Лейкограмма крови цыплят под влиянием энрофлоксацина при экспериментальном сальмонеллезе

Увеличение плотности посадки поголовья птиц, вызывает нарушение параметров микроклимата, что отражается в возрастании температурных показателей в помещении, а также уровня бактериальной загрязненности. Подсчитано, что при нарушении плотности расположения в расчете на 1 м2 пола на одну птицу, такая загрязненность повышается в 1,5-2 раза [11]. Такое положение обуславливает активное развитие болезней инфекционной этиологии, из которых одно из главных мест занимает сальмонеллез. Это заболевание вызывается серотипами бактерии рода Salmonella, наиболее сильно поражает молодое поголовье птиц и проявляется септицемией и диареей. Взрослые птицы могут быть переносчиками возбудителя, но патология у них может протекать бессимптомно, либо же в виде перитонита, поражения яичников и яйцеводов [10]. Кроме того, полученная от больных кур продукция является причиной серьезных токсикоинфекций [15]. Опасными серотипами, определяющими около 85-90 % случаев сальмонеллеза у заболевших людей, являются Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, а также Salmonella infantis [4]. Вследствие вспышки сальмонеллеза отмечают и значительные экономические потери птицефабрик, происходящие из-за снижения прироста массы птицы, большого падежа, затрат на терапевтические и профилактические действия [12].

Для лечения птицы при сальмонеллезе применяют противомикробные препараты разных групп, в том числе фторхи-нолонов. Использование фторированных хинолонов в ветеринарии является эффективным решением проблем, связанных с патологиями микробного происхождения [14]. Энрофлоксацин – представитель данной группы, синтезированный изначально для терапевтических и профилактических мероприятий в птицеводстве, характеризуется как ингибитор ДНК-гиразы, проявляющий хорошие антибактериальные свойства, а также обладающий продолжительным бактерицидным эффектом и способностью к потенцированию фагоцитоза [8]. Кроме того, особенностью препарата является его способность проникать и накапливаться в фагоцитах; это является важным в связи с тем, что сальмонеллы могут персистировать в макрофагах, избегая при этом иммунную систему [6]. Однако, несмотря на популярность применения эн-рофлоксацина, а также его положительные фармакодинамические характеристики, малоизученным является его воздействие на показатели белой крови, которые непосредственно отражают физиологическое состояние птицы после терапевтических мер, направленных против бактериальной инфекции. В связи с этим, целью нашей работы явилось исследование влияния эн-рофлоксацина на показатели белой крови у молодняка птиц в результате лечения экспериментального сальмонеллеза.

Материал и методы исследований. Для достижения поставленной цели были проведены два опыта («a» и «b») на суточных петушках кросса Хайсекс Браун. Группы Ia и Ib (контрольные) в ходе эксперимента получали основной рацион и чистую воду. Группы IIa и IIb за сутки до экспериментального заражения и в течение четырех суток после получали с водой эн-рофлоксацин в дозе 200 мг/л. На вторые сутки опыта осуществлено инфицирование путем внутрибрюшинной инъекции цыплят групп IIa и IIIa культурой Salmonella typhimurium, а групп IIb и IIIb – культурой Salmonella enteritidis, в концентрациии 30

млн. КОЕ/0,5 мл. Отбор крови у всех подопытных петушков осуществляли методом внутрисердечной пункции в первые, третьи, пятые, седьмые и девятые сутки после заражения.

Проведено исследование количества лейкоцитов, которое измеряли методом прямого подсчета в камере Горяева. В окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках крови устанавливали численность эозинофилов, базофилов, псевдоэозинофилов, лимфоцитов и моноцитов, после чего по процентному содержанию отдельных форм относительно общего числа лейкоцитарных клеток определяли лейкограмму [1].

Статистическая обработка цифрового материала проведена с использованием программы SPSS Statistic 17.0, достоверность полученных результатов оценивали при помощи непараметрического критерия Манна-Уитни.

Результаты исследований. Лейкоциты – клетки, отражающие иммунный статус и реагирующие на проникновение чужеродных бактериальных агентов в организм, в результате которого чаще всего происходит изменение их количества в сторону повышения. В двух проведенных опытах зафиксированы определенные аналогичные изменения в содержании лейкоцитов. Так, в опыте «a» достоверное увеличение численности этих клеток на 19 % и 15 %, в сравнении с контролем, наблюдается на третьи сутки исследования в группах IIIа и IIа соответственно. В опыте «b», в группе IIIb, возрастание количества лейкоцитов на 20 % относительно контрольных значений, было зарегистрировано только на третьи сутки после заражения. Подобное кратковременное увеличение числа клеток, вероятно, вызвано влиянием сальмонеллы, которая, как известно, способна проникать в макрофаги, обходя при этом иммунную систему, поэтому первичная ответная реакция организма не была ярко выраженной [6].

Более информативными и достоверными были данные, полученные в результате подсчета лейкоцитарной формулы. Так, в исследовании цыплят, зараженных S. enteritidis, в группе IIIb зарегистри- рованы значительные изменения как относительного, так и абсолютного количества базофилов. В первый день после заражения отмечается снижение содержания этих клеток на 65%, а затем увеличение на седьмые и девятые сутки на 67 % и 48 % соответственно. Такой неоднозначный сдвиг содержания в сторону уменьшения, а затем повышения числа базофилов, по-видимому, произошел вследствие поступления антигена в организм птиц [5]. Достоверные изменения количества таких клеток в группах, зараженных S. typhi-murium, не столь выраженные, однако отличаются от показателей второго опыта. Сдвиг был в сторону возрастания абсолютного и относительного содержания, но в группе IIa фиксировался только на 1 сутки после заражения, в среднем на 55 %, в отличие от показателей цыплят группы IIIa, у которых увеличение относительно контрольных данных произошло на первый и третий день и составило 55 % и 57 % соответственно (Таблица 1).

Таблица 1 – Динамика количества различных видов лейкоцитов крови цыплят опыта «a» (Salmonella typhimurium), 109·л-1

в	cd в в	Моноциты	Лимфоциты	Эозинофилы	Псевдоэозинофилы	Базофилы
1	Ia	0,46±0,08	13,1±1,13	2,95±0,57	16,1±1,57	0,39±0,05
	IIа	3,97±1,36**	10,43±0,74*	2,79±0,54	20,5±0,99	1,01±0,13**
	IIIа	1,57±0,41**	7,91±0,97**	3,17±0,48	18,8±1,64	0,86±0,12**
3	Ia	0,81±0,29	12,0±1,41	2,09±0,21	14,5±0,71	1,29±0,36
	IIа	0,54±0,14	14,0±0,91	1,23±0,23*	17,8±1,16	1,03±0,18
	IIIа	5,57±0,43*	7,97±0,61*	0,78±0,21**	21,9±0,99**	1,48±0,31
5	Ia	0,31±0,01	11,9±0,52	1,23±0,14	16,8±1,34	0,46±0,06
	IIа	0,61±0,12**	14,6±1,24	1,46±0,42	19,3±1,19	0,36±0,01
	IIIа	2,46±0,52**	6,14±0,63**	1,08±0,29	23,9±1,48 *	1,12±0,21**
7	Ia	0,32±0,06	14,7±1,02	0,61±0,14	13,1±0,47	0,27±0,01
	IIа	0,43±0,06	16,4±0,85	0,64±0,16	14,2±0,63	0,33±0,01
	IIIа	3,31±0,71**	8,35±0,74**	0,37±0,05	19,1±1,09**	0,54±0,17
9	Ia	0,78±0,29	13,4±1,08	0,93±0,11	16,5±1,01	0,39±0,07
	IIа	0,33±0,01	12,1±0,54	1,74±0,41	19,5±0,97*	0,33±0,01
	IIIа	2,54±0,99	10,3±1,35	0,59±0,13	20,9±1,02**	0,67±0,21

**

– статистически достоверные различия между значениями в контрольной и группах опыта по U-критерию Манна-Уитни при p<0,01; * – статистически достоверные различия между значениями в контрольной и группах опыта по U-критерию Манна-Уитни при p<0,05

Предполагают, что базофилы, в результате парентерального проникновения чужеродных белков, могут играть определенную роль в фагоцитарной защите [9]. Вероятно, повышение количества базофилов связано с осуществлением этой функции в результате воздействия S. typhimuri-um. При этом наличие только кратковременного повышения в группе IIа и отсутствие каких-либо изменений в группе IIb является следствием воздействия энро-флоксацина. Маловероятным является развитие базофилии вследствие возникновения аллергии на фоне развития бактериального процесса, так как в подобных случаях отмечается эозинофилия [2]. В прове- денных опытах зафиксирована эозинопе-ния, которая наиболее отчетливо проявляется у петушков, зараженных S. enteritidis, практически во все дни исследования (Таблица 2).

Так, цыплята группы IIIb имели наиболее продолжительные достоверные изменения: абсолютное и относительное содержание эозинофилов было снижено сразу на следующий день после заражения и составило соответственно 53 % и 61 %, и продолжало уменьшаться в остальные дни исследования. Такой сдвиг непосредственно отражал формирование инфекционного процесса в организме, вызванного бактерией S. enteritidis.

Таблица 2 – Динамика соотношения различных видов лейкоцитов крови цыплят опыта «b» (Salmonella enteritidis), %

в и	cd в в	Моноциты	Лимфоциты	Эозинофилы	Псевдоэозинофилы	Базофилы
1	Ib	1,5±0,22	39,2±3,55	2,25±0,39	13,8±0,95	1,68±0,32
	IIb	6,7±1,73**	31,7±3,23	0,84±0,31*	18,8±1,93	0,98±0,44
	IIIb	2,5±0,62	28,2±2,57*	1,04±0,33*	22,3±0,95**	0,60±0,17*
3	Ib	1,9±0,31	40,8±1,19	1,75±0,38	49,5±1,84	0,76±0,13
	IIb	2,2±0,61	34,3±2,67	2,19±0,37	55,0±4,06	0,84±0,12
	IIIb	11,2±2,82**	20,5±3,48**	0,80±0,15*	64,0±5,75	0,93±0,34
5	Ib	2,0±0,52	50,2±3,24	3,3±0,33	43,3±3,59	0,35±0,05
	IIb	2,8±0,61	35,2±2,71**	3,2±0,83	57,3±2,69**	0,49±0,11
	IIIb	12,0±3,32**	16,5±1,78**	1,7±0,42*	68,1±3,58**	0,55±0,12
7	Ib	2,0±0,82	41,0±2,49	2,3±0,76	53,5±2,21	1,2±0,17
	IIb	2,1±0,41	42,0±3,09	2,2±0,48	52,5±2,75	1,2±0,17
	IIIb	6,3±1,49*	31,7±3,17	1,2±0,17	57,3±3,76	3,5±0,56*
9	Ib	1,6±0,49	32,7±1,86	6,5±0,34	58,0±1,75	1,2±0,17
	IIb	1,2±0,17	31,3±1,02	7,4±0,81	58,8±1,05	1,3±0,21
	IIIb	9,7±3,13**	21,7±2,63**	1,8±0,31**	64,5±1,91	2,3±0,42*

** – статистически достоверные различия между значениями в контрольной и группах опыта по U-критерию Манна-Уитни при p<0,01; * – статистически достоверные различия между значениями в контрольной и группах опыта по U-критерию Манна-Уитни при p<0,05

Снижение относительного и абсолютного количества эозинофилов в группе IIb происходит только на 1 сутки после заражения и отличается от контрольных данных на 60 %. В первом опыте, у цыплят группы IIa, эозинопения была кратковременной и зафиксирована только на 3 сутки. Уменьшение относительного и абсолютного содержания эозинофилов у петушков группы IIIb проявилось только на первые сутки после заражения и составило 70 % и 62 %, после чего достоверные отличия были выявлены только в последний день исследования. Зачастую, эозинофилия сопровождается лимфопенией и некоторым увеличением количества псевдоэозинофилов [13]. Достоверное выраженное снижение числа лимфоцитов проявилось в обоих опытах, при этом существенное отличие в относительном и абсолютном содержании зафиксировано у экспериментально зараженных цыплят, которым энрофлоксацин не выпаивался. Лимфопения может быть связана с развитием иммунодефицита, блокированием лимфопоэза в результате воздействия сальмо-неллезной инфекции.

Уменьшение количества лимфоци- тов у цыплят группы IIa достоверно проявилось только в первые сутки после заражения, что отразилось в снижении абсолютных и относительных значений на 20 % и 32 %, а в группе IIb на пятый день исследований достоверно снизилось содержание данных клеток относительно контрольных показателей на 29 %. Известно, что у птиц лимфопения имеет относительное значение, при этом обычно она связана с увеличением количества полиморфноядерных лейкоцитов [3].

Достоверные изменения абсолютного содержания псевдоэозинофилов в обоих опытах у цыплят, получавших эн-рофлоксацин, мало выражены. В группе IIа зафиксировано повышение количества на 15 % относительно контрольных данных в последний день исследования, а у цыплят группы IIb увеличение численности произошло только на пятые сутки. В группе IIIa зафиксировано повышение абсолютного количества псевдоэозинофилов на протяжении всего эксперимента. Вероятно, подобная псевдоэозинофилия обусловлена фагоцитарной активностью клеток, они первыми вступают во взаимодействие с микробами, осуществляя, тем самым, за- пуск каскада ответных иммунных реакций.

У петушков группы IIIb псевдоэозинофилия была менее продолжительной. Так, увеличение абсолютного содержания этих клеток произошло только на первые, третьи и пятые сутки исследования и составило 38 %, 39 % и 31 % соответственно, по сравнению с контрольными данными. Такой эффект можно связывать с усиленным подавлением фагоцитоза бактериями S. enteritidis, которые ингибировали первичную реакцию иммунной защиты, осуществляемой псевдоэозинофилами, что привело к активации макрофагов. Это подтверждается достоверным длительным моноцитозом, который зарегистрирован, начиная с третьих суток и на протяжении остального времени исследования.

В группе IIIa отмечено повышение количества моноцитов в крови цыплят относительно контрольных значений на первые, третьи, пятые и седьмые сутки после заражения, но затем показатель приходит в норму. Подобный моноцитоз может являться «моноцитарной защитной фазой», т.е. периодом преодоления инфекционного заболевания [9].

В группах II обоих опытов повышение числа моноцитов было кратковременным, а показатели не выходили за пределы нормы. Вероятно, этот единовременный сдвиг взаимосвязан с непродолжительной псевдоэозинофилией, так как известно, что увеличение количества моноцитов может быть обусловлено ростом численности полиморфноядерных лейкоцитов [7].

Заключение. Проведенные исследования показали, что энрофлоксацин эффективен в отношении изученных серотипов сальмонелл, не оказывает при этом существенного влияния на лейкоцитарную формулу крови птиц. В обоих опытах в группах цыплят, получавших фторхино-лон, подавление бактериальной инфекции было более выраженным. Вероятно, энро-флоксацин кроме непосредственного воздействия на бактерии, взаимодействует с системой клеточного неспецифического иммунитета и способствует усилению ее влияния. Такое положение в обоих опытах подтверждают данные, полученные от экспериментально зараженных петушков групп III, у которых достоверные изменения лейкоформулы были более длительными и значимыми. Анализируя продолжительность фиксируемых сдвигов в лей-кограмме у таких цыплят, можно предположить, что S. enteritidis оказывает более сильное влияние на иммунную систему птиц, подавляя действие псевдоэозинофилов. S. typhimurium, воздействуя на организм, в меньшей степени подавляет иммунные реакции, однако не теряет своей активности на протяжении длительного времени, также вызывая токсический эффект.

Резюме

Целью представленной работы является исследование влияния энрофлоксацина на показатели системы белой крови у цыплят в условиях экспериментального сальмонеллеза. В ходе двух опытов («a» и «b») осуществляли экспериментальное заражение цыплят культурами Salmonella typhimurium и Salmonella enteritidis. Цыплята одной из инфицированных групп в каждом опыте за сутки до и в течение четырех суток после заражения получали вместе с водой энрофлоксацин в дозе 200 мг/л. На основании анализа лейкоформулы установлено, что S. enteritidis оказывает более существенное влияние на иммунную систему птиц, подавляя действие полиморфноядерных лейкоцитов. S. typhimurium в меньшей степени подавляет иммунные реакции, при этом не теряет своей активности, вызывая токсический эффект на протяжении длительного времени.