Тромбоэластографическая оценка коагуляционного потенциала крови у лошадей

Тромбоэластография представляет собой оценку состояния системы гемостаза путем изучения вязко-эластических свойств сгустка в цельной крови, позволяет оценить как клеточные, так и плазменные компоненты системы гемостаза, обеспечивая интегральную оценку гемостатической системы. Эти особенности отличают тромбоэластографию от обычных рутинных коагулометрических тестов (например, количество тромбоцитов, протромбиновое время, активированное частичное время тромбопластина, концентрация фибриногена), которые предоставляют информацию только об одном компоненте гемостатического процесса, и требуют сочетания нескольких показателей для полной оценки гемостаза.

Тромбоэластография, как метод оценки гемостаза, используется в медицине человека для диагностики и мониторинга коагулопатий уже более 50 лет. Однако она является относительно новой для ветеринарии [1, 2, 3] и только в последние годы стала использоваться в ветеринарной медицине лошадей [4, 5].

В настоящее время за рубежом проводятся обширные исследования по использования тромбоэластограммы для оценки гемостаза у собак и кошек [6, 7]. В отечественной литературе описаны возможности использования тромбоэластограммы у коров [8, 9] и морских млекопитающих [10].

Таким образом, ожидается, что использование тромбоэластограммы также будет набирать популярность для исследования системы гемостаза у лошадей. На сегодняшний день в зарубежной литературе представлены лишь единичные исследования гемостаза с помощью тромбоэластограммы на небольшом поголовье у здоровых лошадей [11, 12, 13, 14], лошадей с желудочно-кишечными заболеваниями [15, 16], жеребят с сепсисом [17], скаковых лошадей с индуцированным легочным кровотечением [18] и у одной кобылы с тромбастенией Гланцмана [19]. В отечественной литературе подобные исследования не освещены.

В этой связи основной целью данной работы была оценка коагуляционного потенциала у лошадей c помощью тромбоэластограммы.

Материал и методы исследования. Исследования проводили в период с декабря 2018 года по февраль 2019 года на базе СПК «Племенной конный завод Вологодский». В опыт были включены 10 клинически здоровых кобыл в возрасте от года до 5 лет и 5 новорожденных жеребят до 10-дневного возраста русской рысистой породы. Для определения состояния здоровья у животных перед взятием крови был проведен физикальный осмотр (осмотр, измерение температуры тела, частоты сердечных и дыхательных движений, аускультация легких, у жеребят -дополнительно пальпация пуповины).

Кровь для гемостазиологического исследования брали в утренние часы до первого кормления из яремной вены в вакуумные пробирки с цитратом натрия 3,8%. Кровь для исследования доставляли в лабораторию ВОДБ (г. Вологда) в течение 2 часов. Тромбоэластограмму регистрировали в цитратной крови на двухканальном компьютеризированном приборе Coagulation Analyser (TEG® 5000 – Hemoscope, USA) и прикладной диагностической программе. Для этого в кювету тромбоэластографа вносили 20 мкл 0,2М раствора кальция хлорида, затем 340 мкл цельной цитратной крови.

Анализатор Coagulation Analyser (TEG® 5000 – Hemoscope, USA) измеряет физические свойства сгустка крови, используя для этого специальную цилиндрическую чашечку в которую помещается образец крови [19]. Чашечка совершает вращательные движения относительно своей оси на угол 4º45´. Каждый вращательный цикл длится 10 секунд. Стержень, погруженный в образец крови, подвешен на скручивающейся проволоке (рис. 1) . Крутящий момент вращающейся чашечки передается на погруженный в образец стержень только после того, как образующийся за счет фибрино-тромбоцитных связей сгусток начинают соединять чашечку и стержень вместе. Сила этих связей определяет угол поворота стержня: не свернувшаяся кровь не передает вращение, рыхлый сгусток лишь частично передает вращение, а прочный сгусток заставляет стержень двигаться синхронно с чашечкой.

Рисунок 1. Принцип работы тромбоэластографа [20].

Таким образом, угол вращения стержня напрямую зависит от прочности сформировавшегося сгустка. Как только сгусток начинает сжиматься или разрушаться (лизис), связи рвутся, взаимодействие между чашечкой и стержнем ослабевает, и передача движения чашечки на стержень уменьшается. Вращательное движение стержня преобразуется из механического в электрический сигнал, который фиксируется с помощью компьютера [1, 2, 19]. По полученной тромбоэластограмме (рис. 2) компьютер автоматически выполняет расчет основных параметров [20].

Время свертывсш! Кинетика

Коагуляционные сгустка факторы

Стабильность сгустка Разрыв сгустка

TEG предлагает визуальное отображение гемостаза пациента

Рисунок 2. Схема тромбоэластограммы [20].

Полученные в ходе исследования результаты обрабатывались с помощью программы Microsoft Exсel. Значения полученных результатов в работе представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней (M ± m). Сравнение независимых выборок проводили с помощью критерия Манна – Уитни. Результаты исследования со значением вероятности допущения альфа-ошибки, равные либо менее 5% (р ≤ 0,05) расценивались как статистически значимые.

Результаты исследования. Классическая тромбоэластография является методом интегральной оценки состояния системы гемостаза. Она позволяет оценивать динамику протекания процессов свертывания крови, измерять эластичность сгустка и его качества, а также активность системы фибринолиза. В данной статье мы приводим предварительные результаты по исследованию системы гемостаза методом тромбоэластографии у здоровых лошадей в возрасте от 1 до 5 лет и у жеребят до 10-дневного возраста. Учитывали такие параметры, как R (min), K (min), Ang (°), MA (mm); при этом достоверной разницы показателей между кобылами и жеребятами мы не обнаружили.

Показатель R ‒ время реакции, тромбоэластографическая константа тромбопластина. Эта величина определяет период свертывания крови и характеризует 1-2 фазу ‒ образование активной протромбиназы и активного тромбина. Так, показатель времени реакции у лошадей составил 13,55±2,11 мин, а у жеребят ‒ 12,77±0,41 мин (рис. 3) .

Рисунок 3. Показатели времени реакции (R) и времени формирования сгустка (К)

Рисунок 4. Показатели скорости полимеризации фибрина (Ang) и максимальной амплитуды (МА)

Показатель К - время формирования сгустка или коагуляции, тромбоэластографическая константа тромбина . Данная величина характеризует 3 фазу свертывания крови, превращение фибриногена в нерастворимый фибрин. Так, у лошадей данный показатель соответствовал 4,6±0,91 мин., а у жеребят ‒ 3,65±0,34 мин.

Показатель Ang ‒ скорость полимеризации фибрина (формирование фибрина и поперечных связей) у взрослых лошадей был ниже по сравнению с жеребятами и составил 46,41±5,89° и 52,14±3,58° соответственно (рис. 4) .

Показатель МА, максимальная амплитуда или максимальная плотность образовавшегося сгустка, у животных обеих групп находился на одном уровне и составил у лошадей 57,28±3,04 мм и у жеребят 57,77±2,59 мм.

Полученные нами данные по оценке тромбоэластограммы у лошадей в целом совпадают с результатами, описанными в литературе [5, 11, 16], за исключением показателя максимальной плотности сгустка (МА). В зарубежной литературе этот показатель у жеребят выше по сравнению с взрослыми лошадьми.

Заключение. Тромбоэластограмма является приемлемым методом оценки коагуляционного потенциала крови у лошадей. В литературе данный метод описывается как надежный для оценки коагуляции, но рекомендуют учитывать возможную изменчивость параметров. В работе представлены опорные интервалы коагуляции у взрослых лошадей и жеребят, но при интерпретации индивидуальных ре- зультатов необходимо учитывать влияние гематокрита, количества тромбоцитов и концентрации фибриногена. Кроме того, необходимы дальнейшие исследования в данной области, включая сравнение тромбоэластограммы и стандартных коагуляционных тестов.