАТ к Е7 белку в разработке ЗАО «Вектор-Бест».

Статистическую обработку данных проводили с использованием точного критерия Фишера, который используется для анализа качественных признаков при малых объемах выборок (v<50).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ДНК ВПЧ была обнаружена в 1-й группе пациенток, имеющих фоновые заболевания шейки матки, у 117 человек (65,7%). Причем ДНК ВПЧ без Е-антигена выявлена у 90 (76,9%) пациенток, ДНК в сочетании с Е-антиге- ном у 27 пациенток (23,1%). 24 пациентки (34,3%) 1-й группы были отрицательны по ДНК ВПЧ и, соответственно, Е-антигену. Во второй группе пациенток, с визуально здоровой шейкой матки, ДНК ВПЧ была обнаружена у 19 пациенток (51,4%), причем ДНК ВПЧ без Е-антигена выявлена у 18 (94,7%) пациенток ДНК в сочетании с Е-антигеном у одной пациентки (5,3%).

Анализ распределения типов ВПЧ (+) в 1-й группе показал, что лидирующим по частоте встречаемости является ВПЧ тип 16 (+) – 68 (59,1%) пациенток, на втором месте ВПЧ тип 18 (+) – 26 (22,2%) пациенток, инфицирование двумя типами ВПЧ типов 16 (+) и 18 (+) наблюдалось у 23 (19,7%) пациенток.

Во 2-й группе ВПЧ тип 16 (+) встречался у 8 (42,1%) пациенток, ВПЧ 18 (+) у 10 (52,6%) пациенток, инфицирование одновременно двумя типами ВПЧ 16 (+) и 18 (+) выявлено у одной (5,3%) пациентки. При исследовании распределения вирусной нагрузки ВПЧ (+) среди лиц с фоновыми патологиями шейки матки количество пациенток, имеющих высокую вирусную нагрузку (+++ и ++++), составило 28 (23,9%) и 14 (12,0%) соответственно. Во 2-й группе высокая вирусная нагрузка (+++) выявлена лишь у одной (5,3%) пациентки.

Анализ результатов определения Е7 белка показал, что у пациенток 1-й группы этот белок обнаружен у 9 (33,3%), имеющих ВПЧ тип 16 (+), у 6 (22,2 %) с ВПЧ тип 18 (+) и у 12 (44,4%) пациенток, инфицированных двумя типами ВПЧ одновременно. Во 2-й группе белок Е7 не обнаружен. Пациентки, имеющие Е7 белок, имели также высокую вирусную нагрузку (+++ и ++++).

ВЫВОДЫ

• 1.    Высокая распространенность онкогенных типов папилломавирусной инфекции шейки матки и высокий уровень вирусной нагрузки у пациенток с сердечнососудистой патологией можно объяснить снижением общего и местного иммунитета, что характерно для экстрагенитальной патологии.

• 2.    Анализ особенностей распространенности ВПЧ среди пациенток с сердечно-сосудистой патологией может быть использован в целевых мероприятиях по ранней диагностике рака шейки матки, профилактике персистенции вируса, формированию диспансерных групп риска.

• 3.    Определение вирусной нагрузки и белка Е7 дает возможность проводить мониторинг инфекции у больных с целью коррекции и оценки адекватности проводимой терапии и прогнозировать течение заболеваний.