Профилактика мастита у коров иммуномодулятором органического происхождения

В условиях интенсивной технологии производства молока одним из основных факторов, снижающих эффективность молочного скотоводства, является широкое распространение заболеваний молочной железы [1, 6]. Мастит проявляется у коров в разные периоды физиологического состояния, сезоны года и сопровождается снижением уровня молочной продуктивности, воспроизводительной функции коров, что приводит к их преждевременной выбраковке [8, 11].

Этиология патологий молочной железы у коров в период лактации, в основном, проявляется на фоне общего иммунодефицитного состояния под воздействием отрицательных факторов внешней и внутренней среды, что способствует нарушению морфофункционального состояния молочной железы, проникновению и развитию микроорганизмов [2, 5, 7].

В настоящее время для профилактики маститов у коров особое внимание уделяется условиям их содержания, кормления в сухостойный период, но при этом биохимические, иммунобиологические показатели сыворотки крови у 40-60 % высокопродуктивных коров не соответствуют перед отёлом референсным значениям [3, 4, 9].

В ветеринарно-акушерской практике для профилактики маститов у коров широко используются биологически активные вещества, тканевые препараты, иммуностимуляторы [5, 10].

В доступной нам литературе отсутствуют сведения об использовании для профилактики маститов у коров иммуномодуляторов органического происхождения.

В связи с чем изучение влияния использования иммуномодулятора «Иммунофарм» для профилактики мастита у высокопродуктивных коров – актуально.

Цель исследований – обоснование применение препарата «Иммунофарм» для профилактики мастита у высокопродуктивных коров. На основании поставленной цели решались следующие задачи: изучить морфологические показатели крови коров до и после использования препарата «Иммунофарм»; определить показатели естественной резистентности организма у коров с учётом дозы использования препарата «Иммунофарм»; определить эффективность профилактики субклинических маститов у исследуемых групп коров.

Материал и методы исследований . Исследования проводились на коровах голштинской породы в условиях ГУП СО «Купинское» Самарской области с уровнем молочной продуктивности 9500 кг и более.

Для определения эффективности иммуномодулирующего средства для профилактики заболеваний молочной железы у коров было сформировано из числа сухостойных коров с соблюдением принципа пар-аналогов, четыре группы коров по 10 голов в каждой (контрольная, опытная – 1, опытная – 2, опытная – 3).

Иммуномодулирующее средство – препарат, содержащий в виде активного начала муравьиный альдегид – 0,07-0,24 %; натрия хлорид – 0,90-0,95 %; дистиллированная вода – это бесцветная жидкость без запаха. Препарат обладает способностью активизировать функцию организма за счёт воздействия на клеточный иммунитет, обменные энергетические процессы. Иммуномодулирующий препарат вводили опытным группам коров во второй период сухостоя через 30 дней после запуска внутримышечно с интервалом 7 дней трехкратно и двукратно после родов через 8-10 часов и на 7 день (опытная первая группа – 4,0 мл; опытная вторая – 6,0 мл; опытная третья – 8,0 мл). Контрольной группе животных иммуномодулирующее средство не инъецировали. В процессе исследования все животные экспериментальных групп находились в одинаковых условиях кормления и содержания.

В процессе исследования у коров всех групп брали кровь до начала применения препарата, на 30 день после запуска. В последующем кровь брали у этих же животных за 5-7 дней до родов.

Кровь брали у коров из хвостовой вены, используя систему «Моновет», утром за 2 часа до кормления в два контейнера: первый контейнер содержал гепарин - в крови из данного контейнера определяли морфологический состав; из второго контейнера кровь использовали для проведения исследования ее сыворотки (биохимические показатели и градиента естественной резистентности).

Морфологический состав крови изучали подготовкой мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Подсчет форменных элементов крови проводили методом цифровой микроскопии по В. А. Дубровскому. Фагоцитарную активность нейтрофилов крови устанавливали по методу А. И. Иванова и Б.А. Чухварина в качестве тест-культуры использовали Е. ColliО 111 , выращенную в течение суток на мясо-пептонном агаре

(МПА). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу О. В. Бухарина, В. Л. Созыкина с использованием тест-культуры О 111 . Лизоцимную активность устанавливали по О. В. Бухарину с применением суточной культуры Micrococcus Luteus (штамм 2655 ГКИ им. Л.А. Тарасевича).

Количественные исследования иммуноглобулинов класса G проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по J. Manchinietal. в модификации О.Н. Грязновой. Исследования показателей крови проводили в лаборатории ФГБОУ ВО Самарский ГАУ и лаборатории гематологии и иммунологии ФГБОУ ВО Самарский МГУ. Эффективность препарата «Иммунофарм» и его доз для профилактики субклинического мастита у коров определяли с использованием Кенотеста. Исследование на выявление субклинического мастита у коров исследуемых групп проводили во время вечерней дойки на 10 день после отела. После отключения доильного аппарата сдаивались последние струйки молока в пластинку молочно-контрольную ПМК-1. Результаты учитывали согласно инструкции по применению препарата «Кенотест».

Весь полученный цифровой материал проведенных исследований был обработан методом биометрической вариационной статистики на определение степени достоверности разницы сравниваемых показателей с использованием критерия Стьюдента, принятом в биологии и зоотехнии с применением программного комплекса Microsoft Excel 10. Степень отражена соответствующими значениями: P<0,05*; P<0,01**; P<0,001***.

Результат исследований. Известно, что изменение показателей гомеостаза вызывает нарушение морфофункционального состояния животного и указывает на физиологическое состояние или на наличие патологических изменений в организме животных. Изменение морфологических показателей крови отражает особенности проявления ответной реакции организма на экзо- эндогенные раздражители.

Для определения воздействия препарата «Иммунофарм» на организм коров до начала использования препарата, у исследуемых групп коров брали кровь, показатели которых учитывали и при формировании групп.

Морфологические показатели крови коров до начала исследования (через 30 дней после запуска) сравнивали с градиентами контрольной группы через 10 дней после отела, а показатели контрольной группы с градиентом подопытных групп (Таблица 1).

Таблица 1 – Морфологические показатели крови исследуемых групп коров

Показатель	Через 30 дней после запуска	Через 10 дней после родов
		группа животных
		контрольная	опытная-1	опытная-2	опытная-3
Гемоглобин, г/л	104,12±0,64	110,40±0,42	115,64±0,52*	124,20±1,02**	123,90±1,10*
Эритроциты, 1012/л	5,25±0,28	6,20±0,12	6,54±0,24	7,35±0,28	7,40±0,31
Лейкоциты, 109/л	6,82±0,31	7,84±0,26	8,24±0,25	9,12±0,16	9,02±0,18
Тромбоциты, 109/л	275,18±29,17	345,50±32,14	390,16±20,15	510,40±18,32*	514,60±17,20
Лейкоформула, %
Базофилы	1,80±0,12	1,60±0,05	1,40±0,06	1,10±0,06	1,20±0,05
Эозинофилы	6,50±0,08	5,20±0,10	4,34±0,05**	3,20±0,02***	3,25±0,02***
Нейтрофилы, в т.ч.	34,90±0,48	36,18±0,51	37,15±0,49	39,40±0,35	38,60±0,37
юные	2,60±0,14	1,80±0,12	1,50±0,08	0,80±0,03	0,68±0,08
палочкоядерные	4,80±0,22	3,75±0,14	3,20±0,02	1,50±0,04	1,45±0,04
сегментоядерные	27,50±0,56	30,63±0,45	32,45±0,47*	37,10±0,38***	36,47±0,28**
лимфоциты	51,12±0,63	54,97±0,76	54,38±0,72	52,10±0,14	52,75±0,17
моноциты	1,50±0,14	2,05±0,04	2,80±0,07**	4,20±0,04***	4,20±0,05***

Содержание эритроцитов в крови коров через 30 дней после запуска составило 5,25×1012/л, лейкоцитов – 6,82×109/л, тромбоцитов – 275,18×109/л.

Количество структурных элементов лейкоцитов составило: эозинофилов – 6,50 %; лимфоцитов – 51,12 %; моноцитов – 1,50 %; базофилов – 1,80 %; нейтрофилов в том числе сегментоядерных 27,5 %; юных – 2,60 %; палочкоядерных – 4,80 %.

Морфологические показатели крови коров контрольной группы после окончания сухостойного периода и отела, достоверно больше градиента по сравнению чем через 30 дней после сухостоя по содержанию гемоглобина на 6,28 г/л, эритроцитов на 0,95×1012/л, лейкоцитов на 10,20×109/л, тромбоцитов на 70,32×109/л, сегментоядерных нейтрофилов на 3,13 %; лимфоцитов на 3,85 %; моноцитов на 0,55 %; при снижении содержания базофилов на 0,20 %;

эозинофилов на 1,30 %; юных нейтрофилов на 0,80 %; палочкоядерных нейтрофилов на 1,05 %. Улучшение морфологического состава крови у коров на 10 день после отела указывает на положительное влияние на морфофункциональное состояние коров сухостойного периода, однако приведенные показатели крови коров контрольной группы меньше, чем референсные градиенты.

В результате проведенных исследований установлено, что морфологические показатели крови зависят от дозы использования препарата «Иммунофарм» (Таблица 1). Показатели крови у коров, которым вводили препарат «Иммунофарм» в дозе 6,0 мл и 8,0 мл, достоверно больше, чем в контроле и у коров первой опытной группы, которым вводили препарат «Иммунофарм» в дозе 4,0 мл. Градиенты крови у коров, которым вводили препарат «Иммунофарм» в дозе

6,0 мо и 8,0 мл, не имеют достоверных различий. В связи с чем мы сочли возможным провести сравнительный анализ между показателями крови второй опытной группы с контрольной и первой опытной группами. Показатели крови у коров второй опытной группы соответствуют пороговым референсным значениям и достоверно больше, чем у животных контрольной и первой опытной группами соответственно по содержанию гемоглобина на 13,8 г/л и 8,56 г/л, эритроцитов на 1,75×1012/л и 0,81×1012/л, лейкоцитов на 1,28×109/л и 0,88×109/л, тромбоцитов на 164,90×109/л и 120,24×109/л, сегментоядерных нейтрофилов на 6,47 % и 4,65 %, моноцитов на 2,15 % и 1,4 % при снижении содержания базофилов на 0,5 % и 0,3 %, эозинофилов на 2,0 % и 0,64 %, нейтрофилов: юных на 1,0 % и 0,7 %, палочкоядерных на 2,25 % и 1,70 %, лимфоцитов на 2,87 % и 2,28 %.

Известно, что ведущим звеном в развитии патологических процессов в организме животных является угнетение естественной резистентности, которая находится в прямой зависимости от степени патологического процесса. Учитывая, что иммуномодуляторы обладают широким спектром действия, недостаточно изучена степень влияния дозы препарата «Иммунофарм» на показатели естественной резистентности организма исследуемых групп коров (Таблица 2).

Таблица 2 – Показатели естественной резистентности организма коров исследуемых групп

Показатель	Через 30 дней после запуска	Через 10 дней после родов
		группа
		контрольная	опытная-1	опытная-2	опытная-3
Фагоцитарная активность нейтрофилов, %	56,20±1,40	59,18±0,65	61,35±0,37*	66,49±0,23**	65,82±0,30***
Бактерицидная активность, %	46,14±0,80	49,52±0,41	50,53±0,34	56,13±0,27***	56,46±0,29***
Лизоцимная активность, %	14,55±0,62	15,24±0,45	17,04±0,21*	19,81±0,25**	19,76±0,31**

Показатели естественной резистентности у исследуемых групп коров до начала исследований (30 дней после запуска) составили: фагоцитарная активность нейтрофилов – 56,20 %; бактерицидная активность – 46,14 %; лизоцимная активность – 14,55 %. На 10 день после родов показатели естественной резистентности коров (контрольная группа) имеют большие градиенты, чем до начала исследования через 30 дней после запуска, по фагоцитарной активности нейтрофилов на 2,98 %, бактерицидной активности на 3,12 %, лизоцимной активности на 0,69 %. Сравнительный анализ показателей естественной резистентности у животных опытных групп позволил установить, что доза введения препарата «Иммунофарм» 6 мл и 8 мл достоверно больше, чем у животных первой опытной и контрольной групп. Использование дозы препарата 4,0 мл у коров первой опытной группы повышает фагоцитарную активность на 2,17 %, бактерицидную активность на 1,01 %, лизоцимную активность 1,8 % по сравнению с контрольной группой коров. Показатели естественной резистентности организма коров второй и третьей опытных групп больше, чем у контрольной группы, на 7,31 % и 6,64 % по фагоцитарной активности нейтрофилов, по бактерицидной активности на 6,61 % и 6,94 %, по лизоцимной активности на 4,57 % и 4,52 % соответственно, чем у животных контрольной группы. Между показателями естественной резистентности организма у коров второй и третьей опытных групп разница не значительна и составляет в среднем по всем трем показателям 0,05 – 0,10 %.

По результатам обследования коров исследуемых групп на 10 день после отела на субклинический мастит, была определена профилактическая эффективность используемых доз препарата «Иммунофарм» (Таблица 3).

Таблица 3 – Показатели обследования коров исследуемых групп на субклинический мастит

Результат обследования, гол./%	Группа животных
	контрольная	опытная-1	опытная-2	опытная-3
Отрицательно	9/45	14/70	19/95	18/90
Сомнительно	1/10	4/20	1/5	2/10
Положительно	10/50	2/10	-	-

У животных контрольной группы было выявлено наличие субклинического мастита у 10 коров или 50 %, что больше чем у коров первой опытной группы, которым вводили препарат «Иммунофарм» в дозе 4,0 мл на 40 %. У животных второй и третьей опытных групп положительной реакции молока на субклинический мастит с использованием пробы «Кенотест» не установлено. Однако между показателями отрицательной реакции у животных второй и третьей опытных групп составила 5 % в пользу коров второй опытной группы. Это по-видимому указывает на оптимальность дозы препарата «Иммунофарм» – 6,0 мл для профилактики субклинического мастита за счет улучшения показателей морфологии крови и естественной резистентности организма при использовании данной дозы.

Заключение. В результате проведенных исследований установлено, что применение препарата «Иммунофарм» в дозе 6,0 мл внутримышечно трехкратно с интервалом 7 дней и двукратно через 8-10 часов и на 7 день после родов, обеспечивает улучшение количественных и качественных показателей крови. Содержание гемоглобина увеличивается на 6,28 г/л, сегментоядерных нейтрофилов на 3,13 %, фагоцитарная активность нейтрофилов на 7,31 %, бактерицидная активность на 6,61 %, лизоцимная активность на 4,57 % больше по сравнению с контролем, что обеспечивает повышение иммунологического статуса у коров данной группы и профилактику субклинических маститов в послеродовой период на 50 %.

Резюме

Цель исследования – обоснование применения препарата «Иммунофарм» для профилактики мастита у высокопродуктивных коров. Для проведения экспериментальных исследований было сформировано четыре группы коров после их запуска через 30 дней (контрольная, опытная-1, опытная-2, опытная-3) по 20 голов в каждой группе животные подбирались по принципу аналогов, а также учитывали показатели крови коров через 30 дней после запуска. В процессе исследования все животные экспериментальных групп находились в одинаковых условиях кормления и содержания. Иммуномодулирующий препарат «Иммунофарм» вводили опытным группам коров внутримышечно трехкратно с интервалом 7 дней через 30 дней после запуска, после родов через 8-10 часов и на 7 день (опытная-1 – 4,0 мл, опытная-2 – 6,0 мл, опытная-3 – 8,0 мл). С целью определения влияния показателя крови на проявление субклинических мастита у высокопродуктивных коров при использовании разных доз препарата «Иммунофарм» у исследуемых групп коров изучали морфологический, биохимический состав коров и показатели естественной резистентности организма. По данным исследования у коров до начала исследований показатели крови не соответствует пороговому значению. По результатам экспериментальных исследований использование препарата «Иммунофарм» в дозе 6,0 мл обеспечивает повышение содержания в крови гемоглобина на –13,80 г/л тромбоцитов – 164,9×109/л сегментоядерных нейтрофилов – 6,74 %, моноцитов – 2,15 %.

Показатели, характеризующие естественную резистентность организма коров, которым вводили препарат в дозе 6,0 мл больше по следующим градиентам: по фагоцитарной активности нейтрофилов на – 7,31 % бактерицидной активности на – 6,61 % лизоцимной активности на 4,57 %, что способствовало сокращению проявления субклинических маститов на 50 % по сравнению с контролем.

Baimishev M.H., Baimishev H.B., Mullakaev O.T., Sharipova D.Y., Tenyakov V.A. Summary

The purpose of the study is to substantiate the use of the drug "Immunofarm" for the prevention of mastitis in high-yielding cows. Four groups of cows were formed for experimental researches after their start-up in 30 days (control, experimental-1, experimental-2, experimental-3) with 20 animals in each group, the animals were selected according to the principle of analogues, and also the blood parameters of cows in 30 days after start-up were taken into account. During the study, all the animals of the experimental groups were under the same feeding and housing conditions. Immunomodulatory preparation "Immunofarm" was injected into the experimental groups of cows intramuscularly three times with the interval of 7 days in 30 days after start-up and after parturition in 8-10 hours and on the 7th day (experimental 1 – 4,0 ml, experimental 2 – 6,0 ml, experimental 3 – 8,0 ml). In order to determine the influence of blood index on the manifestation of subclinical mastitis in highly productive cows when using different doses of the preparation "Immunofarm" in the studied groups of cows, the morphological, biochemical composition of cows and indices of natural resistance were studied. According to the data of the study in cows before the study blood indices do not correspond to the threshold value. According to the results of experimental studies, using the preparation "Immunofarm" at the dose of 6,0 ml provides increase of haemoglobin in the blood by – 13,80 g/l, platelets – 164,9-109/l, segmented neutrophils – 6,74 %, monocytes – 2,15 %.

The indices characterizing natural resistance of the organism of cows which have received the preparation in the dose of 6,0 ml are higher in the following gradients: by 7,31 % for the phagocytic activity of neutrophils and by – 6,61 % for the bactericidal activity and by 4,57 % for the lysozyme activity which helped to reduce symptoms of subclinical mastitis by 50 % if compared with the control.