Особенности экспрессии провоспалительных цитокинов в ткани тазовых спаек у женщин с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза

Актуальность работы

В структуре гинекологической заболеваемости воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) занимают второе место после миомы матки, поражая каждую четвертую пациентку репродуктивного возраста на планете и приводя к функциональным и структурным изменениям в репродуктивной системе [1, 2]. Многочисленные исследования достоверно доказывают, что ВЗОМТ развивается на фоне нарушенного иммунного равновесия. Трудности ведения таких пациенток связаны с чрезвычайно вариабельной клинической картиной и тяжестью течения заболевания [3, 4, 5]. В большинстве случаев необходима разработка плана долговременного ведения пациенток с целью получения максимального эффекта от проводимого лечения, профилактики рецидива и повторных оперативных вмешательств.

Большинство работ по ВЗОМТ посвящены изучению цитокинов в перитонеальной жидкости, работ по изучению цитокинов в тканях спаек в литературе нет [6, 7, 8].

Цель исследования

Изучить в сравнительном аспекте особенности экспрессии и распределения провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α) в ткани интактной брюшины малого таза и спайках у женщин репродуктивного возраста с ВЗОМТ.

Материалы и методы исследования

Материалом исследования послужили фрагменты операционного материала, а именно участки интактной париетальной брюшины, спайки и их участки, полученные у 68 женщин репродуктивного возраста при проведении оперативной лапароскопии, которые были разделены на две группы. 30 участков ткани интактной париетальной брюшины от пациенток, которым была проведена добровольная хирургическая стерилизация и не имеющих в анамнезе гинекологические заболевания, вошедших в контрольную группу. Основная группа – 38 спаек от пациенток, имеющих в анамнезе хронические ВЗОМТ. Каждая пациентка была подробно информирована об исследовании и предоставляла информированное согласие на участие в нем.

Ткань париетальной брюшины и спайки малого таза с целью исследования получали при проведении лапароскопии по следующей методике: ткань брюшины и спайка малого таза после рассечения и коагуляции вытягивалась через троакар, промывались в физиологическом растворе (0,9% хлорида натрия) с последующей консервацией материала в 10% нейтральном растворе формалина (50 мл) в течение 24 часов. Во время проведения морфологического исследования участки париетальной брюшины и спайки подвергали проводке по стандартной методике с использованием парафиновой заливки и окрашивали гематоксилином и эозином [9, 10]. Иммуногистохимическое исследование проводилось по стандартной методике с использованием парафиновых блоков, реактивов компании Dako и моноклональных антител к ФНО-α (Anti-TNF alphaantibody (ab6671)) и ИЛ-1 (Anti-IL-1alpha antibody [as5] (ab17281)) компании Abcam с автоматической системой окрашивания DakoCytomation [11]. Исследование препаратов в проходящем свете проводили на исследовательском микроскопе OLYMPUS CX 41 с фотокамерой DCM 130. Для оценки результатов иммуногистохимического исследования проводили подсчет количества позитивно-окрашенных клеток в 10 полях зрения на 400-кратном увеличении микроскопа, с учетом интенсивности окрашивания клеток. Интенсивность иммуногистохимичсекой реакции к интерлейкинам оценивали в цитоплазме и мембранных структурах клеток по методу гистологичсекого счета HScore по формуле: S=1a+2b+3c, где a – % слабоокрашен-ных клеток, b – % умеренно окрашенных клеток, c – % сильно окрашенных клеток. 1,2,3 – интенсивность окрашивания, выраженная в баллах. Степень выраженности экспрессии интерлейкинов расценивали: 0 – 10 баллов – отсутствие экспрессии; 11 – 100 баллов – слабая экспрессия; 101 – 200 баллов – умеренная экспрессия; 201 – 300 баллов – выраженная экспрессия.

Группировка, анализ и статистическая обработка цифрового материала, полученного в результате исследований, осуществляли методами вариационного анализа с использованием статистических пакетов Statistica for Windows 6.0. Во время группового сравнения относительных и средних величин использован критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони (эффекты считали достоверными при р < 0,05, корреляционная связь оценивалась по коэффициенту Пирсона).

Результаты исследования

Все пациентки исследуемых групп находились в возрастном диапазоне от 19 до 49 лет, средний возраст в основной группе составил 32,9±0,1 года, в контрольной – 33,8±0,4 года. Средний возраст начала менархе в группах составил 13,2±0,3 года без отсутствия достоверных отли- чий между показателями во всех группах. Достоверной разницы в частоте экстрагенитальной патологии у обследованных пациенток в обеих группах выявлено не было.

При ИГХ исследовании тканей париетальной брюшины у женщин контрольной группы провоспалительные цитокины ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α определялись лишь в единичных клетках, что необходимо расценивать как отрицательный результат, и свидетельствует об отсутствии воспаления в интактной брюшной полости и органах малого таза у этих женщин. (Рис.1, Рис. 2)

Рис. 1. Единичные гранулы позитивно окрашенного материала (ИЛ-1) в мезотелиальных клетках интактной брюшины. ИГХ. Увел. 400х

Рис. 2. Единичные ИЛ-6 слабоокрашенные клетки в интактной брюшине. ИГХ. Увел. 400х

Отмечена слабовыраженная экспрессия ФНО-α, составлявшая 35,0±0,2 балла. Позитивное окрашивание выявлялось, прежде всего, в цитоплазме мезотелиоцитов, покрывающих спайку, реже в лимфоидно-макрофагальных скоплениях (Рис. 3).

Рис. 3. Слабо выраженная экспрессия ФНО-α в ткани спайки воспалительного характера. ИГХ. Ув. 100х

ИЛ-1 также выявлялся в скудных количествах, преимущественно в цитоплазме мезотелиальных клеток и составлял 17,0±0,1 балла (Рис. 4).

Рис. 4. Слабо выраженная экспрессия ИЛ-1 в цитоплазме фибробластов на фоне расстройства кровообращения в спайке воспалительного генеза. ИГХ. Увел. 400х

Слабая экспрессия наблюдалась и в отношении ИЛ-2, составлявшая 19,0±0,5 баллов. Позитивное окрашивание выявлялось, прежде всего, в цитоплазме периваскулярно расположенных лимфоцитов и рыхлой соединительной ткани (Рис. 5).

Рис. 5. Единичные периваскулярно расположенные ИЛ-2 позитивные клетки в послеоперационной спайке. ИГХ. Ув. 400х

ИГХ ткани спаек у женщин, имевших в анамнезе воспалительные заболевания органов малого таза, характеризовались слабой, реже умеренной, экспрессией ИЛ-6, составлявшей 65,0±0,3 балла. Позитивное окрашивание выявлялось, прежде всего, в цитоплазме мезотелиоцитов, покрывающих спайку и стенках артерий. Слабая и очаговая умеренная экспрессия ИЛ-6 определялась в полях рыхлой соединительной ткани, в цитоплазме фибробластов (Рис. 6).

при хронических ВЗОМТ свидетельствует об угнетении экссудативной фазы воспалительного процесса и активации процессов ремоделирования фиброзной ткани с усилением коллагенообразования и формированием плотных грубоволокнистых сращений.

Определение экспрессии и исследование провоспали-тельных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α) в тканях спаек у пациенток репродуктивного возраста с ВЗОМТ является диагностически значимым и позволяет спрогнозировать их образование и рецидив после хирургического лечения.