Результаты скрининга недекларированного добавления синтетических ингибиторов фосфодиэстеразы-5 в БАД к пище растительного происхождения

БАД к пище растительного происхождения для увеличения потенции, широко используемые во всем мире и считающиеся безопасными, являются наиболее частыми объектами фальсификации не-декларированными лекарственными субстанциями с целью повышения заявленной эффективности продукта. Они применяются для улучшения потенции при общем ослаблении организма, но неэффективны при эректильной дисфункции (ЭД), вызванной заболеваниями мочеполовой системы. Обычно в состав БАД к пище для увеличения потенции входят афродизиаки (экстракты горянки, женьшеня, лимонника, элеутерококка, йохимбе, дамианы и др.), простатопротекторы (экстракты сабельника, семян тыквы, пальмы сабаль, диоскореи, солодки, якорцев

и др.), антиоксиданты (коэнзим Q 10 , экстракты гинкго двулопастного, томата, асаи и др.), витамины (особенно А, Е и РР) и микроэлементы (селен, цинк и др.). В то же время проведенные исследования показали, что наряду с декларированными растительными компонентами в БАД к пище для увеличения потенции обнаруживаются синтетические ингибиторы фосфодиэстеразы-5 (иФДЭ-5).

Данная группа препаратов представляет собой селективные ингибиторы ц-ГМФ-специфической фосфодиэстеразы 5-го типа (ФДЭ-5), которая метаболизирует ц-ГМФ в 5'-ГМФ в гладкомышечных клетках кровеносных сосудов, снабжающих пещеристые тела пениса (и стенки артерий в легких). Блокирование ФДЭ-5 сопровождается накоплением

Перова Ирина Борисовна – кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник лаборатории метаболомного и протеомного анализа (e-mail: ; тел.: 8 (495) 698-53-92; ORCID: .

Эллер Константин Исаакович – доктор химических наук, профессор, заведующий лабораторией метаболомного и протеомного анализа (e-mail: ; тел.: 8 (495) 698-54-07; ORCID: .

Тумольская Елена Викторовна – младший научный сотрудник лаборатории метаболомного и протеомного анализа (e-mail: ; тел.: 8 (495) 698-53-92; ORCID: .

ц-ГМФ, усилением эрекции в присутствии полового возбуждения и увеличением ее продолжительности. Таким образом, иФДЭ-5 используются для лечения ЭД, а также легочной гипертензии. На сегодняшний день в РФ зарегистрировано четыре лекарственных препарата (ЛП) группы иФДЭ-5: силденафил (Виагра®, Pfizer), тадалафил (Сиалис®, Elli Lilly), варде-нафил (Левитра®, Bayer) и уденафил (Зидена®, Dong-A Pharmaceutical Co. Ltd)1 . Последний также зарегистрирован в Южной Корее и Малайзии [1]. В США и на территории Европейского союза кроме тадалафила, варденафила и силденафила разрешен для применения в медицинской практике аванафил (Stendra®, Vivus; Spedra®, Mitsubishi Tanabe Pharma) [2]. Другим представителем ЛП группы иФДЭ-5 в Южной Корее является мироденафил (Mvix®, SK Chemicals Life Science) [1]. В Бразилии для лечения ЭД применяют лоденафил карбонат (Helleva®, Cristália Produtos Quími‐cose Farmacêuticos) [3]. Химические структуры вышеперечисленных ЛП группы иФДЭ-5 изображены на рис. 1.

В ряде случаев фальсификации в БАД к пище были найдены структурные аналоги ЛП иФДЭ-5, которые не зарегистрированы в качестве фармацевтических субстанций, но оказывают то же фармакологическое действие. Начиная с 2003 г. появляются работы, в которых методами высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектором (ДМД) и масс-спектрометрическими детекторами высокого и низкого разрешения, а также ИК-спектроскопии и спектроскорпии ЯМР были открыты и идентифицированы различные аналоги силденафила, тадалафила и варденафила [4–32]. Таким образом, к 2018 г. в БАД для увеличения потенции было обнаружено порядка 80 синтети-

ческих иФДЭ-5, среди которых преобладают аналоги силденафила [33].

Нелегальное включение в состав БАД к пище синтетических субстанций представляет собой значительную угрозу для здоровья потребителей. В то время как для разрешенных для применения в медицинской практике иФДЭ-5 доступна информация о токсичности, противопоказаниях, побочных эффектах, максимальной разовой/суточной дозе, для большинства аналогов эта информация отсутствует. Противопоказаниями к приему иФДЭ-5 являются гиперчувствительность к этим препаратам и одновременный прием нитратов и других донаторов оксида азота. Меры предосторожности и ограничения в применении этой группы лекарств касаются мужчин с сердечно-сосудистыми заболеваниями, диабетом, мужчин старше 71 года, с наследственными дегенеративными заболеваниями сетчатки глаза, предрасположенностью к приапизму. Кроме того, качество, эффективность и безопасность разрешенных для применения в медицинской практике иФДЭ-5 контролируются органами здравоохранения, в то время как у нелегально произведенных субстанций – никогда. Таким образом, потребление недекларированных субстанций в составе БАД к пище может привести к возникновению серьезных побочных эффектов, особенно в случае с незарегистрированными в качестве фармацевтических субстанций аналогами, безопасность которых никогда не изучалась, и чье взаимодействие с лекарствами может быть непредсказуемым или даже смертельным.

Целью исследования является выявление содержания недекларированных синтетических иФДЭ-5БАД к пище для мужчин.

Уденафил

Тадалафил

Аванафил

Варденафил

Силденафил

Мироденафил

Лоденафил карбонат

Рис. 1. Химические структуры иФДЭ-5

В целях защиты здоровья населения и обеспечения качества и безопасности БАД к пище для мужчин в 2015 г. Роспотребнадзор начал проведение исследования возможных случаев фальсификации синтетическими иФДЭ-5. Сложность аналитических задач, стоящих перед испытательными лабораториями при контроле БАД к пище для мужчин, обусловлена большим числом синтетических иФДЭ-5 (известно около 100 соединений, обнаружено в БАД к пище порядка 80), доступностью стандартных субстанций, изобретательностью недобросовестных производителей (добавление экзотических аналогов, смеси аналогов, включение иФДЭ-5 в оболочку капсулы), разнообразием матриксов БАД к пище. В связи с этим возникла необходимость разработки новой методологии, позволяющей обнаружить синтетические иФДЭ-5 в многокомпонентном матриксе БАД к пище, что является основной задачей исследования.

Материалы и методы . Исследования были проведены с помощью системы жидкостной хроматографии Agilent 1100, оснащенной дегазатором, бинарным насосом, термостатом колонок, термостатируемым автосамплером, диодно-матричным спектрофотометрическим детектором (ДМД) и времяпролетным масс-спектрометрическим детектором Agilent 6210 LC/MS-TOF (Agilent Technologies, США), а также системы жидкостной хроматографии Ultimate 3000, оснащенной дегазатором, двумя трехканальными насосами, термостатом колонок, термостатируемым автосамплером, ДМД и тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором TSQ Endura (Thermo Fisher Scientific, США).

Объекты исследования: БАДы к пище для мужчин, в том числе для увеличения потенции, отобранные Роспотребнадзором в различных регионах России. Всего было проанализировано 175 образцов.

По заданию Роспотребнадзора нами была предложена и метрологически аттестована методика измерений массовой доли синтетических ингибиторов фосфодиэстеразы-5 (тадалафила, варденафила и силденафила) в биологически активных добавках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым и масс-спектрометрическим детектированием, которая с 2016 г. имеет статус методических указаний МУК 4.1.3331-162.

Результаты и их обсуждение. Проведенные исследования показали, что 36 % БАД к пище для мужчин содержат недекларированные синтетические иФДЭ-5. Следует отметить, что использованная нами утвержденная методика измерений массовой доли

• ■    Тадалафил

• ■    Силденафил

• ■    Тадалафил + силденафил

• ■    Тадалафил + варденафил

• ■    Тадалафил + силденафил + аналоги иФДЭ-5

• ■    Тадалафил + аналоги иФДЭ-5

• ■    Аналоги иФДЭ-5

Рис. 2. Распределение случаев (%) фальсификации БАД к пище синтетическими иФДЭ-5

синтетических иФДЭ-5 позволила определить присутствие в БАД к пище не только тадалафила, варде-нафила и силденафила, но и ряда аналогов ЛП группы иФДЭ-5 с различными химическими структурами.

Варианты фальсификации БАД синтетическими иФДЭ-5 представлены на рис. 2.

Как видно из рис. 2, основными недеклариро-ваными иФДЭ-5 в БАД к пище были тадалафил и силденафил (42,9 и 28,6 % всех случаев фальсификации соответственно). Типичные хроматограммы извлечений из БАД к пище, содержащих тадала-фил, представлены на рис. 3.

Реже встречались комбинации тадалафила и силденафила (9,5 %), тадалафила и других синтетических иФДЭ-5 (6,3 %), а также тадалафила и варденафила (4,8 %) и тадалафила, силденафила и других синтетических иФДЭ-5 (4,8 %). Наименее распространены случаи фальсификации структурными аналогами ЛП группы иФДЭ-5, которые составляют всего 3,2 % всех случаев фальсификации.

Количество недекларированных синтетических иФДЭ-5 в БАД к пище варьировалось в широких пределах: от следовых концентраций (0,004–1,0 мг/капс. (таблетки, пилюли и т.д.)), которые не оказывают фармакологического действия, до концентраций, сопоставимых с рекомендуемыми суточными дозами для соответствующих ЛП или даже превышающих их (табл. 1).

Среди структурных аналогов ЛП группы иФДЭ-5, обнаруженных в БАД к пище, идентифицированы производные силденафила (гомосилденафил, тиосилденафил, гидроксигомотиосилденафил), тадалафила (аминотадалафил) и ацетилденафила – метоксиаце-тилденафил.

Рис. 3. Хроматограммы извлечения из БАД к пище, содержащего тадалафил: а – полный ионный ток (TIC); б – хроматограмма выделенного иона (EIC) тадалафила с m/z 390; в – хроматограмма извлечения из БАД к пище при λ = 292 нм; г – УФ-спектр тадалафила в БАД к пище

Таблица 1

Рекомендуемые суточные дозы тадалафила, силденафила, варденафила и их количества, обнаруженные в исследованных БАД к пище

МНН ЛП группы иФДЭ-5	Рекомендуемая суточная доза, мг	Найдено в БАД к пище, мг/капс. (табл., пил.)
Тадалафил	5 – 20	0,004 – 26,7
Силденафил	25 – 100	0,001 – 115,8
Варденафил	5 – 20	0,1 – 14,0

Таблица 2

Структурные формулы, УФ-максимумы поглощения, молекулярные массы и массы протонированных ионов [M + H]+ аналогов ЛП группы иФДЭ-5, обнаруженных в БАД к пище

Наименование аналога иФДЭ-5	Структурная формула	λmax, нм	М, г/моль	[M+H]+
Гомосилденафил	X-vOQ1	294	488,6	489
Тиосилденафил	S    ри 1          / 3 Y jfjYN ™3	295, 355	490,6	491
Гидроксигомотиосилденафил	н     CH3 ^^CJOYn HO^^"      \/^o      \ ^CH3	295, 355	520,6	521

Окончание табл. 2

Аминотадалафил /=\    н ? ми v^v^' 'n'NHz G 270 плечо, 284, 292 390,39 391 Метоксиацетил-денафил /\n/ '^Г^$%/^'Ч J- V kJLo^. 230, 280 496,6 497 присутствие не только тадалафила, варденафила и силденафила, но и ряда структурных аналогов ЛП группы иФДЭ-5. Полученные данные используются при проведении государственной регистрации БАД к пище. В частности, в процессе санитарно-эпидемиологической экспертизы БАД к пище для мужчин обязательно проводится проверка наличия недекларированных синтетических иФДЭ-5. Резуль-

таты исследований могут рассматриваться как информационная база для оценки потенциальных рисков здоровью.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.