Неспецифическая резистентность новорожденных телят после применения натрия нуклеината глубокостельным коровам

Для устойчивого развития интенсивного скотоводства важным условием является организация выращивания здорового молодняка. Пристального внимания к себе требуют новорожденные телята. Сразу после рождения их организм начинает адаптироваться к условиям внешней среды. По сравнению со взрослыми животными их защитно-приспособительные функции реализованы недостаточно. Неспецифическая резистентность новорожденных телят находится на низком уровне. Иммуноглобулины в сыворотке крови присутствуют в крайне малых количествах, так как во внутриутробном периоде развития они не поступают плоду через плаценту из материнского организма. Главным источником иммуноглобулинов для новорожденных телят является молозиво. Оно также содержит защитные и регуляторные факторы, такие как лейкоциты, лизоцим, лактоферрин, цитокины.

Гугушвили Н.Н. (2003) установлено, что у коров черно-пестрой породы уровень фагоцитарной активности нейтрофилов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови увеличивались к девятому месяцу стельности и понижались сразу после отела. Уровень общего белка понижался с увеличением срока беременности. На ранних сроках стельности выявлена тенденция понижения содержания гамма-глобулинов и резкое снижение их перед отелом, а также в течение нескольких суток после него. Количество иммуноглобулинов классов А,

М, G, которые составляют значительную часть этой фракции белка с седьмого по девятый месяц понижалось [8].

Установлено, что количество иммуноглобулинов в крови активно снижается за несколько суток до отела и в день отела их содержание минимально. Этот процесс объясняется переходом защитных белков в молозиво [4, 7]. В первые минуты после отела уровень иммуноглобулинов в сыворотке молозива максимальный [7].

У коров за 3-9 суток перед отелом бактерицидная и лизоцимная активности сыворотки крови, фагоцитарная активность нейтрофилов могут быть понижены [5].

Качество молозива в некоторых случаях может быть низким, например, вследствие неполноценного кормления коров, уменьшения длительности сухостойного периода, преждевременного доения до родов или потери молозива перед ними. Возраст также влияет на уровень антител - чем более зрелая корова, тем выше уровень антител в молозиве. Низкое качество молозива является причиной иммунодефицита у новорожденных телят, что приводит к возникновению массовых болезней желудочно-кишечного тракта. Повысить уровень иммуноглобулинов в молозиве и степень их усвоения в организме новорожденных телят можно путем введения биологически активных веществ коровам за несколько дней до родов.

Натрия нуклеинат (НН) усиливает неспецифическую устойчивость, лейкопоэз, миграцию и кооперацию Т- и

В-лимфоцитов, фагоцитарную активность макрофагов и нейтрофилов, ускоряет процессы регенерации, повышает содержание лизоцима, пропердина, уровень антител, индуцирует синтез интерферона. НН имеет антитоксическое действие [1, 2, 3].

Целью исследования стало изучение влияния НН на физиологическое состояние и становление неспецифической резистентности новорожденных телят после его парентерального введения глубокостельным коровам.

Материал и методы исследований . Исследования выполнены в осенне-зимний период 2021 года на базе молочно-товарной фермы СПК «Нижегородец» Нижегородской области. Объектами исследования выступили 10 глубокостельных коров черно-пестрой породы. Подбор животных проводили по принципу парных аналогов. Были составлены 2 группы - контрольная и опытная по 5 животных в каждой. От коров контрольной и опытной групп было получено кратное количество новорожденных телят, которых распределили в группы, соответствующие их матерям. Коровам опытной группы за 3– 9 суток перед отёлом инъецировали НН в дозе 5 мл внутримышечно, однократно. Коровам контрольной группы - 0,9% раствор хлорида натрия.

Теленку выпаивали материнское молозиво после появления рефлекса сосания. В первые сутки жизни телята содержались в клетках в родильном отделении, затем их переводили в пластмассовые боксы-домики, т.е. на ферме используется «холодный метод выращивания».

Проводилось клиническое наблюдение за подопытными животными. Массу новорожденных телят определяли в день рождения, в конце первого, второго, третьего и четвертого месяцев жизни. У новорожденных телят производили отбор проб крови из яремной вены через сутки после рождения и на 10-е сутки жизни для изучения биохимических и иммунологических показателей.

Для проведения исследований использовали клинические методы, включающие определение температуры тела, частоты пульса и дыхательных движений; осмотра волосяного покрова, слизистых оболочек глаз, рта и носа; изучение активности, темперамента, конституции.

С помощью биохимических методов изучали уровень общего белка сыворотки крови (ОБС) на анализаторе ICUBIO iMagic-V7 (Китай). Принцип работы анализатора основан на методе спектрофотометрии. При этом автоматически определяется зависимость интенсивности поглощения падающего света от длины волны.

Определение альбуминов, альфа-, бета-, гамма-глобулинов проводили на приборе Minicap, Sebia (Франция). Принцип работы аппарата основан на методе капиллярного электрофореза, при этом в тонком капилляре анализатора происходит разделение молекул исследуемого раствора по заряду и величине.

В работе использовались иммунологические методы. Изучали бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) телят в модификации О.В. Смирновой и Г.А. Кузьминой. Она базируется на том, что сыворотка крови воздействует бактерицидно и бактериостатически на микроорганизмы. Для проведения анализа использовали тест-культуру Escherichia coli штамм О111. Учитывался характер изменения оптической плотности среды с микроорганизмами при добавлении к ней исследуемой сыворотки крови.

Определение лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК) проводили нефелометрическим методом, учитывая изменение оптической плотности суспензии M. Lysodeikticus после добавления в нее изучаемой сыворотки крови.

Определение уровня фагоцитоза осуществляли путем изучения активности нейтрофилов периферической крови подопытного животного поглощать микробные клетки. Реакция ставится in vitro с использованием Staphylococcus albus. При этом рассчитывали фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) и фагоцитарный индекс (ФИ).

Изучение иммуноглобулинов (классов A, M, G) осуществляли по методу радиальной иммунодиффузии в геле из агара (В.В. Меньшиков, 1987)

Цифровые данные, полученные в ходе эксперимента, обрабатывались статистическим методом (Н.А. Плохинский, 1967) на персональном компьютере с установленным пакетом программ Microsoft Excel 2007. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента. Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения P≤0,05.

Анализы выполнялись на кафедре «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни» ФГБОУ ВО

Нижегородская ГСХА, лаборатории «Гемохелп» г. Нижнего Новгорода. Получено решение о выдаче патента РФ на изобретение от 26.11.2021 г. по заявке № 2021109976.

Результат исследований.

Биохимические показатели крови телят контрольной и опытной групп представлены в таблице 1. На вторые сутки жизни у новорожденных телят усваивается основная часть веществ, полученных с материнским молозивом. В этот период нами отмечено увеличение в крови опытных телят уровня общего белка на 18 % в основном за счет альбуминов и γ-глобулинов, уровень которых был выше соответственно на 16,5 % и 53,5 %. Известно, что у новорожденного альбумины и глобулины молозива могут проникать неизмененными через стенку кишечника в кровь.

Таблица 1 – Биохимические показатели крови новорожденных телят (M±m, n=5)

Показатель	2 сутки		10 сутки
	контроль	опыт	контроль	опыт
Общий белок, г/л	62,36±0,58	73,6±2,58*	60,82±0,96	67,6±1,67*
Альбумины, г/л	21,38±0,42	24,92±1,07*	22,62±0,50	23,78±0,71
α-глобулины, г/л	18,78±0,93	17,4±1,02	17,24±1,31	15,14±0,60
β-глобулины, г/л	5,8±0,37	6,1±0,49	7,6±0,86	9,34±0,60
γ-глобулины, г/л	16,4±0,97	25,18±2,43*	13,36±0,57	19,34±1,53*

Примечание: здесь и далее в таблицах * – Р<0,05 по парному критерию при сравнении с контролем

Уровень α-глобулинов оказался ниже на 7,3 %, а β-глобулинов выше на 5,2 % у животных опытной группы по сравнению с контролем (P>0,05).

На 10-е сутки жизни уровень общего белка у телят подопытных групп снизился за счет фракций α- и γ-глобулинов, при этом уровень общего белка был достоверно выше у телят опытной группы на 11,1 %. Содержание альбуминов и γ-глобулинов в опытной группе оставалось выше на 5,13 % и 44,7 % по сравнению с контролем.

В крови подопытных животных α-глобулиновая фракция белка снижалась к 10 суткам и у опытных животных была на 12,2 % меньше в сравнении с контрольными животными. Уровень β-глобулинов у животных исследуемых групп увеличился и у опытных телят оказался на 22,9 % выше, чем в контроле.

Увеличение количества γ-глобулинов в сыворотке крови телят опытной группы связано с большим поступлением иммуноглобулинов с молозивом. Содержание иммуноглобулинов молозива 1-го удоя коров опытной группы было достоверно выше на 19 %, что говорит о повышении образования этих белков в организме, вследствие усиления иммунореактивности коров под действием Натрия нуклеината. Применение стельным коровам Натрия нуклеината способствовало повышению уровня колострального иммунитета у полученных от них телят.

Иммуноглобулин A представляет собой димер, составляет около 5 % колостральных Ig и защищает поверхность слизистых оболочек, включая слизистую кишечника, от проникновения патогенных микроорганизмов и их колонизации на поверхности эпителия. Содержание этого иммуноглобулина у опытных телят было выше на 2-е и 10-е сутки соответственно на 64,4 и 61,7 %.

Иммуноглобулин M является пентамером, составляет около 7 % колостральных иммуноглобулинов, обладает защитными свойствами и служит первичным защитным механизмом против септицемии, способен фиксировать комплемент. Содержание этого иммуноглобулина у опытных телят было выше на 2-е и 10-е сутки соответственно на 75,3 и 47,6 %.

У новорожденных контрольной и опытной групп на 2-е и 10-е сутки жизни уровень иммуноглобулин G в крови составил 18,84±1,32 и 16,17±1,13 г/л, что на 46,6 и 43,6 % достоверно выше, по сравнению с животными контрольной группы.

Отмечено увеличение БАСК у животных исследуемых групп, при этом она была выше у телят опытной группы на 16,4 и 15,2 % на 2-е и 10-е сутки жизни соответственно, по сравнению с контрольной группой. С возрастом БАСК животных подопытных групп увеличивался на 12,6 и 11,4 % соответственно. Данный показатель отражает совместное действие клеточного и гуморального факторов защиты.

Таблица 2 - Иммунологические показатели крови новорожденных телят (M±m, n=5)

Показатель	2 сутки		10 сутки
	контроль	опыт	контроль	опыт
Иг A, г/л	1,29±0,13	2,16±0,2 *	0,68±0,06	1,10±0,11 *
Иг М, г/л	1,7±0,13	2,98±0,3 *	1,07±0,04	1,58±0,12 *
Иг G, г/л	12,85±0,71	18,84±1,32 *	11,26±0,4	16,17±1,13 *
БАСК, %	29,6±0,8	34,48±0,84 *	33,32±1,08	38,4±1,01 *
ЛАСК, %	15,2±0,59	18,22±0,31 *	15,8±0,68	18,56±0,50 *
ФАН, %	32,4±0,91	37,5±0,36 *	37,4±1,06	42,44±0,93 *
ФИ, %	1,36±0,09	1,85±0,04 *	1,62±0,07	1,9±0,04 *

Одним из важных показателей неспецифической резистентности является активность фермента лизоцима, способного лизировать живые и мёртвые клетки. Отмечается выраженное нарастание ЛАСК у телят опытной группы на 2-е и 10-е сутки жизни на 19,8 % и 17,4% по сравнению с контролем. Возможно, это связано с активацией макрофагов, поскольку данный фермент секретируется этими клетками, а также выделяется при дегрануляции полиморфноядерными нейтрофилами. В динамике ЛАСК телят, участвующих в эксперименте, значимых изменений не прослеживается.

ФАН на 2-е и 10-е сутки жизни была выше у телят опытной группы соответственно на 15,7 и 13,4% по сравнению с контрольной группой. Повышение этого показателя у телят опытной группы связано с активацией внутриклеточных систем фагоцитов и повышением опсонических способностей иммуноглобулинов. Со временем происходит увеличение ФАН на 15,4 и 13,2% в контрольной и опытной группе соответственно. Наблюдалось также увеличение фагоцитарного индекса у телят опытной группы на 2-е и 10-е сутки жизни на 36 и 17,2 % соответственно, по сравнению с контролем. С возрастом происходит увеличение фагоцитарного индекса у животных исследуемых групп.

Начиная с рождения и в конце каждого месяца, проводилось взвешивание телят 4 месяца подряд. Масса тела телят контрольной и опытной групп сразу после рождения не имела существенной разницы и в среднем составила 31,8±0,37 и 32,2± 0,48 кг соответственно (P>0,05). Среднесуточный прирост массы тела за 4 месяца выращивания был выше в опытной группе на 11,6-23 %. В конце 4 месяца жизни масса тела телят контрольной группы составила 97,8±1,75 кг, а телят опытной группы 105,4±1,88 кг, что больше на 7,7 % (Р<0,05).

Заключение . Парентеральное однократное введение 0,2% водного раствора Натрия нуклеината коровам в предродовой период способствовало получению иммунологически качественного молозива. Установлено повышение иммуноглобулинов молозива первого удоя на 19%. У телят на вторые сутки жизни повысился уровень общего белка крови за счет альбуминовой и γ-глобулиновой фракций. Происходила стимуляция колострального иммунитета. Содержание иммуноглобулинов А, М, G крови повысилось соответственно на 64,4; 75,3 и 46,6 %, что может быть связано как с большим содержанием в молозиве, так и усвоением их в кишечнике. Иммуноглобулины могут выполнять функцию опсонизации, поэтому, видимо, их более высокое содержание обусловило повышение ФАН и ФИ соответственно на 15,4 и 36 %. Уровни БАСК и ЛАСК также были выше у опытных телят. На 10-е сутки жизни телят положительный эффект сохранился.

Резюме

Целью исследования стало изучение применения иммуномодулятора Натрия нуклеината на развитие естественной резистентности новорожденных телят после его инъецирования коровам-матерям в предродовой период. Работа проведена на базе СПК «Нижегородец» Нижегородской области. В ходе опыта проводили оценку показателей неспецифической резистентности крови новорожденных телят на 2-е и 10-е сутки после рождения. На 2-е сутки жизни у телят установлено повышение γ-глобулиновой фракции белка на 53,5 %, что может быть обусловлено, как более высоким содержанием иммуноглобулинов в молозиве, так и повышением усвоения их в кишечнике новорожденных. Иммуноглобулины могут выполнять функцию опсонизации, поэтому, видимо, их более высокое содержание обусловило повышение ФАН и ФИ соответственно на 15,4 и 36 %. Уровень БАСК и ЛАСК также были выше у опытных телят. На 10-е сутки положительный эффект сохранился.