Показатели клеточного иммунитета у морских свинок при вакцинации и экспериментальной бруцелезной инфекции

В защите организма от чужеродных антигенов участвуют неспецифические и специфические факторы [1,2]. Неспецифическая резистентность связана со специфической иммунной реактивностью и является основой выработки полноценного иммунного ответа, возникшего в процессе эволюции [3,4,5]. Однако отдельные патогенные микроорганизмы не поглащаются фагоцитами или, если поглащаются, не перевариваются внутри фагоцитирующих клеток и переходят в персистирующую форму. К числу таких микроорганизмов относится и возбудитель бруцеллеза. Поэтому изучение клеточных показателей иммуногенеза и инфекционного процесса при бруцеллезе может дать ценную информацию по механизмам защиты организма. Для оценки клеточных механизмов весьма информативной является реакция восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) полиморфно-ядерными лейкоцитами (ПМЯЛ) [6]. Она, отражая итоговую реакцию ферментных систем, ответственных за цитотоксический потенциал ПМЯЛ, позволяет оценивать их бактерицидную активность. В связи с этим НСТ-тест может быть использован для оценки иммунологической перестройки организма.

Целью исследований являлось изучение активности ПМЯЛ при вакцинации и инфицировании морских свинок бруцеллами.

Материалы и методы. Четырех групп морских свинок по 15 голов иммунизировали вакцинами из штаммов B.abortus УФ-1 (1 группа), 19 (2 группа), 82

(3 группа) и УФ-1 в сочетании с иммуномодулятором (4 группа). Через 7, 15, 30 и 60 дней после вакцинации у отдельных животных брали пробы крови для исследований. В пробах крови определяли функциональную активность лейкоцитов в НСТ-тесте. Активность лейкоцитов в НСТ-тесте оценивали в спонтанном и стимулизированном тестах. Для стимуляции лейкоцитов в качестве тест-культуры использовали суспензию вирулентного штамма B.abortus 54. НСТ-тест ставили по методике представленной в монографии А.С. Козлюк с соавторами [6] в нашей модификации [7].

Для определения устойчивости к бруцеллезу морских свинок заражали культурой вирулентного штамма B.abortus 54 в дозе 80 микробных клеток через 2 месяца после вакцинации. Убой морских свинок производили через 30 дней и подвергали бактериологическим исследованиям.

Результаты исследований.

Показатели функциональной активности лейкоцитов крови морских свинок представлены в таблице № 1. Ткак свидетельствуют полученные данные, после иммунизации происходила значительная активация лейкоцитов. У животных, вакцинированных штаммом УФ1, на 7-й день иммунизации наблюдалось повышение этого показателя. В стимулированном тесте (АВ) количество активных клеток составляло 30±1,1, что в 2,5 раза выше по отношению показателей контрольной (непривитые) группы (12±0,12). Показатель резерва (ПР) и коэффициент метаболической активации (КМА) равнялись 1,7±0,4 и 0,7

соответственно. Аналогичная тенденция и в других опытных группах животных. Однако этот процесс был несколько слабее, чем у животных привитых вакциной из штамма 19 (2 группа). Показатели резерва и коэффициент метаболической активации у животных 1 и 2 групп, на этот срок, повышались незначительно, тогда как у 3 и 4 групп они существенно возросли. В дальнейшем, на 15 и 30 дни исследований, функциональная активность нейтрофилов крови первых трех групп возрастала, о чем свидетельствует увеличение количества активированных клеток в спонтанном, особенно, в стимулированном тестах, а также ПР и КМА. Через 60 дней после вакцинации функциональная активность нейтрофилов крови у всех испытуемых морских свинок несколько снижалась, но оставалась на значительно более высоком уровне по сравнению с интактными животными. При сходстве тенденции активизации функции нейтрофилов у всех трех групп животных, реакция была интенсивнее у морских свинок, вакцинированных суспензией штамма бруцелл УФ-1. .

Таблица 1. Функциональная активность лейкоцитов крови морских свинок, иммунизированных противобруцеллезными вакцинами

Сроки исследо вания

УФ-1 (1 гр.)

19 (2 гр.)

82 (3 гр.)

УФ-1 (4 гр.)

СВ

АВ

ПР/ КМА

СВ

АВ

ПР/ КМА

СВ

АВ

ПР/ КМА

СВ

АВ

ПР/ КМА

Контроль

8± 0,2

12± 0,1

1,5/0,5

9± 0,6

13± 0,6

1,4/0,4

8± 0,2

12± 0,2

1,5/0,5

9± 0,2

13± 0,3

1,4/ 0,4

7 день

18± 0,3

30± 1,1

1,7/0,7

15± 0,1

22± 0,6

1,5/0,5

12± 0,3

25± 0,7

1,9/0,9

12± 0,6

24± 1,2

2,0/ 1,0

15 день

24± 0,3

59± 1,2

2,4/1,4

18± 0,3

48± 1,7

2,7/1,7

17± 0,4

33± 1,1

2,0/1,2

12± 0,6

57± 1,2

4,8/ 3,8

30 день

28± 0,3

72± 1,7

2,6/1,6

21± 0,2

55± 1,2

2,6/1,6

21± 0,2

47± 0,7

2,2/1,2

9± 0,8

67± 0,6

7,4/ 6,4

60 день

19± 0,4

48± 1,0

2,6/1,5

19± 0,3

39± 1,0

2,1/1,1

9± 0,1

23± 0,6

1,7/1,6

11± 0,8

53± 0,8

4,8/ 3,8

СВ – формазан-положительные клетки в спонтанном тесте (%)

АВ - формазан-положительные клетки в стимулированном тесте (%)

ПР – показатель резерва = АВ:СВ

КМА – коэффициент метаболической активации = (АВ – СВ)/СВ

Несколько иная картина наблюдалась в IV группе животных (иммунизированных шт, УФ-1 в сочетании с иммуномодулятором). В частности, у этой группы морских свинок в течение вакцинного процесса показатели спонтанного теста (СВ) не претерпевали существенных изменений, т.е. были почти на исходном уровне, тогда как у других групп наблюдалось повышение активности лейкоцитов в СВ. На 7 день опыта количество формазан-положительных нейтрофилов, в стимулированном тесте у этой группы животных, повышалось в 2 раза, что на 25% ниже по сравнению с первой группой (шт УФ-1 в физиологическом растворе хлористого натрия). В последующие сроки исследований количество активированных клеток в стимулированном тесте у морских свинок I и IV групп почти выравнивались, но ПР и КМА у животных IV группы были значительно выше по сравнению с остальными опытными группами, что указывает на более выраженную активизацию метаболической и переваривающей функции нейтрофилов. У всех опытных групп морских свинок функциональная активность лейкоцитов крови повышалась, достигая максимума на 30-й день после вакцинации. К 60-му дню происходило некоторое снижение изучаемых показателей во всех опытных группах. Тем не менее, количество формазан-положительных лейкоцитов крови у животных опытных групп было в 2,5-4 раза выше по сравнению с контрольной группой. К этому сроку исследований КМА лейкоцитов крови у вакцинированных животных 1-3 групп повышали контрольный уровень в 2,8-3,2 раза, а у 4 группы - почти в 10 раз. Сходная тенденция сохранялась и по показателю резерва. Результаты бактериологических исследований приведенны в таблице № 2.

Полученные данные показывают, что у морских свинок, иммунизированных суспензиями бруцелл штаммов УФ-1, 19, 82 в физиологическом растворе и УФ-1, разведенной в разбавителе с иммуномодулятором, количество активированных лейкоцитов в стимулированном НСТ-тесте перед заражением варьировало в переделах 19-

53%, а контрольных - 10-13%.

Вакцинированные морские свинки с показателями активированных лейкоцитов в реакции НСТ-33% и более оказались устойчивыми к контрольному заражению вирулентной культурой бруцелл 54. Вакцинированные шт. 82 две морские свинки, имевшие активированные нейтрофилы значительно ниже (17-19%), заразились. Однако их инфицирование имело региональный характер (и.и. - 7,0), в отличие от интактных (непривитые), у которых наблюдался генерализированный бруцеллезный процесс (И.И. - 94%).

После заражения невакцинированных морских свинок вирулентным штаммом происходило угнетение активности нейтрофилов, о чем свидетельствует снижение количества активированных клеток в 2-4 раза по сравнению с исходным уровнем.

Таблица 2 - Результаты заражения морских свинок и показатели НСТ-теста

Группа животных	Количество животных		Иммунных (%)	И.И.	Показатели НСТ-теста в стимулир. варианте
	В опыте	Из них заразились
1.Заражен. вакцин.шт. УФ-1 в дозе 4 млрд.м.к.	7	0	100,0	0	48,0±0,2
2.заражен. шт. 19 (2 млрд.м.к.)	7	0	100,0	0	39,0±0,4
3.заражен. вакцин.шт.82 (2 млрд.м.к.)	7	2	71,4	7,0	33,0±0,6 (у заразившихся) 19,0±0,3 17,0±1,8
4.заражен. вакцин.шт. УФ-1 (2 млрд.м.к.) + иммуномодулятор	7	0	100,0	0	45,3±0,8
5. контроль -непривитые	5	5	0	94,0	До заражения: 12,0±0,3; Через 30 дней после зараж.: 4,2±0,2

Заключение. 1. Иммунологическая перестройка организма морских свинок после вакцинации противобруцеллезными вакцинами сопровождается усилением функциональной активности лейкоцитов, которая четко выявляется в НСТ-тесте.

• 2.    Уровень активизации лейкоцитов коррелирует с устойчивостью морских свинок к бруцеллезу.

• 3.    При бруцеллезной инфекции в

отличие от вакцинного процесса, наблюдается значительное угнетение функциональной активности лейкоцитов.

Резюме

Проведены исследования по определению функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов. Использовали тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест). Иммунологическая перестройка организма морских свинок после вакцинации противобруцеллезными вакцинами сопровождается усилением функциональной активности лейкоцитов, которая четко выявляется в НСТ-тесте. Уровень активизации лейкоцитов коррелирует с устойчивостью морских свинок к бруцеллезу. При бруцеллезной инфекции в отличие от вакцинного процесса, наблюдается значительное угнетение функциональной активности лейкоцитов.