Изменения параметров системы гемостаза у собак старше 8 лет в связи с хирургическим вмешательством

Старение – это сложный процесс биологического характера, который приводит к постепенному снижению способностей организма поддерживать гомеостаз. Однако сама старость – это не болезнь, а скорее необратимая и постепенная потеря функциональных и резервных возможностей органов и систем, которая приводит к прогрессирующему снижению способности справляться со стрессами – физиологическими или обусловленными окружающей средой. Возрастные изменения, гемостаза.

У пожилых собак старше восьми лет наблюдается незначительное повышение агрегационных свойств тромбоцитов и эндотелия сосудов, что проявляется повышением скорости агрегации с ристомицином.

При этом достоверно установлено образование более устойчивых агрегатов под действием коллагена, что является следствием понижения активности противосвертывающей системы.

В плазме крови собак с возрастом повышается концентрация фибриногена, в связи с этим укорачивается тромбиновое время и увеличивается концентрация РФМК.

Повышение свертывающих свойств крови пожилых собак, вместе с понижением противосвертывающей активности, вполне вероятно, может повышать риск гиперкоагуляционных состояний [1].

Хирургическое вмешательство является сильным стрессовым фактором для организма, при этом оно связано с повреждением тканей и кровеносных сосудов, что не может не приводить к соответствующим изменениям в системе гемостаза [2‒6]. Однако большинство исследований системы гемостаза у собак проводились при вынужденном оперативном вмешательстве, то есть при наличии какой-либо дооперационой патологии у животного [7, 8, 9], что не могло не оказывать влияния на результат исследования. Проведение исследования на клинически здоровых животных, на наш взгляд, повышает достоверность результатов, так как в этом случае исключается действие сопутствующих патологий на такую тонкую структуру организма, как система гемостаза.

Поэтому целью нашего исследования стало выявление изменений параметров системы гемостаза у здоровых собак старше 8 лет после хирургического вмешательства.

Материалы и методы

Исследованиепроводиливдваэтапа. Напервом этапеисследований определили показатели гемостаза у клинически здоровых собак в двух возрастных контрольных группах. В первую группу включили половозрелых собак в возрасте от 1 до 8 лет (n=20 собак, 10 сук и 10 кобелей); во вторую группу – пожилых животных в возрасте от 8 до 16 лет (n=12 собак, 6 сук и 6 кобелей). На втором этапе произвели клиническую оценку изменений в системе гемостаза у здоровых собак, возникающих при плановых хирургических операциях, в двух опытных группах. В первую опытную группу включили половозрелых собак в возрасте от 1 до 8 лет (n=12 собак, 6 сук и 6 кобелей); во вторую ‒ стареющих собак в возрасте от 8 до 13 лет (n=10 собак, 5 сук и 5 кобелей). У собак опытных групп взяли кровь на морфологическое, общеклиническое и гемостазиологическое исследование до хирургического вмешательства.

Повторно кровь у собак опытных групп брали непосредственно после окончания хирургических манипуляций.

К участию в опыте допускались только клинически здоровые животные, не имеющие отклонений в параметрах морфологического и общего исследований крови.

Все оперируемые собаки в качестве вводного наркоза получали препарат пропофол в дозе 2-4 мг/кг и золетил в дозе 1-2 мг/кг внутривенно, титруя до эффекта, начиная с 1/8 дозы. Поддерживали с помощью пропофола в дозе 6-8 мг/кг и золетила в дозе 4 мг/кг в/в. В качестве премедикации использовали атропин 0,03 мг/кг внутримышечно и пипольфен в дозе 1,0 мл/кг внутривенно или внутримышечно. Основные показатели жизнедеятельности у оперируемых собак отслеживали с помощью ветеринарного монитора IM-10 Zoomed.

Для морфологического и общеклинического исследования крови использовали вакуумные пластиковые пробирки с ЭДТА. Подсчет форменных элементов крови, определение уровня тромбокрита (PCT) и среднего объема тромбоцита (MPV), количество гемоглобина (HGB, Hb) и гематокрита (HCT) производили с помощью автоматического гематологического анализатора Exigo 17. Однако при подсчете тромбоцитов с наличием атипичных форм и тромбоцитарных агрегатов, а также у кошек, автоматические счетчики могут давать искаженную информацию [10‒17], поэтому каждый результат перепроверяли вручную. Количество тромбоцитов и лейкоцитарную формулу подсчитывали в мазке крови, окрашенной по Романовскому – Гимзе. Фотоизображения тромбоцитов получали с помощью цифровой фотокамеры Canon Power Shot SX100 IS.

Кровь для гемостазиологического исследования брали в вакуумные пластиковые пробирки, содержащие 3,8%-ный раствор цитрата натрия. Адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом с применением фотоэлектроколориметра (ФЭК) КФК-2 по Howard M. A. Определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) с индукторами агрегации – АДФ (концентрация 0,1 мг/мл), коллагеном (концентрация 20 мг/мл) и ристомицином (концентрация 15 мг/мл).

Параметры плазменно-коагуляционного гемостаза определяли на коагулометре Thrombostat производства Behnk Elektronik (Германия) с использованием цитратной бестромбоцитной плазмы после добавления различных реактивов производства фирмы «Технология-Стандарт» и НПО «РЕНАМ».

Полученные в ходе исследования результаты обрабатывались с помощью программного пакета Statistica 6.1. Значения полученных ре- зультатов в работе представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней (M ± m). Сравнение между собой данных проводилось с применением критерия Вилкоксона для зависимых групп. Уровень значимости устанавливался равным 0,05.

Результаты исследования

У всех исследуемых собак после хирургического вмешательства изменились показатели красной крови ( табл. 1 ). Количество эритроцитов после операции достоверно стало меньше, как в группе половозрелых собак (р = 0,007), так и в группе стареющих собак (р = 0,006). Соответственно, регистрировали понижение гематокрита в группе половозрелых (р = 0,04) и в группе стареющих собак (р = 0,037).

Таблица 1 – Морфология крови у собак опытных групп до и после операции (M ± m)

Показатель, единицы измерения	Половозрелые собаки, n =12 после до операции операции		Стареющие собаки, n = 10 после до операции операции
Количество эритроцитов, х1012/л	7,30 ± 0,35	5,60± 0,33*	6,9 ± 0,15	5±0,24*
Гематокрит, %	0,48 ± 0,01	0,39± 0,02*	0,41 ± 0,05	0,31 ± 0,07*
Количество тромбоцитов, х109/л	402,78±18,22	351,64±17,82*	394,21±20,29	315,3±60*
Средний объем тромбоцитов, fl	7,9 ± 0,30	12,01 ± 0,26*	8,3 ± 0,12	13,5 ± 2,7*
Тромбокрит, %	0,40 ± 0,02	0,36 ± 0,04	0,45 ± 0,03	0,35 ± 0,06*
* Различия до и после операции статистически достоверны (р ≤ 0,05).

Наблюдалось статистически значимое понижение количества тромбоцитов в обеих опытных группах, (р = 0,034 в группе половозрелых и р = 0,015 в группе стареющих собак), но количество крупных, активированных тромбоцитов стало выше, что подтверждают результаты морфологического исследования ( рис. 1 ).

Рисунок 1 - Тромбоциты в мазке крови собаки до операции (слева) и после операции (справа). Окраска по Романовскому - Гимзе. Увеличение: окуляр х10, объектив х100

Средний объем тромбоцитов увеличился как у половозрелых (р = 0,0012), так и у стареющих собак (р = 0,017), а тромбокрит достоверно уменьшился только в группе стареющих собак (р = 0,023).

В опытной группе половозрелых собак суммирующий индекс агрегации со всеми индукторами, а особенно с ристомицином, после операции был несколько выше, чем до операции, но статистической достоверности эти различия не имели, как и скорость агрегации с АДФ, коллагеном и ристомицином ( табл. 2 ).

Таблица 2 ‒ Тромбоцитарный гемостаз у собак опытных групп до и после операции, M ± m

Показатель, единицы измерения	Половозрелые собаки, n =12 до         после операции    операции		Стареющие собаки, n = 10 после до операции операции
Агрегация с АДФ
СИАТ, %	81,08 ± 6,92	88,75± 10,49	99,12 ± 11,07	120 ± 15,11
СА, мин	0,02 ± 0,005	0,01± 0,002	0,01 ± 0,003	0,015± 0,003
ИДТ, %	3,94 ± 0,86*	1,05± 0,37*	4,1 ± 1,2	0,1 ± 0,07*
Агрегация с коллагеном
СИАТ, %	84,10 ± 9,89	90,96± 9,28	101,3 ± 15,7	140,5 ± 10,7*
СА,мин	0,008      ± 0,003	0,008± 0,002	0,02 ± 0,003	0,013 ± 0,005
ИДТ, %	4,33 ± 0,87*	1,11± 0,40*	3,61 ± 1,04	1,2 ± 0,04*
Агрегация с ристомицином
СИАТ, %	76,85 ± 8,61	104,56± 11,78	91,3 ± 15,01	133,13 ± 10,5
СА, мин	0,007      ± 0,002	0,008± 0,003	0,03 ± 0,001	0,015       ± 0,001*
ИДТ, %	4,68 ± 1,21*	1,44± 0,47*	1,98 ± 0,64	0,93 ± 0,32
* Различия до и после операции статистически достоверны (р ≤ 0,05).

В группе стареющих собак статистически достоверно вырос суммирующий индекс агрегации под действием коллагена (р = 0,021), но при этом замедлилась скорость агрегации под действием ристомицина (р = 0,018).

Индекс дезагрегации тромбоцитов в группе половозрелых собак достоверно уменьшился (при индукции АДФ р = 0,018, под действием коллагена р = 0,009, при ристомицин-индуцированной агрегации р = 0,049, рис. 2 ).

СИАТ

Ристомицин ИДТ

Ристомицин СА

Ристомицин СИАТ

АДФ ИДТ

Коллаген СИАТ

Коллаген

—♦—До операции

-■-Половозрелые собаки после операции Стареющие собаки после операции

Рисунок 2 - Сравнение изменений адгезивно-агрегационной способности тромбоцитов собак опытных групп разного возраста после хирургического вмешательства. Показатели групп до операции приняты за 100%.

В группе стареющих собак индекс дезагрегации под действием ристомицина был очень низким до операции и его изменения не были статистически значимы, но произошло достоверное уменьшение индексов дезагрегации с АДФ (р = 0,04) и коллагеном (р = 0,037).

Вероятно, образующиеся вследствие хирургической травмы агрегаты более устойчивы, чем до операции, что, возможно, связано со снижением активности антитромбина ( табл. 3 ) в группе половозрелых собак (р = 0,022), и, особенно, в группе стареющих собак (р = 0,003).

Вместе со снижением противосвертывающих свойств крови у половозрелых собак после операции наблюдается достоверное повышение уровня фибриногена (р = 0,012) и РФМК (р = 0,004), при этом повышение ТВ, ПВ и АЧТВ не было статистически достоверно.

Таблица 3 ‒ Параметры плазменного гемостаза и противосвертывающей системы у собак опытных групп до и после операции, M ± m

Показатель, единицы измерения	Половозрелые собаки, n =12 после до операции операции		Стареющие собаки, n = 10 до       после операции операции
ПВ, с	11,37 ± 0,38	10,92± 0,40	12,1 ± 0,35	8,1 ± 1,01*
ТВ, с	12,07 ± 0,48	10,94± 0,49	11,28 ± 0,51	9,36 ± 0,55*
Кол-во фибриногена г/л	2,06 ± 0,16	3,63± 0,32*	3,14 ± 0,16	5,24 ± 1,01*
АЧТВ, с	14,04 ± 0,47	13,13± 0,36	13,9 ± 0,51	10,87± 2,21*
Кол-во РФМК, мг/100 мл	4,20 ± 0,27	7,33± 0,55*	8,20 ± 0,43	12,4 ± 1,03*
Активность АТ III, %	128,67 ± 2,88	115,00± 2,45*	125,31 ± 5,62	96,3 ± 15,1*
* Различия до и после операции статистически достоверны (р ≤ 0,05).

В группе стареющих собак после операции произошли существенные изменения в параметрах плазменного гемостаза ( рис. 3 ).

Рисунок 3 - Изменение параметров плазменного гемостаза у собак опытных групп в результате хирургического вмешательства

Зарегистрировано укорочение протромбинового времени (р = 0,001), вышедшее за пределы референсных значений (10,5 – 12,5 с), тромбиновоговремени(р=0,009), активированноготромбопластинового времени (р = 0,035). Количество фибриногена (р = 0,023) также превысило нормативные значения (до 4 г/л), при этом увеличилась и концентрация растворимых фибрин-мономерных комплексов (р = 0,0015).

Обсуждение и выводы

В результате хирургического вмешательства у всех животных, включенных в опытные группы, происходят изменения в системе гемостаза. Понижается количество эритроцитов и гематокрит. Из поврежденных тканей высвобождается тканевой тромбопластин, играющий важную роль в образовании тромбина. При этом тромбин активирует тромбоциты, которые несут на своей мембране тромбоцитарный тромбопластин и специфические рецепторы к большинству факторов свертывания крови. Также тромбоциты секретируют содержимое тромбоцитарных гранул, значительно увеличивая местную концентрацию прокоагулянтов. В кровяное русло поступают многочисленные активаторы тромбоцитарной функции, которые рекрутируют из тока крови новые тромбоциты [2, 18, 19, 20], что приводит к понижению количества тромбоцитов в периферической крови.

У половозрелых собак понижается количество эритроцитов и гемоглобина, уменьшается количество тромбоцитов и незначительно растет их средний объем, при этом уменьшается дезагрегация тромбоцитов вместе с небольшим понижением активности антитромбина и повышением фибриногена и РФМК, не выходящими за пределы референсных значений.

В группе стареющих собак после операции наблюдаются более существенные изменения: также понижаются параметры красной крови, уменьшается количество тромбоцитов с увеличением среднего объема и понижением тромбокрита. Вместе с этим повышается суммирующий индекс агрегации с коллагеном и уменьшаются индексы дезагрегации с АДФ и коллагеном, что говорит о существенном повышении агрегационных свойств тромбоцитов. Значительное понижение активности антитромбина (инактиватора тромбина), способствует повышению концентрации тромбина, сопровождаемое укорочением ТВ и увеличением РФМК и фибриногена в группе стареющих собак после оперативного вмешательства. Сокращение ПВ и АЧТВ в комплексе со всем вышеперечисленным дают основания предполагать наличие гиперкоагуляционного состояния.