Исследование ноотропного действия комплексного применения кортексина с концентратом полиненасыщенных жирных кислот в условиях экспериментальной хронической алкогольной интоксикации

В настоящее время хроническая алкогольная интоксикация (ХАИ) является актуальной социально-экономической проблемой населения. Ежегодно в России погибает более ста тысяч людей от острой и хронической интоксикации этанолом.

Высок риск последствий этого явления в форме хронических заболеваний сердечно-сосудистой системы и инвалидизации. Наиболее частым и ранним осложнением ХАИ является нарушение когнитивных функций. В настоящее время в лечении последних наиболее часто применяются синтетические ноотропные препараты, но зачастую они обладают рядом негативных побочных действий, поэтому перспективным является поиск новых лекарственных препаратов природного происхождения.

Известно, что при ХАИ происходит дисбаланс между ГАМК-ергической и серотонинергической системами [6]. Одним из представителей препаратов на основе природных полипептидов является кортексин [1], обладающий ноотропным, нейропротективным, антиоксидантным и тканеспецифическим действиями, оказывает стабилизирующее действие между тормозными и активирующими системами. Доказано, что такие лекарства улучшают процессы обучения, защищают от нейротоксического действия ядов, ингибируют перекисное окисление липидов, активизируют метаболические процессы в клетках головного мозга [5].

Известно о высокой биологической активности длинноцепочечных полинена-сыщенных жирных кислот (ПНЖК), особенно ω-3 ряда. Выявлена их положительная роль в структуре фосфолипидов плазматических мембран нервных клеток головного мозга, реализации неспецифического иммунного ответа, противовоспалительных реакций и др. [4]. Они являются предшественниками физиологических веществ, вырабатываемых самим организмом, обеспечивающих многоуровневую регуляцию систем организма, проявляя тем самым высокий терапевтический эффект и повышая неспецифическую резистентность организма [11]. Основными природными источниками ω-3 ПНЖК являются водные биологические ресурсы. Исследования жирнокислотного состава липидов байкальской нерпы ( Phoca (Pusa) SibiricaGmel. ) показали, что ее подкожный жир богат ПНЖК, в том числе эссенциальными (содержание эйкозапентаеновой кислоты достигает 4%) [7]. Эти данные указывают на высокую биологическую ценность и перспективность использования жира как источника для получения биологически активных добавок. Предполагается, что комплексное применение препаратов полипептидов с ПНЖК будет более эффективным и длительным, чем использование этих средств по отдельности.

Цель работы: определение степени выраженности ноотропного и адаптоген-ного действий комплексного применения кортексина с концентратом ПНЖК из жира нерпы на модели хронической алкогольной интоксикации.

Материалы и методы

Исследование было проведено на белых крысах обоего пола линии Wistar, массой 180‒220 г, полученных из питомника НИИ биофизики ФГБОУ ВО «Ангарская государственная техническая академия». Предварительно все животные, использованные в эксперименте, получали стандартный рацион вивария и воду adlibitum. Животные содержались в виварии в условиях, соответстветствующих «Правилам лабораторной практики» (GLP), а также приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Исследования были проведены по Правилам, принятым «Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18.03.1986 г. (Страсбург, 1986). Протокол исследований согласован с этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол

№ 2 от 05.09.2013 г.). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом.

Объектами исследований являлись концентрат полиненасыщенных жирных кислот на основе жира нерпы, полученный путем комплексообразования с мочевиной [12], препарат полипептидов головного мозга крупного рогатого скота — кортексин (ООО ГЕРОФАРМ, Россия) и препарат сравнения из пирролидоновой группы ноотропов — пирацетам (ФП АО ОБОЛЕНСКОЕ, Россия). Животные получали концентрат ПНЖК перорально в дозе 20 мг/кг ежедневно в течение 21-х суток. Кортексин вводился внутримышечно 1 раз в день в дозе 4 мг/кг в течение 10-ти дней. Пирацетам вводился в виде внутримышечных инъекций ежедневно в дозе 8 мг/кг 10 дней.

Экспериментальную хроническую алкогольную интоксикацию воспроизводили путем внутрижелудочного введения животным 40%-ного этанола в объеме 9 мл/кг один раз в сутки в течение 45 дней [3]. Экспериментальные животные были разделены на шесть групп:

1-я группа — интактная (животные не подвергались никакому воздействию);

2-я группа — контрольная (животные получали атерогенную диету);

3-я группа — после атерогенной диеты животные получали инъекции пирацетама;

4-я группа — после атерогенной диеты животные получали инъекции кортек-сина;

5-я группа — после атерогенной диеты животные получали концентрат ПНЖК;

6-я группа — после атерогенной диеты животные получали концентрат ПНЖК и инъекции кортексина в тех же режимах, что и 4-я и 5-я группы.

Животные были проверены в тесте «Открытое поле». Открытое поле представляло собой площадку (100×100 см) с непрозрачными границами высотой 30 см. Тестирование проводили в течение 5 минут. Фиксировали вертикальную (количество вставаний на задние лапки) и горизонтальную (количество пересеченных квадратов центральной зоны) активность, количество актов дефекации и груминг.

Количественные показатели, полученные в результате исследований, были обработаны статистическими методами, применяемыми для малых выборок, с определением средних величин (М) и стандартных ошибок (m). Степень достоверности (Р) результатов была оценена с помощью критерия t-Стьюдента. Достоверными различия между данными d в сравниваемых группах считали при вероятности, равной 95% (Р ≤ 0,05).

Результаты и обсуждение

Полученные данные исследования указывают на положительное влияние комплексного применения изучаемых препаратов по сравнению с применением их в режиме монотерапии. Результаты, полученные в ходе эксперимента, представлены в таблице.

Таблица

Влияние комплексного применения концентрата ПНЖК с кортексином на поведенческую активность крыс в тесте «открытое поле»

Показатели	Группы животных
	Интакт	Контроль	Пирацетам	Кортексин	ПНЖК	ПНЖК+ Кортексин
кз i S со 05 Н g KJ g g ” и X CD И Они	и4 4 ОО	LT) 40	ОО	ОО	оо^ 4 о ОО	4 ОО
о § 5 5   ° § 3 и О д И Дни	40	4	LT)	ОО	о игГ оо^	* in 4 * in ОО
со о а о Дии	ОО 4 V4	40^	LT) О -н ОО	оо^	4	4
о ” о m Й о 5 пор Ч X д 3 В О ИДИ	LT) 4	■К 4	пГ	пГ	4	4
о	д 4	ОО	-Н ОО	40 40^ -н	40	4
	4	40^		-н ОО	4 пГ	40 4

Примечание: различия достоверны по сравнению с данными:

* — в интактной группе; ** — в контрольной группе при р ≤ 0,05.

По данным таблицы 1 видно, что в контрольной группе по сравнению с интактной показатели общей двигательной активности снизились в целом на 25,6%. Курсовое введение комбинации препаратов кортексина с концентратом ПНЖК оказывало существенное положительное влияние, так, показатели общей двигательной активности увеличились на 45,2%, по сравнению с контролем, в основном за счет повышения вертикальной активности. Количество вертикальных стоек в данной группе было в 4,8 раза выше, а горизонтальная активность увеличилась на 26,9%. В группе комплексного применения показатели общей двигательной активности были выше на 7,2% по сравнению с группами, получавшими кортексин и концентрат в режиме монотерапии, и на 7,3% выше, чем в группе препарата сравнения пирацетам. Полученные данные указывают на стимулирование ориентировочнопознавательной активности у крыс, также снижение уровня тревожности и укорочение периода адаптации. Так, количество выходов в центральную зону у опытной группы увеличилось в 4,5 раза, в то же время отмечалось снижение количества болюсов и груминга на 48% и 39% по сравнению с данными контрольной группы. Также эти показатели были в 1,2 раза выше по сравнению с применением по отдельности. Таким образом, комплексное применение оказывало наиболее выраженное ноотропное действие, улучшило когнитивные функции мозга, способствовало снижению тревожности и укорочению периода адаптации к новым условиям среды. В целом комплексное применение не уступало по эффективности, а по некоторым показателям и превосходило ноотропное действие препарата сравнения — пирацетама.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что при комплексном применении исследуемых средств ноотропное влияние является более быстрым и продолжительным. Как известно, при ХАИ происходит нарушение ГАМК-ергиче-ской и серотонинергической регуляции, что приводит к дисбалансу нейромедиаторных систем и как следствие запуску перекисного окисления липидов. Недостаточное поступление в организм длинноцепочечных жирных кислот приводит к нарушению липидного обмена, что разрушает целостность белково-липидного комплекса клетки. Поэтому при комплексном применении средств, содержащих пептидную и жирнокислотную компоненты, происходит восстановление баланса этих клеточных комплексов, так как осуществляется влияние сразу на два компонента — белковую и липидную составляющие нейрона, что позволяет ему наиболее быстро и «качественно» включиться в нейрометаболические процессы.

Заключение

Результаты проведенного исследования показали, что комплексное применение Кортексина и концентрата ПНЖК на основе жира нерпы оказывает более выраженное ноотропное и адаптогенное действия, чем использование этих же средств в качестве монотерапии, в условиях нарушения деятельности центральной нервной системы, вызванного хронической алкогольной интоксикацией.