Совершенствование методов стандартизации корней солодки

кислоты в корнях солодки и обоснована целесообразность использования в методиках анализа ГСО глицирама [5].

Цель работы: исследования по разработке методики количественного определения суммы флавоноидов в корнях солодки.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

• 1.    Изучение литературных данных по стандартизации сырья солодки и ее терапевтическому действию.

• 2.    Оптимизация концентрации этилового спирта для извлечения веществ из сырья.

• 3.    Возможность использования ГСО (государственного стандартного образца) для тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии.

К биологически активным соединениям корней солодки, относятся сапонины (глицир-ризиновая кислота), флавоноиды (ликвиритин, изоликвиритин, ликуразид) и полисахариды [3]. Действующие вещества, находящиеся в корнях солодки (глицирризиновая кислота, ли-куразид и т.д.), имеют широкий спектр терапевтического действия [1].

Глицирризиновая кислота

Глицирам

Флавоноиды (халконы) корней солодки

Ликуразид

Корни солодки обладают высокой противовоспалительной активностью, не уступающей антифлогистическому действию глюкокортикоидов и бутадиона, а в ряде случаев дают и превосходящей эффект. Препараты глицирризиновой кислоты угнетают как экссудативную, так и пролиферативную фазы воспалительного процесса. Механизм противовоспалительного действия солодки связан со стимулирующим влиянием гли-цирризиновой кислоты на кору надпочечников. Галеновые формы корня солодки и препарат «Глицирам» применяют при заболеваниях, связанных с гипофункцией надпочечников, при Аддисоновой болезни, при системной красной волчанке, пузырчатке, хронических кожных заболеваниях, аллергических заболеваниях; у больных длительно принимающих стероиды. При экземе, нейродермитах и аллергических дерматитах местное лечение сочетают с приемом внутрь глици-рама в таблетках по 0,05 г 2-3 раза в сутки. Солодка и препараты из нее важны для практической медицины как антиаллергические средства, так как в отличие от кортизона не нарушают физиологической защиты [3,4]. Солодка входит во многие лекарственные сборы, применяемые при желудочно-кишечных, легочных заболеваниях, патологии почек, пиелонефритах, циститах, мочекаменной болезни.

Рис. 1. ТСХ-анализ сырья и препаратов солодки. Условия хроматографирования: «Силуфол УФ 254» (система растворителей: хлороформ-метанол-вода, 26:14:3):

1 - водно-спиртовое извлечение солодки голой 70% этиловый спирт; 2 - глицирам; 3 - глицирризиновая кислота; 4 - ликуразид

Материалы и методы. Для извлечения веществ из корней солодки использовали 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 96% этиловый спирт. Анализ осуществляли с использованием ТСХ (рис. 1) и спектрофотометрии. В качестве ГСО использовали ликуразид.

Методика анализа . Около 1,0 г корней солодки (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% спирта, взвешивают на тарирных весах и извлекают на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Затем извлечение охлаждают в течение 30 мин, доводят массу колбы с содержимым до исходной и извлечение фильтруют. 1 мл извлечения вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем 96% этиловым спиртом до метки (раствор сравнения). 1 мл извлечения вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% спиртового раствора хлорида алюминия и доводят объем раствора до метки объем 96% этиловым спиртом (испытуемый раствор). Измеряют оптическую плотность растворов на спектрофотометре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения раствор извлечения без добавлений хлорида алюминия.

Результаты и их обсуждение. Изучение электронных спектров раствора извлечения из корней солодки (рис. 2) показало, что при добавлении алюминия хлорида наблюдается ба-тохромный сдвиг длинноволновой полосы поглощения в область 420 нм. Аналогичный эффект наблюдается и в случае раствора ликура-зида (рис. 3), что свидетельствует о возможности использования дифференциальной спектрофотометрии как метода определения суммы флавоноидов, а ликуразида – в качестве Государственного стандартного образца.

Рис. 3. Электронный спектр раствора ликуразида: 1 – исходный раствор; 2 – раствор с добавлением алюминия хлорида

Варьирование концентраций этилового спирта позволило определить, что наиболее полно извлекаются флавоноиды из корней солодки с использованием 70% этилового спирта (табл. 1).

Рис. 2. Электронный спектр раствора извлечения из корней солодки: 1 – исходный раствор; 2 – раствор с добавлением алюминия хлорида

Приготовление раствора ГСО ликурази-да . Около 0,02 г (точная навеска) ликуразида помещают в мерную колбу объемом 50 мл растворяют в 30 мл 96% этилового спирта и доводят объем раствора 96% этиловым спиртом до метки (раствор А). 2 мл раствора А помещают в мерную колбу объемом 25 мл и доводят объем 96% этиловым спиртом до метки (раствор сравнения). 2 мл раствора А помещают в мерную колбу объемом 25 мл, добавляют 2 мл 2% раствора хлорида алюминия и доводят объем до метки 96% этиловым спиртом (испытуемый раствор). Измеряют оптическую плотность растворов на спектрофотометре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения раствор ликуразида без добавления хлорида алюминия.

Таблица 1. Оценка полноты экстракции флавоноидов из корней солодки в зависимости от концентрации этилового спирта

Сырье (г. Уральск, 2008 г.)	Концентрация этилового спирта	Содержание суммы флавоноидов в перерасчете на ликуразид (%)
корни солодки	40%	1,05 + 0,02
корни солодки	50%	1,64 + 0,02
корни солодки	60%	1,78 + 0,03
корни солодки	70%	1,94 + 0,03
корни солодки	80%	1,68 + 0,02
корни солодки	96%	1,63 + 0,01

Выводы: в результате проведенных исследований разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в корнях солодки с использованием дифференциальной спектрофотометрии. Обоснована целесообразность использования в разработанной методике ГСО ликуразида, что расширяет возможности стандартизации сырья и препаратов данного растения.