Оригинальный двухкомпонентный аутофибриновый клей для фиксации амниотической мембраны к строме роговицы в эксперименте

Наиболее часто фиксация тканей и трансплантатов на глазной поверхности осуществляется с помощью швов. Несмотря на развитие хирургических техник и технологий изготовления шовного материала, этот метод связан с повышенным послеоперационным дискомфортом, а также с увеличенной длительностью хирургического вмешательства и требует определенного уровня мастерства у исполнителя [1]. Именно поэтому ведется непрерывный поиск альтернативных бесшовных методов фиксации тканей [2; 3]. Развитие этого направления не менее важно, чем поиск новых способ лечения заболеваний. Перспективным вариантом бесшовной фиксации тканей и трансплантатов в офтальмологии является применение синтетических и биологических клеевых композиций [4; 5]. Например, использование фибринового клея в

Малафеева А.Ю., Гаврилюк И.О., Самусенко И.А. и др. ОРИГИНАЛЬНЫЙ ДВУХКОМПОНЕНТНЫЙ АУТОФИБРИНОВЫЙ КЛЕЙ ДЛЯ ФИКСАЦИИ АМНИОТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЫ К СТРОМЕ РОГОВИЦЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ зарубежной офтальмохирургии широко описано в литературе, но его применение отечественными хирургами ограничено высокой стоимостью и малодоступностью готового продукта [6; 7].

В России зарегистрирован медицинский цианакрилатный клей «Сульфакрилат», который применяется некоторыми офтальмохирургами для экстренной герметизации ранений склеры и роговицы, а также при операциях на экстраокулярных мышцах. В 2019 г. специалистами кафедры офтальмологии ВМедА им. С.М. Кирова был разработан способ приготовления двухкомпонентного аутологичного фибринового клея (ДАФК) (патент на изобретения RU № 2704256) [8]. Проведение экспериментальноклинических исследований позволит быстро внедрить разработанную клеевую композицию в хирургическую практику врачей-офтальмологов.

Цель исследования . Экспериментально обосновать возможность применения оригинального ДАФК для фиксации амниотической мембраны (АМ) к строме роговицы.

Материалы и методы исследования

Исследование проводилось на 15 кроликах породы Шиншилла (30 глаз). На реализацию эксперимента получено разрешение Комитета по вопросам этики при Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (протокол №215 от 05 ноября 2018 года). Все хирургические манипуляции выполнялись под местной инстилляцион-ной (проксиметакаин 0,5%) и ретробульбарной анестезией (лидокаин 2,0%). Кроликов фиксировали методом тугого пеленания тканью. Глазное яблоко выводили и фиксировали с помощью перчаточной резинки. Ножом-кератомом 2,2 мм выполняли расслоение роговицы и отсечение поверхностных слоев стромы микрохирургическими ножницами по кругу, не затрагивая область лимба. Затем заранее подготовленная и фиксированная на специальном держателе (патент на изобретение RU № 2680471) нативная АМ накладывалась на строму роговицы и фиксировалась 3 способами [9]. В зависимости от способа фиксации АМ животные были разделены на 3 экспериментальные группы. Группа А (10 глаз) — 1-я контрольная — фиксация узловыми швами, Б (10 глаз) — 2-я контрольная — фиксация синтетическим клеем «Сульфакрилат», В (10 глаз) — основная — фиксация разработанным ДАФК. Клеевые композиций в обеих группах наносились капельно, как на строму роговицы, так и поверх АМ.

Для фиксации и анализа полученных результатов на контрольные сроки после проведения операции (1-е, 3-и, 5-е, 7-е, 10-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки) всем животным выполняли биомикроскопическое исследование глазной поверхности, фоторегистрацию, а также оптическая когерентная томографию роговиц. Проводилась оценка состоятельности швов, степени прилегания АМ к глазной поверхности. Для количественной оценки площади деэпителизации роговицы, хода ее регенерации исполь- зовали методику, предложенную М.В. Сухининым [10]. Проекционную циркулярную сетку, в которой площадь каждой ячейки составляла 0,3%. Сетку помещали на цифровой фотоснимок фронтальной проекции роговицы и по сумме площади ячеек, прокрашиваемых флуоресцеином, судили о площади деэпителизации роговицы. Интенсивность помутнения роговицы оценивали по 10-балльной шкале: 1–2 балла — прозрачная, 3 — почти прозрачная, 4–5 — полупрозрачная, 6–10 — мутная [11]. Степень неоваскуляризации роговицы оценивали по 4-балльной шкале в зависимости от длины новообразованных сосудов: 0 баллов — отсутствие сосудов, 1 — до 2 мм, 2 — до 4 мм, 3 — до 6 мм [12]. На 30-е сутки выполнялось гистологическое исследование роговиц. Роговицу глаза фиксировали в 10% растворе забуференного формалина в течение 24 часов, после чего материал проходил стандартную обработку в изопропиловом спирте и парафине для изготовления гистологических препаратов с толщиной серийных парафиновых срезов 3-5 мкм. Для микроскопического исследования срезы окрашивались гематоксилином и эозином.

Полученные результаты. Более раннее начало эпите-лизации роговицы отмечено в группе В уже на 1-е сутки (в группе А на 7-е сутки, в группе Б на 21-е сутки). Полная эпителизация роговицы наступила раньше также в группе В — на 10-е сутки (против 30-х суток в группе А и Б). По данным биомикроскопии роговиц на 30-е сутки прозрачность роговицы в группе В была значительно выше (1 балл), чем в группе А (3 балла) и Б (8 баллов). Наличие неоваскуляризации было выявлено в группах А и Б (3 балла). В группе Б на 21-е сутки клеевая пленка оставалась только в нижне-внутренних квадрантах, в центральных отделах визуализировался дефект роговицы до десцеметовой мембраны диаметром 4 мм, к краям которого подходили новообразованные сосуды, к 30-м суткам биомикроскопическая картина была без изменений, дефект роговицы сохранялся (Рис. 1).

По данным сравнительной оптической когерентной томографии на 30-е сутки в группе А эпителий в центральных отделах неадгезирован, визуализируются субэпителиальные кисты, АМ присутствует только в параоптической области и постепенно истончается до полного исчезновения в оптической зоне. В группе Б АМ не визуализируется, в связи с постепенным отторга-нием АМ вместе с клеевой композицией. В группе В АМ визуализируется на всем протяжении, эпителий полностью адгезирован.

При проведении морфологического исследования роговиц на 30-е сутки было установлено, что заживление сопровождалось типовыми репаративными процессами: эпителизацией многослойным плоским эпителием. Полная репарация эпителия роговиц с восстановлением его анатомического расположения наблюдалась только в группе В. В группах А и Б наблюдалась регенерация и инклюзии эпителия в толщу собственного вещества роговицы (Рис. 2 и 3). Воспалительная инфильтрация в

Малафеева А.Ю., Гаврилюк И.О., Самусенко И.А. и др.

ОРИГИНАЛЬНЫЙ ДВУХКОМПОНЕНТНЫЙ АУТОФИБРИНОВЫЙ КЛЕЙ ДЛЯ ФИКСАЦИИ АМНИОТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЫ К СТРОМЕ РОГОВИЦЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Группа

A

В

Рис. 1. Биомикроскопическое исследование роговиц, в том числе при окрашивании флуоресцеином натрия на 30-е сутки после проведения операции.

Рис. 3. Роговица глаза кролика с фиксацией АМ синтетическим клеем «Сульфакрилат», 30-е сутки. Отсутствие эпителизации раны, АМ разрушена, выраженная воспалительная инфильтрация, васкуляризация. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 200.

Рис. 4. Роговица глаза кролика с фиксацией АМ разработанным ДАФК, 30-е сутки. Полная эпителизация раны поверх АМ. Воспалительная инфильтрация и васкуляризация отсутствуют. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 200.

Оптическая когерентная томография

Гистологическое исследование

Рис. 2. Роговица глаза кролика с фиксацией амниотической мембраны хирургическими швами, 30-е сутки. Полная эпителизация раны с остатками АМ, субэпителиальными кистами, воспалительной инфильтрацией, васкуляризацией. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 200.

ткани роговицы отсутствовала только в группе В, в группе А она была незначительной. Васкуляризация роговицы отсутствовала только в группе В (Рис. 4).

Выводы

• 1.    Фиксация АМ, разработанным ДАФК, обеспечивает более раннее начало эпителизации роговицы (в группе В на 1-е сутки, против 7-х и 21-х суток в группах А и Б, соответственно).

• 2.    Фиксация АМ, разработанным ДАФК, обеспечивает сохранение АМ в течение всего срока наблюдения (в группе А с 10-х суток отмечен лизис АМ в центральных отделах, в группе Б на 30-е сутки АМ не визуализировалась).

• 3.    ДАФК, приготовленный по разработанному нами способу, может быть использован в офтальмохирургии для фиксации АМ к строме роговицы.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов (The authors declare no conflict of interest).

The effect of amniotic membrane extract on epithelialization and neovascularization in models of corneal damage. PMJ. 2018; 2: 46–49. (In Russ).] doi: 10.17238/PmJ1609-1175.2018.2.46–49.