Аланинаминотрансфераза в тканях двенадцатиперстной кишки у крольчат

Фермент аланинаминотрансфераза (АлАТ или АЛТ) является внутриклеточным ферментом, катализирует аминогруппы на альфа-кетоглутаровую кислоту с образованием пировиноградной кислоты и глутаминовой кислоты. Поэтому этот фермент является объективным показателем белкового обмена, происходящего в клетках тканей органов [1, 9].

В настоящей работе освещаем закономерности становления с возрастом крольчат фермента, участвующего в синтез белковых молекул – аланинаминотрансферазы. В каждую фазу питания крольчат в органах пищеварения потребность синтеза ферментов в тканях органов изменяется в зависимости от качества и количества поступающей пищи, корма. В связи с этим в клетках тканей органов изменяется скорость образования ферментов, участвующих в обменных процессах и обеспечивающих их дифференциацию.

Аланинаминотрансфераза, участвуя в превращении заменимых аминокислот в цитоплазме клеток, становится объективным показателем белкового обмена в тканях органов пищеварения и отражает их специфику развития в каждой специфической фазе питания животных [2, 3, 4, 6, 7, 8].

Материалы и методы. Для исследований использовали крольчат породы серый великан в возрасте 1, 6, 12, 18, 24, 30, 45, 60, 90 и 120 суток, выращенных в условиях личного хозяйства с соблюдением необходимых ветеринарносанитарных правил и норм кормления в весенне-летний сезон, по 5 голов в каждом возрасте.

Крольчат натощак вводили в состояние общего наркоза. Эвтаназию и все манипуляции выполняли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (1977) [5] Вскрытие животных проводили по методу Шора [10].

Извлеченную двенадцатиперстную кишку очищали от содержимого, промывали с холодным физиологическим раствором, разделяли на проксимальную, медиальную и дистальную части и замораживали их отдельно в жидком азоте сосуда Дюара. В лабораторных условиях части (пробы) кишки отделяли на слизистую и мышечную слои, ткани гомогенизировали в гомогенизаторе со скоростью 5000 об/мин. В гомогенате определяли активность фермента по методу Райтмана и Френкеля колометрированием (КФК-2) и одновременно спектрофотометрированием ((UV-1800) с использованием набора реагентов компании ОАО «Витал Девелопмен Корпорэйшн» СПб. Расчет активности фермента провели по калибровочному графику.

Результаты исследований и их обсуждение . Полученные в ходе исследований данные обобщены в таблице.

Таблица - Активность АлАТ в тканях двенадцатиперстной кишки у крольчат

Крольчата рождаются по сравнению с другими возрастными группами относительно с низким уровнем АлАТ (мкмоль/г/час). Наименьшие величины фермента у односуточных крольчат определяются в тканях слизистого слоев дистальной, проксимальной и медиальной частей слизистой оболочки изучаемой кишки, соответственно составляют 17,2±1,3, 18,2±1,7 и 19,9±1,5 и мышечного слоя дистальной части, 16,1±1,8. В тканях мышечного слоя медиальной части (28,4±2,2) и мышечного слоя проксимальной части (34,6±2,5) кишки уровень фермента достоверно выше, чем в тканях слизистого слоя, соответственно в 1,4 раза (р≤0,05) и 1,7 раза (р≤0,01).

Низкий уровень фермента АлАТ в тканях двенадцатиперстной кишки у односуточных новорожденных крольчат, на наш взгляд, связано с нахождением в полости органов пищеварения, в том числе и в полости двенадцатиперстной кишки -молозива. Молозиво - ценнейший незаменимый продукт питания для новорожденных крольчат, богатый органическими и неорганическими веществами в течение первых 4-5 суток их жизни. Компоненты молозива всасываются в кровь через слизистую оболочку кишок без изменений и с минимальной затратой энергии. К моменту рождения крольчат ткани двенадцатиперстной кишки достаточно сформированы для обеспечения всасывания и усвоения компонентов молозива. В тканях пищеварительных органов в молозивную фазу питания крольчат интенсивные обменные, преобразовательные процессы не происходят обусловленные невысокой активностью разнообразных ферментов, в том числе и белкового обмена как АлАТ.

В последующие шесть суток жизни крольчат, к 6 суточному возрасту, состав молозива поступающего в кишку изменяется: в нем уменьшается количество органических веществ, увеличивается доля воды, молозиво начинает переходит в молоко. В эту переходную молозивно-молочную фазу структура и функции слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки у крольчат дифференцируясь приспосабливаются к усвоению новых компонентов поступающего корма, что отражается и в изменении активности АлАТ в тканях изучаемой кишки: уровень фермента в эту фазу питания значительно возрастает в тканях слизистого слоя проксимальной части, в 2,9 раза, р≤0,001, до 52,8±3; в тканях слизистого слоя медиальной части – в 2,5 раза, р≤0,001, до 50,6±2,8; в тканях слизистого слоя дистальной части - в 5,2 раза, р≤0,001, до

88,9±4,2 и в тканях мышечного слоя дистальной части – в 2,1 раза, р≤0,001, до 33,8 + 2,6. Вместе с тем активность АлАТ в тканях мышечного слоя проксимальной части и мышечного слоя медиальной части в этот промежуток жизни крольчат изменяется незначительно, снижается недостоверно.

По-видимому, процессы белкового обмена и скорость обновления мышечных клеток в эту фазу питания крольчат в тканях проксимальной и медиальной частей двенадцатиперстной кишки сохраняются на уровне односуточных, что обеспечивает более длительное нахождение продуктов питания в полости изучаемой кишки и формирует условия для более продолжительного всасывания компонентов пищи и подтверждает асинхронность развития отдельных участков кишки с возрастом животных.

В последующие шесть суток жизни крольчат, к 12 суточному возрасту, в первую фазу молочного питания, существенных, достоверных возрастных изменений активности АлАТ в тканях всех трех исследуемых частей двенадцатиперстной кишки не происходят. Можно полагать, что структура кишки у двенадцати суточных крольчат вполне адаптирована выполнять все функции, связанные с пищеварением и всасыванием компонентов молока без повышения напряжения ферментосинтезирующих систем.

Во второй фазе молочного питания крольчат, у восемнадцати суточных, состав молока поступающего в органы пищеварения существенно не изменяется. Вместе с тем в полости желудка и кишок у крольчат этого возраста значительно увеличивается его количество. На усвоения повышенного объема молока и количества его компонентов возрастают процессы дифференцировки клеток кишки, в них усиливаются обменные процессы, что отражается на активности ферментов, участвующих в синтетических, преобразовательных процессах в тканях органов. Активность АлАТ в тканях слизистого слоя проксимальной части кишки к восемнадцати суточному возрасту повышается в 1,4 раза, р≤0,01, до 80,0±3,9; в тканях мышечного слоя проксимальной части – в 2,0 раза, р≤0,001, до 64,6±3,3; в тканях слизистого слоя медиальной части -в 1,7 раза, р≤0,001, до 94,7±4,7; в тканях мышечного слоя медиальной части – в 1,7 раза, р≤0,001, до 52,9±2,8 и в тканях мышечного слоя дистальной части – в 2,3 раза, р≤0,001, до 80,7±2,9. Вместе с тем в тканях слизистого слоя дистальной части кишки активность АлАТ сохраняется на уровне двенадцати суточных и составляет 82,9±4,1.

У кроликоматок к двадцати четырех суточному возрасту крольчат начинается снижение продукции молочных желез. Крольчата начинают дополнительно принимать мягкие части растительного корма. В органы пищеварения крольчат начинают поступать новые компоненты пищи, которые вызывают отдельные изменения в структуре и функции стенок органов пищеварения, в том числе и двенадцатиперстной кишки. Наши результаты исследований свидетельствуют, что у двадцати четырех суточных крольчат более существенные и достоверные изменения активности АлАТ выявляются в тканях слизистого слоя проксимальной части и слизистого слоя дистальной части двенадцатиперстной кишки, соответственно в 1,4 раза, р≤0,01, до 108,2±5,8 и в 1,3 раза, р≤0,05, до 108,9±6,4.

У месячных крольчат, начинающих переходить в фазу растительного питания, существенных, достоверных возрастных изменений активности АлАТ в тканях слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки не происходят.

В последующие возрастные сроки, к 45 суточному возрасту крольчат, в первой фазе растительного питания, достоверные возрастные изменения активности АлАТ выявляются в тканях мышечного слоя проксимальной части кишки, возрастает в 1,2 раза, р≤0,05, до 80,2±3,9 и в тканях мышечного слоя ее дистальной части, снижается на 44,3%, р≤0,001, до 46,9±2,2. В дальнейшем достоверные возрастные изменения АлАТ обнаруживаются лишь в тканях мышечного слоя медиальной части у двухмесячных крольчат, увеличивается в 1,4 раза, р≤0,01, до 77,1±3,1 и с этого возрастного срока уровень фермента здесь стабилизируется и у трехмесячных в тканях мышечного слоя дистальной части кишки, повышается в 2,4 раза, р≤0,001, до 97,5±49 и с этого возрастного срока здесь уровень фермента также стабилизируется.

С восемнадцати суточного возраста активность АлАТ стабилизируется в тканях слизистого слоя медиальной части, а двадцати четырех суточного возраста активность фермента стабилизируется в тканях слизистого слоя проксимальной части и слизистого слоя дистальной части кишки. С 45 суточного возраста крольчат активность АлАТ стабилизируется в мышечном слое проксимальной части кишки.

Заключение. Анализ сроков изменений активности АлАТ в тканях слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки свидетельствует, что наиболее интенсивные возрастные изменения активности фермента АлАТ в слизистом слое кишки происходят в молозивно-молочную и молочные фазы питания крольчат. Вместе с тем стабилизация активности фермента в мышечном слое кишки происходит в фазах растительного питания, то есть позже, чем в слизистом слое.

Резюме

Активность аланинаминотрансферазы в тканях проксимальной, медиальной и дистальной частей слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки у разновозрастных крольчат изменяется в соответствии смены фаз питания. Стабилизация активности этого фермента в мышечных слоях кишки происходит в более поздние сроки жизни крольчат, чем в тканях слизистого слоя.