Изучение терапевтической активности нового противотуберкулезного препарата - Линарола

Эпидемическая и эпизоотическая ситуация по туберкулезу продолжают оставаться напряженными. Туберкулез крупного рогатого скота занимает особое место среди других инфекционных болезней животных, его своеобразие в том, что болезнь долгие годы может протекать без проявления клинических признаков. В неблагополучных стадах достаточно остаться не выявленным одному больному животному, чтобы на долгие годы продлить проведение оздоровительных мероприятий [2, 4].

Низкая эффективность используемых в настоящее время противотуберкулезных препаратов объясняется не их слабыми бактери- цидными и бактериостатическими свойствами, а длительным – более полувека их использованием и постоянным ростом количества больных с множественной лекарственной устойчивостью, вызванным появлением лекарственно-резистентных штаммов микобактерий. Большинство лекарственных препаратов действуют неселективно, поэтому возникает необходимость ввода избыточного количества лекарственного вещества, что приводит к возникновению серьезных побочных проявлений в виде нарушения функций печени, почек, гемопоэза и т.д. [3].

Новые противотуберкулезные препараты в последние 40 лет не появлялись. Поэтому поиск, создание новых фармацевтических препаратов, обладающих антимикобактери-альными свойствами и позволяющих повысить эффект химиопрофилактики и химиотерапии туберкулеза остается весьма актуальной задачей [1].

В связи с вышеизложенным, в Казанском институте органической и физической химии им. А.Е. Арбузова синтезирован новый противотуберкулёзный препарат –Линарол, который относится к химии азотсодержащих гетероциклидов и может быть использован в ветеринарной для профилактики туберкулеза у молодняка сельскохозяйственных животных.

Исходя из вышеизложенного, целью наших исследований являлось изучение специфической противотуберкулезной активности синтезированного препарата Линарол, в отношении M. tubercuiosis штамма Н37Rv (МБТ), на модели острого эксудативно-некротического туберкулеза мышей. Для выполнения поставленной цели определена задача – изучить микробиологическим методом in vivo противотуберкулезную активность нового синтезированного препарата Амикол.

Материал и методы. Определение противотуберкулезной активности Линарола в системе in vivo проводили на 16 самцах ин-бредных мышей линии I/St, полученных из вивария ФГБУ «Центральный научноисследовательский институт туберкулеза» РАМН. Мышей содержали в условиях, согласно ветеринарно-санитарным требованиям (Приказ МЗ и СР РФ от 23 августа 2010 года за №708н). Вес мышей – 22 -23 грамма. Всех животных заражали внутривенным введением M. tuberculosis штамма H37Rv из коллекции института Пастера (Франция) в латеральную хвостовую вену в летальной дозе 5 × 10⁶ КОЕ/мышь. Все экспериментальные животные были разделены на три группы:

• 1.    Зараженные мыши без лечения (контроль) – 5 шт.;

• 2.    Зараженные мыши, получающие внутрижелудочно препарат изониазид, в дозе 50 мг/кг массы тела – 5 шт.;

• 3.    Зараженные мыши, получающие внутрижелудочно препарат Линарол, в дозе 50 мг/кг массы тела – 6 шт.

Испытуемые препараты вводили через неделю после заражения, ежедневно, внутри-желудочно, с помощью металлического зонда с оливой, в течение 5 суток, предварительно растворив их в дистиллированной воде. Объем вводимых препаратов составлял 0,5 мл/мышь.

Через 14 суток после инфицирования животных опытных и контрольной групп выводили из эксперимента методом цервикальной дислокации для определения количества колониеобразующих единиц (КОЕ) M. tuberculosis в легких и селезенке мышей.

Для определения количества микобактерий (КОЕ МБТ) в органах зараженных мышей легкое и селезенку каждой мыши гомогенизировали в 2 мл физиологического раствора, готовили серию 10 кратных разведений исходной суспензии в физиологическом растворе и 50 мкл каждого разведения помещали на чашку Петри, покрытую агаром Дюбо. Чашки Петри с нанесенными суспензиями клеток легкого и селезенки инкубировали в термостате, в течение 21 суток, при температуре 370С, после чего подсчитывали число колоний на чашке и определяли количество КОЕ микобактерий в исследуемых органах мышей.

Для статистической обработки данных использовали программу «Биостатистика», достоверность определяли с помощью критерия Манна-Уитни.

Результаты исследования. Основными показателями эффективности специфической антимикобактериальной терапии экспериментальных животных являются – средний срок жизни животных после инфицирования, количество КОЕ МБТ в органах инфицированных животных, тропных к туберкулезу и степень патологических изменений внутренних органов.

На момент убоя, все экспериментальные мыши были живы и выглядели клинически здоровыми. Количество КОЕ МБТ, высеянных из органов животных, представлено в таблице 1.

Представленные в таблице 1 данные показывают, что по сравнению с контрольной группой, количество КОЕ микобактерий туберкулеза в легком мышей, получавших Ли-нарол, уменьшилось примерно в 3,5 раза. В селезенке этой группы мышей, количество КОЕ микобактерий по сравнению с контрольной группой, сократилось в 10 раз. В группе мышей, получавших изониазид, КОЕ МБТ в легком сократилось более чем в 100 раз, а в селезенке более чем в 10 раз.

Таблица 1 - Количество КОЕ МБТ в легком и селезенке мышей через 14 суток после инфицирования в дозе 5 × 106 КОЕ/мышь

Примечание: ^∗ - Р ≤ 0,06.

Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что препарат Линарол при внутрижелудочном введении в дозе 50 мг/кг массы тела, в течение 5 дней достоверно снижал количество КОЕ микобактерий туберкулеза в легких и селезенке экспериментальных мышей в сравнении с мышами контрольной группы. Изониазид, в аналогичной дозе и сроках введения, снижал количество КОЕ МБТ на 2 порядка больше в легких, чем Линарол. Однако, показатели КОЕ в селезенке в группах мышей, получавших изониазид и Линарол, были практически одинаковыми.

Заключение. На основании полученных данных можно утверждать, что препарат Линарол обладает противотуберкулезной активностью, в отношении M. tuberculosis штамма H37Rv, которая в исследуемой дозе при краткосрочном введении была в 100 раз ниже в легком экспериментальных животных, чем препарата стандарта изониазид в аналогичной дозе и сроках введения. В селезенке противотуберкулезная активность Линарола и препарата стандарта изониазид была практически одинаковой.

Учитывая низкую токсичность препара- та Линарол (максимально вводимая доза белым мышам и крысам – 4000 мг/кг массы тела, для сравнения LD50 изониазида – 213 мг/кг массы тела), оптимально было бы изучить противотуберкулезную активность Линарола в высоких дозах и при длительном сроке лечения.

Резюме

Целью данной работы, было изучение специфической противотуберкулезной активности препарата Линарол, в отношении M. tubercuiosis штамма Н 37 Rv (МБТ), на модели острого эксуда-тивно-некротического туберкулеза мышей. Установлено, что что препарат Линарол при внутри-желудочном введении в дозе 50 мг/кг массы тела, в течение 5 дней достоверно снижал количество КОЕ микобактерий туберкулеза в легких и селезенке экспериментальных мышей в сравнении с мышами контрольной группы. Изониазид, в аналогичной дозе и сроках введения, снижал количество КОЕ МБТ на 2 порядка больше в легких, чем Линарол. Однако, показатели КОЕ в селезенке в группах мышей, получавших изониазид и Линарол, были практически одинаковыми.