Антикоагулянтная активность фукоидана из бурой водоросли Saccharina japonica in vivo

Макарова Ксения Евгеньевна, младший научный сотрудник лаборатории фармакологии.     E-mail:

Материал и методика. Бурую морскую водоросль Saccharina japonica (Laminaria japonica) собирали в б. Восток зал. Петра Великого (Японское море) в 2010 г. Фукоидан выделяли методом, в основе которого лежала экстракция раствором соляной кислоты [2]. Эксперименты выполняли на 60 крысах-самцах, массой 300-350 гр., получавших стандартную виварную диету. Перед введением исследуемых препаратов крыс наркотизировали золетилом (11,4 мг/кг) и ксилазином гидрохлоридом (9,1 мг/кг). Фукоидан вводили внутривенно в дозах 0,31, 1,25 и 2,5 мг/кг, а в качестве препаратов сравнения использовали антиагрегант диклофенак («Hemofarm», Сербия) в дозах 1,25, 2,5 мг/кг и прямой антикоагулянт гепарин («Московский эндокринный завод», Россия) в дозах 0,67, 1,15, 2,4 и 4,8 мг/кг. Контрольным животным вводили изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь для исследования получали пункцией сердца через 15-20 мин после внутривенного введения исследуемых веществ, стабилизировав 3% раствором цитрата натрия в соотношении антикоагулянта и крови 1:9 [1], и центрифугировали при 200 g в течение 20 мин. для получения богатой тромбоцитами плазмы. Верхний слой плазмы аккуратно отбирали, оставшуюся часть пробы центрифугировали при 3000 об/мин. в течение 15 мин. для получения бестромбоцитарной плазмы. Агрегацию тромбоцитов изучали турбометрическим методом по Борну (Born G.V.R. 1962) на двухканальном лазерном анализаторе агрегации 230LA (НПФ «БИОЛА») [4]. В качестве индуктора агрегации использовали раствор АДФ в конечной концентрации 5 мкМ. Уровень агрегации оценивали по величине максимальной амплитуды агрега-тограммы и времени наступления дезагрегации. О коагуляционном звене гемостаза судили по активированному частичному тромбопластиновому времени (АЧТВ), протромбиновому времени (ПВ), тромбиновому времени (ТВ) и концентрации фибриногена. Количество тромбоцитов подсчитывали микроскопическим методом в камере Горяева. Статистическую обработку количественных данных проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Данные представлены в виде медианы (Ме) и значений квартильного диапазона (25%; 75%). Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Результаты. Фукоидан оказывал достоверный дозозависимый антикоагулянтный эффект. Фукоидан в концентрации 0,31 мг/кг удлинял АЧТВ в 1,66 раза по сравнению с контролем, в концентрации 1,25 мг/кг - в 3,24 раза, а в дозе 2,5 мг/кг - в 3,6 раз (p<0,05). Фукоидан в концентрации 1,25 мг/кг увеличивал тест тромбинового времени в 1,74 раза, а в дозе 2,5 мг/кг не вызывал свертываемости плазмы. Концентрация фибриногена в плазме не изменялась при всех исследуемых дозах (табл. 1).

Таблица 1. Влияние фукоидана, выделенного из бурой водоросли Saccharina japonica, и препаратов сравнения на коагуляцию крови у крыс

Примечание: > 100 - отсутствие свертываемости плазмы более 100 сек; *- достоверное отличие (p<0,05) по сравнению с контролем. Данные представлены в виде медианы (Ме) и значений квартильного диапазона (25%; 75%).

Фукоидан уменьшал АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов дозозависимо. В концентрации фукоидана 1,25 мг/кг агрегация тромбоцитов снижалась на 14,4%, а в концентрации 2,5 мг/кг - на 27,3%. Фукоидан в дозе 1,25 и 2,5 мг/кг сокращал время наступления дезагрегации на 11,2 и 29%, соответственно. Антиагрегантный эффект полисахарида был сопоставим с активностью диклофенака (табл. 2). В группе животных, которым вводили фукоидан в дозе 2,5 мг/кг, количество тромбоцитов периферической крови уменьшилось на 23% по сравнению с контрольной группой (p=0,0428). Однако изменение данного показателя в группе фукоидана было меньше, чем в группе животных, которым вводили гепарин (рис. 1).

Таблица 2. Влияние фукоидана, выделенного из бурой водоросли Saccharina japonica, и препаратов сравнения на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов у крыс

Примечание: *- достоверное отличие (p<0,05) по сравнению с контролем. Данные представлены в виде медианы (Ме) и значений квартильного диапазона (25%; 75%)

Рис. 1. Влияние исследуемых веществ на количество тромбоцитов в периферической крови крыс

Выводы: фукоидан, выделенный из бурой морской водоросли Saccharina japonica, влияет на гемостаз крови крыс. В низких дозах фукоидан ингибирует внутренний путь свертывания крови, а при увеличении вводимой дозы ингибирует и внешний, и внутренний пути гемостаза. Удлинение теста тромбинового времени под действием фукоидана свидетельствует о способности полисахарида влиять на завершающий этап процесса свертывания. Проведенные исследования показали, что степень антикоагулянтной активности фукоидана может быть сопоставима с таковой у гепарина. В то же время фукоидан, в отличие от гепарина, лишен такого побочного эффекта, как тромбоцитопения.