Влияние экстракта сухого Lophanthus chinensis на психоэмоциональное состояние крыс Wistar при хроническом токсическом гепатите

В настоящее время отмечается рост числа хронических заболеваний печени, и они занимают одно из ведущих мест среди причин нетрудоспособности и смертности населения во всем мире. По данным American Liver Foundation, около 100 миллионов человек имеют неалкогольную жировую болезнь печени, у 2,7 миллиона жителей установлен диагноз хронического гепатита С. Употребление сверх меры напитков, содержащих алкоголь, может также стать причиной развития хронического гепатита. В результате эти состояния могут приводить к хроническому воспалению ткани печени и, как следствие, развитию цирроза, смертность от которого увеличилась и составила 2,4% в 2017 г. по сравнению с 1,9% в 1990 г.1

При фиброзе происходит замещение нормальной ткани на соединительную, вследствие чего токсины, в том числе аммиак, не метаболизируются в печени, а попадают в мозг, нарушая его функцию с развитием печеночной энцефалопатии [3]. В начале заболевания могут наблюдаться нарастающие симптомы изменения личности, появление тревоги, депрессивного состояния, агрессии, раздражительности или, наоборот, апатии и сонливости [4] . В случае прогрессирования заболевания психоневрологические нарушения нарастают, пациент может потерять сознание и впасть в кому [3] .

В связи с этим актуальным является поиск новых лекарственных веществ, способных оказывать нейропротективное действие при повреждении печени. Произрастающий на территории Байкальского региона лофант китайский (Lophanthus chinensis Benth; синоним: Nepetalophanthus (L.) Fisch. ex Loew) применяется в тибетской и монгольской медицине в лечении заболеваний гепатобилиарной, нервной и сердечно-сосудистой систем [1; 2; 6]. В надземной части растения выделены полисахариды, флавоноиды, тритерпены, дитерпены, которые оказывают противовоспалительный и антиоксидантный эффекты [8; 10] .

Цель работы — оценить действие экстракта сухого L. chinensis на психоэмоциональное состояние крыс Wistar в условиях моделирования фиброза печени.

Материалы и методы исследования

Исследования проведены на 48 лабораторных крысах стока Wistar обоего пола. Фиброз печени вызывали совместным введением тетрахлорметана и 5%-ного этанола [5]. Содержание животных в условиях вивария, а также все манипуляции с животными осуществлялись соответственно требованиям Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях (Strasbourg, 1986). Все проведенные исследования согласованы с Комитетом по этике ИОЭБ СО РАН (№ 3 от 20.10.2021).

1The global, regional, and national burden of cirrhosis by cause in 195 countries and territories, 1990-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017 / GBD 2017 Cirrhosis Collaborators. The Lancet Gastroenterology andhepatology. 2020; 5(3): 245-266.

Все лабораторные животные, взятые для проведения исследований, были рандомно разделены на четыре экспериментальные группы: позитивный контроль, негативный контроль и первая опытная и вторая опытная. В каждую группу входило по 12 животных. Крысы из группы негативного контроля, а также двух опытных на протяжении пяти недель (два раза в неделю) получали тетрах-лорметан внутрижелудочно в дозе 1 мл/кг, разведенный оливковым маслом один к одному, а также ежедневно внутрижелудочно 5%-ный раствор этилового спирта в аналогичной дозе [5] . Начиная с 15-х суток крысам первой опытной группы вводили peros ежедневно экстракт L. ^m em s i ! s (100 мг/кг), второй опытной группе G. biloba (100 мг/кг) в форме водного раствора через час после введения гепа-тотоксинов до конца эксперимента. Лабораторным крысам группы позитивного контроля внутрибрюшинно вводили 1 мл/кг оливкового масла по схеме введения тетрахлорметана, а также peros воду в объеме 10 мл/кг в течение всего эксперимента.

Психоэмоциональное состояние животных оценивали на 42-е сутки от начала введения тетрахлорметана в методиках «открытое поле» и «крестообразный лабиринт». Регистрируемые показатели соответствуют требованиям, представленным в Руководстве [5] .

Полученный цифровой материал был обработан с использованием пакета программ Statisticafor Windows 6.0. Соответствие изучаемых величин нормальному распределению проводили с использованием критерия Шапиро — Уилка. Используя непараметрический критерии Манна-Уитни оценивали значимость различий между показателями животных опытных групп и группы негативного контроля. Различия считали достоверными при p<0,05.

Результаты и обсуждение

При проведении теста «открытое поле» было выявлено, что у подопытных крыс, которым вводился фитоэкстракт L. chinensis, повышалась локомоторная и ориентировочно-исследовательская активность и уменьшался уровень тревожности (табл. 1).

Таблица 1 Поведенческие показатели крыс Wistar в открытом поле при экспериментальном фиброзе печени и на фоне их коррекции экстрактом L. chinensis

Примечание: ДА — двигательная активность; ПК — периферические квадраты; ЦК — центральные квадраты; ВС — вертикальные стойки; ВА — вертикальная активность; НР — норковый рефлекс; Гк — груминг короткий; Гд — груминг длинный; Го — груминг общий; Дф — дефекации. В таблицах 1 и 2 значение статистически достоверно относительно показателя: # — интактной группы; * — контрольной группы.

В опытных группах животных, получавших испытуемый растительный экстракт и препарат сравнения, заходы на центральные квадраты и вертикальные стойки без опоры двукратно превышали (р<0,01) показатели животных группы негативного контроля. В первой опытной группе общая вертикальная активность, включающая вертикальные стойки с опорой и без нее, была выше на 57%, количество пересечений периферических квадратов — на 45% аналогичных значений в группе негативного контроля. За время проведения теста отсутствовали акты дефекаций и снижалось количество груминга у лабораторных животных, получавших фитоэкстракт L. chinensis.

В крестообразном лабиринте животные из группы негативного контроля показали повышенный уровень тревожности в незнакомой ситуации, что выражалось в увеличении времени нахождения в закрытых рукавах (табл. 2). Как показало исследование, количество животных, посетивших открытые рукава, в первой опытной группе больше на 42%, чем в контроле. Вследствие этого число заходов на открытое пространство и время нахождения там в два раза выше контрольных значений, что говорит об эмоциональной стабильности лабораторных животных, получавших экстракт сухой L. chinensis. Введение изучаемого растительного экстракта в среднем двукратно повышало количество свешиваний и вертикальных стоек по сравнению со значениями животных негативного контроля. У крыс опытных групп регистрировали меньшее число актов груминга и дефекаций, чем в группе негативного контроля. Следовательно, животные, получавшие экстракт сухой L. chinensis, испытывали меньше страха, были более эмоционально стабильными.

Описанные результаты связаны с такими веществами, как полисахариды, каротиноиды (а- и Р-каротины, лютеин и зеаксантин), дитерпены, тритерпены (оле-аноловая и урсоловая кислоты), флавоноиды (апигенин, лютеолин, лютеолин-7-гликозид, сколимозид), кумарины (скополетин), фенолокислоты (кофейная и розмариновая кислоты), фитостерин ф-ситостерин) и др., входящими в состав экстракта сухого L. chinensis. По данным литературы, они обладают стабилизирующим, противотревожным действием на нервную систему, восстанавливают познавательные функции при различных патологических состояниях [7-9; 11].

Таблица 2

Поведенческие показатели крыс Wistar в крестообразном лабиринте при экспериментальном фиброзе печени и на фоне их коррекции экстрактом L. chinensis

Примечание: ОР — открытые рукава, ЗР — закрытые рукава; ЦП — центральная площадка.

Вывод

Таким образом, результаты, полученные в ходе данного эксперимента, свидетельствуют, что экстракт, изготовленный из надземной части лофанта китайского , способствует снижению тревожности, эмоциональности и усилению исследовательского поведения лабораторных животных в условиях экспериментального фиброза печени.