Антимикробная и противоожоговая активность липидной фракции трутовика лекарственного Fomitopsis officinalis (Vill.) Bond. et Sing

Шаталова Татьяна Анатольевна, кандидат фармацевтических наук, преподаватель кафедры технологии лекарств

Огурцов Юрий Александрович, кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры биологии Ушакова Любовь Семеновна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры аналитической химии обладает ранозаживляющей и противоожоговой активностью [3]. Однако в литературе отсутствуют сведения о возможности применения извлечений из плодового тела агарика в качестве лекарственного средства с антимикробной и противоожоговой активностью.

Цель исследования: . получение, изучение химического состава и исследование противоожоговой и антимикробной активности биологически активных соединений липидной фракции трутовика лекарственного.

Материалы и методы исследования. Объектом исследования служило измельченное плодовое тело трутовика лекарственного (Fomi-topsis officinalis Bond. et Sing., cем. Polyporaceae), собранного в Алтайском крае. Липидную фракцию получали после экстракции плодового тела трутовика, измельченного до размера частиц не более 0,5 мм смесью хлороформ-спирт этиловый 96% (1:2) до полного истощения сырья. Полученное извлечение упаривали при температуре 50-60°С до состояния густой массы, высушивали при температуре 100°С до остаточной влажности 5%. Выход сухого извлечения составил 62-64% от массы воздушно-сухого сырья. Выделенное извлечение исследовали на наличие фосфолипидов, тритерпеноидов, каротиноидов и высших жирных кислот методом газожидкостной и тонкослойной хроматографии. Определение жирнокислотного состава масла трутовика проводили методом газожидкостной хроматографии на газовом хроматографе «Цвет 500» с пламенноионизационным детектором. Компоненты идентифицировали по стандартным образцам (Sigma) метиловых эфиров жирных кислот. Количественное определение проводили методом внутренней нормализации после ацетилирования смолистой фракции с метиловым спиртом и аце-тилхлоридом при нагревании с обратным холодильником.

Полученную липидную фракцию растворяли в спирте этиловом 70% в соотношении 1:10 и проводили изучение антимикробной и противоожоговой активности. При изучении антимикробных свойств целевого продукта изучали извлечение из плодового тела трутовика и настойку календулы (препарат сравнения). При исследовании антимикробной активности целевого продукта использовали метод, основанный на способности лекарственных веществ диффундировать в агар, зараженный тест-культурами микроорганизмов, и подавлять рост последних. Определение активности изучаемых извлечений проводили в 3-х чашках Петри одинакового диаметра с плоским дном. В чашки, устанавливаемые горизонтально, наливали по 15 мл расплавленного питательного агара. Слой агара в чашке Петри заливали 1-2 мл взвеси испытуемого микроба в физиологическом растворе. Затем излишек взвеси полностью удаляли, подсушивали поверхность агара в течение 30 минут. Затем сверлом (6 мм диаметром) пробуравливали 6 отверстий («колодцев») на расстоянии 2,5 см от центра и на одинаковом расстоянии друг от друга, «колодцы» заполняли образцами настоек календулы и плодового тела гриба трутовика и растворителем в соответствующей концентрации (контроль). Чашки оставляли при комнатной температуре на 30 минут, после чего их ставили в термостат при температуре 37°С, не переворачивая, строго горизонтально, чтобы получить круглые зоны. Под крышки чашки Петри помещали стерильный фильтр во избежание попадания конденсата на лунки. Зоны угнетения роста микроорганизмов измеряли через 16 часов. Оценка результатов проводилась по диаметру зон задержки роста вокруг «колодца», включая диаметр самого «колодца»:

• •    отсутствие зоны задержки роста – испытуемая культура не чувствительна к данной концентрации препарата;

• •    диаметр зоны задержки роста 10 мм – умеренная чувствительность культуры к данной концентрации препарата;

• •    диаметр зоны задержки роста более 10 мм – высокая чувствительность испытуемой культуры к данной концентрации препарата.

Противоожоговую активность настойки плодового тела гриба трутовика, масла облепихового, настойки календулы и изучали на модели термического ожога кожи спины крыс. Термический ожог кожи спины у белых крыс вызывали контактным высокотемпературным способом с помощью лабораторной пробирки в водой, нагретой до 100°С. Данный способ позволяет получить стандартные по площади (2 см2) и глубине ожоги всей толщи кожи [2, 3]. Время экспозиции пробирки, нагретой до 100ºС, составляло 20 сек. Ожог наносили животным под эфирным наркозом. При соблюдении этих условий у всех подопытных животных ожоги кожи соответствовали III А степени по клинической классификации ожогов. Динамику ожогового повреждения оценивали на 14 сутки по площади раны весовым методом. В качестве лечения на ожоговую поверхность наносили масло облепиховое, настойку календулы (в опытной группе) и извлечение из плодового тела гриба трутовика в группе сравнения. В контрольной группе наносили спирт этиловый 70%. Процедуру проводили ежедневно 1 раз в сутки на протяжении 14 дней.

Результаты и обсуждение . Изучение химического состава липидной фракции агарика позволило идентифицировать пальмитиновую, олеиновую, линолевую, линоленовую и арахидоновую и другие ненасыщенные жирные кислоты. Количество агарициновой кислоты в составе липидной фракции определяли методом внешнего стандарта (Sigma Ol.) с содержанием 96% с концентрацией 34,15 мг/мл в метиловом спирте. Содержание агарициновой кислоты в липидной фракции исследуемого образца трутовика лекарственного составило 14,7%. Методом тонкослойной хроматографии были обнаружены фосфолипиды, тритерпеноиды (эбурикоевая кислота), каротиноиды. Результаты эксперимента по определению антимикробной активности представлены в табл. 1.

Таблица 1. Результаты изучения антимикробного действия извлечения из плодового тела гриба трутовика, настойки календулы

Результаты исследований, представленные в табл. 1, показывают, что извлечение из плодового тела гриба трутовика обладает: - выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных кокков рода Staphylococcus: Staphylococcus aureus (209) 25,0±2,0; Staphylococcus aureus (Type) 21,0±1,0; Staphylococcus epidermidis Wood- 46 22,0±1,0;

• -    выраженным антимикробным действием в отношении грамотрицательных микроорганизмов Shigella sonnei 3d 14,0±2,0;

• -    выраженным антимикробным действием в отношении спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus: Bacillus subtilis L217,0±1,0; Bacillus anthracoides – 1 17,0±1,0;

• -    умеренным антимикробным действием в отношении Salmonella typhimurium - 9,0±1,0 и Escherichia coli - 9,0±1,0 (табл. 1).

Таблица 2 . Влияние настойки календулы и извлечения из плодового тела гриба трутовика на процесс заживления ожоговой раны (14 сутки)

Примечание : Р – по отношению к контролю; Р₁ – по отношению к настойке календулы

Результаты исследования извлечения из плодового тела гриба трутовика на процесс заживления ожоговой раны представлены в табл. 2. Это позволяет сделать вывод о выраженном противоожоговом действии извлечения из плодового тела гриба трутовика, превосходящем действие масла облепихового в 1,7 раза.

Выводы: в результате проведенных исследований было показано, что биологически активные соединения липидной фракции трутовика лекарственного обладают выраженным антимикробным и противоожоговым действием. По результатам эксперимента получен патент РФ на изобретение №2409378 от 27.02.09.