Влияние комплексного растительного средства монгольской медицины «Норов-7» на течение экспериментального гепатита

В последние десятилетия наблюдается повышение интереса к лекарственным средствам традиционной медицины, используемым для лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения [1; 6]. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) призывает активно изучать растительные средства традиционной медицины для ограничения побочных реакций химиопрепаратов, использования их на восстановительном этапе лечения больных, профилактики болезней. С увеличением среди населения заболеваемости гепатитами [2; 8], а также в рамках им-портозамещения [5] актуальным представляется исследование популярных в монгольской традиции врачевания болезней комплексных растительных средств, в частности, «Норов-7». Протокол исследований согласован и одобрен этической комиссией ИОЭБ СО РАН (протокол № 18 от 17.10.2024). Работа выполнена в рамках реализации задач по проекту № 121030100227-7.

Задачей проведенного исследования явилось определение фармакотерапевти-ческой эффективности «Норов-7» при экспериментальном гепатите.

Материал и методы исследования

Эксперименты проводились в осенне-зимний период 2023/24 г. на 268 животных. Экспериментальный гепатит у крыс-самцов линии Wistar с исходной массой 190–200 г воспроизводили введением под кожу четыреххлористого углерода (тетрахлорметан, CCL 4 ); ГОСТ 20288–74, ЗАО РС) в виде 50%-ного (v/v) масляного (рафинированное подсолнечное масло) раствора из расчета 0,4 мл на 100 г массы 1 раз в сутки в течение 4 дней подряд¹ [3]. С лечебнопрофилактической целью крысам опытной группы I вводили per os экстракт «Норов-7 с первого дня опыта в форме водного раствора в экспериментальнотерапевтической дозе 100 мг/кг 1 раз в сутки в течение 10 дней, а крысам опытной группы II ― препарат сравнения полифитохол (РФ № 0013001/02-2022) в изоэффективной дозе 100 мг/кг 1 раз в сутки в течение 10 дней. Контрольной группе животных вводили в желудок очищенную воду в эквиобъемном количестве в аналогичном режиме, а интактные крысы служили дополнительным контролем. Исследования проведены на 7, 14 и 21-е сутки эксперимента. Оценивали влияние экстракта «Норов-7» на выраженность окислительного стресса с характеристикой основных критериев ― содержание малонового диальдегида (МДА) и активности каталазы, а также исследовали функциональное состояние печени с определением характерных признаков состояния органа ― активности аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрасферазы (АСТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови животных. Наряду с этим об эффективности указанного экстракта при повреждении печени судили по скорости секреции и объему выделенной желчи и содержанию в желчи основных ингредиентов ― билирубина, холестерина и желчных кислот² [8]. На 21-е сутки опыта кусочки печени крыс фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина с последующей спиртовой проводкой и заливкой в парафиновые блоки. Срезы печени окрашивали гематоксилином и эозином³ [3; 8].

Статистическую обработку данных проводили с использованием Microsoft Office Excel 2007, Statistica 10 с вычислением средней (М) и ошибки средней величины (м). Поскольку данные были близки нормальному распределению, применяли t-критерий Стьюдента и значимыми принимали различия при р<0,05. На каждый срок наблюдения было не менее 8 крыс в группах.

Экстракт «Норов-7» получен водно-спиртовой (40%-ный этанол) экстракцией из корней девясила высокого, корневищ имбиря лекарственного, софоры желтоватой, древесины бузины сибирской, корневищ кровохлебки, плодов боярышника кроваво-красного и яблони ягодной в соотношениях 2:1: 2:4: 2:2:2. В полученном экстракте содержатся флавоноиды, антоцианы, дубильные вещества, фенокарбоновые кислоты, сесквитерпеновые лактоны, аминокислоты, сахара и другие соединения1.

Результаты исследований и их обсуждение

Острую токсичность экстракта «Норов-7» определяли согласно «Руководству по проведению доклинических исследований лекарственных средств»² на крысах-самцах массой 190–200 г при его внутрибрюшинном введении животным. Dl 50 рассчитывали по Керберу с определением класса токсичности. В ходе исследований установлено, что Dl 50 экстракта «Норов-7» соответствует 3470±212 мг/кг при внутрибрюшинном введении крысам-самцам, что позволяет отнести его к группе практически нетоксичных веществ по действующей классификации.

Предварительными исследованиями определены экспериментально-терапевтические дозы ― 30–500 мг/кг при внутрижелудочном введении животным. При этом дозы свыше 100 мг/кг значимых преимуществ не имели. В связи с этим в данной работе использовали дозу, равную 100 мг/кг (0,1 г/кг), как достаточно эффективную при оценке действия указанного экстракта при введении крысам в желудок. В таблице 1 приведены сведения о влиянии данного экстракта на перекисное окисление липидов мембран клеток печени и антиоксидантный статус организма при повреждении печени тетрахлорметаном. Из представленных в таблице 1 данных следует, что указанный экстракт в использованной дозе подавляет пероксидацию липидов с мобилизацией эндогенной антиоксидантной системы, особенно на 7-е и 14-е сутки наблюдения. На 21-е сутки опыта содержание малонового диальдегида было высоким, а активность каталазы практически стабилизировалась и оставалась на уровне показателей в группе интактных крыс. Благодаря значительному содержанию в экстракте веществ фенольной природы, очевидно, подавляется окислительный стресс, что согласуется с данными [4; 7]. С ограничением пероксидации липидов и стабилизацией мембранных образований клеток печени связано повышение функциональной активности гепатобилиарной системы.

Таблица 1

Влияние экстракта «Норов-7» на перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы организма при экспериментальном гепатите у крыс-самцов линии Wistar

Показатели окислительного стресса	Группы животных
	Интактная	Контрольная	Опытная I	Опытная II
на 7-е сутки
МДА, мкмоль/л Каталаза, мкат/л	4,3 ± 0,2 102,5 ± 3,9	4,9 ± 0,4 51,6 ± 4,6	5,2 ± 0,2* 80,3 ± 4,3*	5,0 ± 0,3* 76,9 ± 5.0*
на 14-е сутки
МДА, мкмоль/л Каталаза, мкат/л	4,5 ± 0,2 100,3 ± 6,1	7.3 ± 02 69,0 ± 3,1	5,1 ± 0,3 78,5 ± 3,2	5,9 ± 0,2 81,6 ± 4,5
на 21-е сутки
МДА, мкмоль/л Каталаза, мкат/л	4,3 ± 01 98,2 ± 6,5	5,2 ± 0,3 88,1 ± 3,9	3,8 ± 0,2 90,3 ± 4,3	4,0 ± 0,3 89,5 ± 5,1

Примечание: * означает здесь и далее, что разница по сравнению с контролем значима при P<0,05.

Из данных, приведенных в таблице 2, следует, что экстракт «Норов-7» способствует снижению уровней активности маркерных ферментов синдрома цитолиза, начиная с ранних сроков опыта. В частности, снижение уровня активности АлТ по сравнению с данными у крыс контрольной группы составило 29, 36 и 25,5%, а АсТ ― на 18, 29 и 26% соответственно на исследуемые сроки эксперимента, что также свидетельствует о мембраностабилизирующем свойстве данного экстракта. Экстракт «Норов-7» также ограничивал развитие холестаза, о чем свидетельствовало снижение активности щелочной фосфатазы, наиболее выраженное на 14-е сутки опыта (на 30%).

Таблица 2

Влияние экстракта «Норов-7» на маркеры цитолиза и холестаза при экспериментальном гепатите у белых крыс

Показатели	Группы животных
	Интактная	Контрольная	Опытная I	Опытная II
на 7-е сутки
АсТ, мкмоль/мл	146,3 ± 9,6	330,0 ± 21,6	270,2 ± 16.1	258.1 ± 14,4*
АлТ, мкмоль/мл	129,8 ± 10,2	319,4 23,2	226,3 ± 11,8*	232.4 ± 19.0*
ЩФ, ед./л	282,4 ± 11,4	517,1 ± 26,3	425,6 ± 17,3*	404,2 ± 11,6*
на 14-е сутки
АсТ, мкмоль/мл	146,3 ± 9,6	278,7 ±20,4	196,8 ± 14,0*	217,0 ± 12,3*
АлТ, мкмоль/мл	129,8 ± 10,2	296,3 ± 17,3	189,2 ± 15,9*	168,9 ± 13,4*
ЩФ, ед./л	282,4 ± 11,4	538,6 ± 31,1	374,3 ± 24,6*	318,4 ± 17,1*
на 21-е сутки
АсТ, мкмоль/мл	146,3 ± 9,6	219.3 ± 18,7	154,0 ± 11,6*	137,8 ± 12,9*
АлТ, мкмоль/мл	129,8 ± 10,2	171,0 ± 11,4	126,8 ± 8,7*	119,6 ± 9,3*
ЩФ, ед./л	282,4 ± 11,4	330,1 ± 18,2	259,8 ± 13,5*	234,7 ± 0,4*

Из данных, приведенных в таблицах 3–4, следует, что повреждение печени тетрахлоридом сопровождается угнетением желчеобразовательной и желчевыделительной функций печени. Курсовое введение животным экстракта «Норов-7» существенно ускоряет холерез. Во все сроки опыта скорость секреции желчи превышала таковую у крыс контрольной группы в среднем на 27–40% с повышением общего количества выделенной желчи. Так как холестаз сопровождается изменениями качества желчи, определяли содержание основных ингредиентов в желчи. Начиная с ранних сроков наблюдений экстракт «Норов-7» стимулировал синтез и выделение холатов, что предотвращало развитие холестатического синдрома. Содержание суммарных желчных кислот в желчи превышало данные крыс контрольной группы на 25%, 28% и 21% соответственно на 7, 14 и 21-е сутки опыта. Экстракт также способствовал секреции билирубина и экскреции холестерина в секретируемой желчи. При этом указанный экстракт в незначительной степени уступал референтному препарату полифитохол.

Таблица 3

Влияние экстракта «Норов-7» на скорость секреции желчи у белых крыс с экспериментальным гепатитом

Группы животных	Скорость секреции желчи, мг/мин на 100 г массы
	1 ч            \	2 ч         \	3 ч	\      4 ч
	7-й день
Интактая	6,5 ± 0,3	6,4 ± 0,3	6,2 ± 0,3	5,9 ± 0,3
Контрольная	4,7 ± 0,3	4,4 ± 0,2	3,9 ± 0,3	3,6 ± 0.3
Опытная I	5,8 ± 0,1*	5,6 ± 0,3*	5,1 ± 0,2*	4,8 ± 0,3*
Опытная II	5,9 ± 0,2*	6,0 ± 0,2*	5,6 ± 0,5*	5,0 ± 0,4*
	14-й день
Контрольная	4,5 ± 0,4	4,2 ± 0,3	4,0 ± 0,4	3,5 ± 0,2
Опытная I	6,0 ± 0,5	5,6 ± 0,3*	5,6 ± 0,4*	5,0 ± 0,5*
Опытная II	6,2 ± 0,4*	5,8 ± 0,3*	5,4 ± 0,2 *	4,9 ± 0,4*
	21-й день
Контрольная	4,9 ± 0,4	4,7 ± 0,2	4,2 ± 0,3	3,8 ± 0,3
Опытная I	6,2 ± 0,1*	6,2 ± 0,3*	5,9 ± 0,4*	5,3 ± 0,3*
Опытная II	6,4 ± 0,4*	6,5 ± 0,3*	5,7 ± 0,5*	5,4 ± 0,3*

Таблица 4

Влияние экстракта «Норов-7» на общее количество и биохимический состав желчи у белых крыс с экспериментальным гепатитом

Группы животных	Общее кол-во желчи за 1–4 ч опыта, мг/100г	Желчные кислоты, мг %	Билирубин, мг %	Холестерин, мг %
7-й день
Интактная	1500 ± 42,3	1276,5	39,0	61,3
Контрольная	996 ± 32	928,6 1162,7	29,0	48,0
Опытная I	1278 ± 29,4	1183,2	33,0	51,5
Опытная II	1350 ± 57,8*		34,0	56,9

	14-й день
Контрольная	972 ± 39,3	879,4	28,0	46,1
Опытная I	1332 ± 66,2*	1132,7	35,0	55,3
Опытная II	1350 ± 44,6*	1302,6	36,0	58,7
	21-й день
Контрольная	1056 ± 44,5	986,5	26,0	42,7
Опытная I	1410 ± 31,7*	1198,5	34,0	56,4
Опытная II	1440 ± 30,6*	1239,7	35,	60,8

Патоморфологические исследования показали, что у животных контрольной группы наблюдались выраженные гемодинамические, дистрофические и некротические изменения гепатоцитов. Клеточная инфильтрация вокруг желчных протоков с застоем желчи свидетельствовала о выраженном синдроме холестаза. У животных контрольной группы и на 21-е сутки опыта сохранялись клеточная и жировая инфильтрации печени.

Курсовое введение опытной группе животных экстракта «Норов-7» в указанной дозе способствовало нормализации структуры печени, наблюдалась мелкокапельная жировая дистрофия гепатоцитов по периферии долек. Наличие гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов свидетельствовало об активации регенераторных процессов в печени животных. У опытных I и II животных нормализовались кровоснабжение печени, расположение балочных структур долек. Вокруг сосудов в паренхиме печени обнаруживали слабо выраженную клеточную инфильтрацию. Содержание гликогена было значительно выше, чем показатель у контрольных животных, и располагалось равномерно. Высокая активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) по сравнению с таковой у крыс контрольной группы также свидетельствует о репаративных процессах в печени.

Выводы

• 1.    Экстракт сухой «Норов-7» в экспериментально-терапевтической дозе проявляет гепатопротективное действие при экспериментальном гепатите.

• 2.    Указанный экстракт подавляет окислительный стресс, ингибируя перекисное окисление липидов и активируя антиоксидантную систему организма.

• 3.    Введение данного экстракта животным с повреждением печени сопровождается ограничением дистрофических, некротических процессов в печени.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о выраженной фармакотерапевтической эффективности экстракта «Норов-7» при остром токсическом повреждении печени крыс, вызванном СС14. Курсовое введение данного экстракта в указанной дозе способствует ингибированию процессов ПОЛ, вызванных СС14, и стабилизации мембран гепатоцитов. Одним из важнейших молекулярно-клеточных механизмов в действии исследуемого экстракта является его антиоксидантная активность, что обусловливает его мембраностабилизирующее действие. Экстракт, снижая проницаемость мембран гепатоцитов, препятствует развитию цитолиза, а также холестаза, так как изменение электрохимического потенциала мембраны при интоксикации СС14, вызывающее нарушение транспорта желчных кислот, приводит к развитию опосредованного цитолизом холестаза. Указанное средство, вероятно, повышая функциональную активность микросомальной ферментной системы (МФС), способствует нормализации метаболизма холестерина и желчных кислот и предотвращает развитие вторичных некрозов гепатоцитов. Холатостимулирующее влияние экстракта, вероятно, связано не только с улучшением синтетической функции печени, но и с влиянием на энтерогепатическую циркуляцию желчных кислот. Фармакотера-певтическая эффективность данного лекарственного средства при экспериментальном гепатите обусловлена наличием и синергизмом в действии содержащихся в нем биологически активных веществ, которые представлены флавоноидами, антоцианами, дубильными веществами, фенолкарбоновыми кислотами, сесквитерпеновыми лактонами, кумаринами, витамином С, аминокислотами, алкалоидами, свободными сахарами и полисахаридами [6]. В целом многокомпонентый состав исследуемого экстракта обеспечивает выраженное фармакотерапевтическое влияние при повреждении печени благодаря широкому спектру его фармакологических свойств.