Экспрессия c-erbB-2 (Her2/neu) при раке желудка: клинико-морфологические особенности

Злокачественный фенотип опухоли определяется сочетанием множества молекулярных изменений, накопление которых в процессе опухолевой прогрессии обусловлено нарушением активности и функционирования целого ряда генов и продуктов их экспрессии. С-erbB-2 (HER2/ neu) – представитель семейства гомологичных трансмембранных рецепторов эпидермального фактора роста, обладающих тирозинкиназной активностью. Белок с-erbB-2, не имея собственного лиганда, взаимодействует с другими рецепторами и усиливает функционирование всей системы [3].

Материал и методы

Нами проведено проспективное исследование у 91 больного РЖ после оперативного лечения в клинике ГУЗ «Краевой клинический центр онкологии» г. Хабаровска за период с 1 июля 2007 г. по 30 июня 2009 г. Прослеженность составила 85,7 % больных. У данной группы пациентов оценено влияние уровня экспрессии c-erbB-2 (HER2/neu) на выживаемость.

Распространенность опухоли оценивали согласно принятой 6-й редакции TNM-классификации (UICC, 2002). В исследование включено 3 пациента с 0 (Tis) стадией заболевания, с I – 17, со II – 19, с III – 25, с IV стадией – 26 больных. Один пациент оперирован с рецидивной опухолью. Для оценки влияния уровня экспрессии c-erbB-2 мы объединили пациентов в группы с локализованными формами рака (0, I, II стадия заболевания) – 39 больных и с местнораспространенными и диссеминированными формами опухоли (III, IV стадии) – 51 пациент. Высокую степень гистологической дифференцировки опухоли выявили у 5 пациентов, умеренную – у 22, низкую – у 64.

В качестве вторичных антител и пероксидазного комплекса использовали стандартный набор реагентов LSAB+ Kit или систему Ultra Vision One HRR Polymer (Rabbit, Mouse) (фирма «LabVision», США). Для визуализации реакции применяли раствор диаминобензидина DAB+ (фирма «Dako», Дания). Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера. Контрольный срез оставляли без первой инкубации. Ставили негативный и позитивный контроль.

Оценку реакции в клетках первичных опухолей проводили полуколичественным методом с учетом интенсивности окрашивания и количества антиген-позитивных клеток, которые в совокупности определяли уровень экспрессии белковых маркеров (высокий или низкий). Иммуногистохимическая реакция оценивалась как негативная («-» – нет реакции), слабопозитивная («+» – <10 % окрашенных клеток), умереннопозитивная («++» – >10 % клеток средней интенсивности окраски) и сильнопозитивная («+++» – >10 % клеток высокой интенсивности окраски).

Для дальнейшего сравнительного иммуногистохимического исследования выделяли два основных уровня иммунореактивности: низкий уровень, или редуцированная экспрессия белков (-/+) и высокий уровень, или гиперэкспрессия маркеров (++/+++). Экспрессию белка с-erbB-2 считали повышенной только при интенсивном окрашивании мембран раковых клеток (++/+++).

Статистические параметры рассчитывались в программе «Statistica 6 for Windows». Достоверность различий качественных показателей определялась по непараметрическому критерию χ² (хи-квадрат). Выживаемость рассчитывалась методом по Kaplan-Meier (1958). Достоверность различий выживаемости определялась по logrank тесту.

Результаты и обсуждение

Гиперэкспрессия белка с-еrbB-2 в клетках РЖ отмечалась в 31 (34,1 %) из 91 изученного наблюдения. Сильно выраженная иммунореактивность (+++) наблюдалась в 12 (13,2 %) и умеренно выраженная (++) – в 19 (20,9 %) случаях (рис. 1). Негативный с-erbB-2 статус опухолей больных РЖ определялся в 60 (65,9 %) случаях и выражался в полном отсутствии (-) (36 наблюдений) или слабой мембранной реакции (+) на поверхности опухолевых клеток (24 наблюдения), а также в различной по интенсивности цитоплазматической и мембранноцитоплазматической иммунореактивности. Интенсивное окрашивание цитоплазмы раковых клеток с выраженной мембранноцитоплазматической реакцией наблюдалось в

Таблица 1

Связь экспрессии c-erbB-2 при РЖ с клинико-морфологическими признаками

Признак		Экспрессия c-erbB-2 (Her2/neu)
		Высокая (n=31)	Низкая (n=60)	р*
Возраст (лет)	≥60	14	33	0,504
	<60	17	27
Пол	Муж	15	31	0,940
	Жен	16	29
Глубина инвазии	Tis.T1, T2	3	23	0,009
	T3, T4	28	37
Локализация опухоли	Н/треть	4	22	0,135
	С/треть	18	23
	В/треть	6	11
	Тотально	3	3
	Резец. желудок	0	1
Макроскопический тип	Ранний рак	0	5	0,096
	BI	1	7
	BII	4	14
	BIII	19	23
	BIV	7	11
Размеры опухоли	<4см	7	33	0,008
	>4 см	22	25
Степень дифференцировки	Высокая	1	4	0,781
	Умеренная	8	14
	Низкая	22	42
Стадия	0/I/II	5	34	<0,001
	III/IV	26	25
Метастазы в лимфоузлах	pN+	26	24	<0,001
	pN0	5	36
Отдаленные метастазы	Есть	4	2	0,194
	Нет	27	58

Примечание: * – оценка р с помощью критерия χ²

p<0,001 соответственно). Размеры опухоли более 4 см статистически чаще встречались при гиперэкспрессии c-erbB-2 (p=0,008). В группе больных с гиперэкспрессией c-erbB-2 в клетках РЖ лимфогенные метастазы обнаружены у 83,9 % (26 из 31) больных, а у пациентов с низкими показателями экспрессии белка в опухоли – в 40 % (24 из 60) случаев (р<0,001). Определялась тенденция к увеличению частоты гиперэкспрессии c-erbB-2 до 45,2 % (19 из 42 больных) при BIII (язвенно-инфильтративном) макроскопическом типе опухоли по R. Borrmann (1926). Различия стремятся к своей статистической значимости (р=0,096). Гиперэкспрессия белка c-erbB-2 в опухолях больных РЖ не была статистически связана с полом (р=0,504) и возрастом (р=0,940) больных, локализацией опухоли (р=0,135) и наличием отдаленных метастазов (р=0,194).

В группе больных, у которых выявлена гиперэкспрессия онкобелка в мембранах опухолевых клеток, наблюдалось сокращение сроков без-рецидивной выживаемости (БРВ) через 14 мес после операции: одногодичная БРВ – 71,0 ± 10,3 %, 2-летняя – 56,8 ± 15,1 %, 3-летняя БРВ не достигнута. Однако различия в показателях БРВ были статистически незначимы (χ²=0,154; df=1; р=0,796; log-rank test) (рис. 2). Частота прогрессирования опухолевого заболевания не зависела от уровня экспрессии c-erbB-2 и составляла при гиперэкспрессии 29,2 % (7 из 24), а при редуцированной экспрессии c-erbB-2 – 30,9 % (17 из 55) (р=1,0; критерий χ²).

Повышенное содержание c-erbB-2 в клетках первичной опухоли было связано с сокращением общей выживаемости (ОВ) (рис. 3). При высоких значениях данного маркера в опухолях 2-летняя ОВ составила 47,9 ± 17,4 %, летальный исход заболевания наблюдался в 29,2 % (7 из 27) прослеженных случаев, медиана – 16 мес. При низком уровне экспрессии c-erbB-2 2- и 3-летняя ОВ составила 61,1 ± 9,1 %, умерло 27,3 % (15 из 55) прослеженных больных, медиана ОВ не достигнута (χ²=0; df=1; р=0,999; log-rank test).

Учитывая малое количество пациентов в выборке по стадиям, мы сравнили влияние уровня экспрессии c-erbB-2 на выживаемость в подгруппах пациентов с локализованным (0–II стадии) (n=39) и с местнораспространенными и диссеминированными формами РЖ (III–IV стадии) (n=51). Нами установлена ассоциация между гиперэкспрессией c-erbB-2 и сокращением ОВ и БРВ у больных с местнораспространенными или диссеминированными формами РЖ (р=0,594, р=0,249) (табл. 2). Из-за малой выборки больных с локализованными формами РЖ в сочетании с гиперэкспрессией c-erbB-2 (n=5) мы посчитали, что проводить анализ и делать выводы по выживаемости в данной группе больных преждевременно.

С внедрением иммуногистохимического метода диагностики в повседневную практику клиницисты получили потенциальную возможность оценить индивидуальный прогноз для больного, опираясь на уровень экспрессии

Рис. 2. Безрецидивная выживаемость больных РЖ в зависимости от уровня экспрессии c-erbB-2

Рис. 3. Общая выживаемость больных РЖ в зависимости от уровня экспрессии c-erbB-2

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2011. №1 (43)

Таблица 2

Стадия	Экспрессия c-erbB-2
	Высокая (n=31)	Низкая (n=61)	р*
Общая выживаемость
0/I/II	100 %	71,6 ± 13,7 %	0,324
III/IV	25,6 ± 20,3 %	48,5 ± 12,3 %	0,594
Безрецидивная выживаемость
0/I/II	100 %	75,6 ± 11,6 %	0,317
III/IV	40,4 ± 18,8 %	45,5 ± 10,2 %	0,249

Примечание: * – оценка р с помощью log-rank test.

Показатели 2-летней выживаемости пациентов РЖ в зависимости от уровня экспрессии c-erbB-2 и стадии заболевания

Мы продемонстрировали достоверную взаимосвязь между экспрессией c-erbB-2 и местным распространением опухоли, ее размерами. Опухоли с гиперэкспрессией c-erbB-2 имели более высокую частоту поражения регионарных лимфатических узлов (р<0,001). В нашем исследовании мы выявили ассоциацию между гиперэкспрессией онкобелка c-erbB-2 и сокращением ОВ и БРВ.

Осознание механизмов опухолевой инвазии и метастазирования и возможность определения патологического уровня белков дают возможность для применения таргетных препаратов. Уже длительное время используется Трастузумаб (Герцептин®) при гиперэкспрессии c-erbB-2 у пациентов при раке молочной железы. Добавление к стандартной химиотерапии Трастузумаба (Герцептина®) позволяет значительно продлить жизнь больным РЖ с гиперэкспрессией HER2. Данные международного исследования III фазы ToGA показали, что у пациентов при HER2-положительном распространенном или неоперабельном РЖ, получавших Герцептин, риск смерти снижается на 26 % по сравнению с больными, не получавшими данный препарат. Еще большие преимущества от добавления Герцептина в схему лечения получают пациенты с высоким уровнем экспрессии HER2, у таких больных продолжительность жизни увеличивается в среднем до 16 месяцев [7]. Кроме того, имеются сообщения об успешном применении Герцептина в неоадъювантном режиме [9]. Применение Герцептина в качестве монотерапии или в комбинации с другими противоопухолевыми препаратами, а также режимы введения находятся в стадии исследования [2, 5].

Заключение