Детекция патогенных микроорганизмов рода Listeria методом полимеразной цепной реакции в реальном времени
Автор: Соколова Елена Васильевна, Псарева Екатерина Константиновна, Егорова Ирина Юрьевна, Журилов Павел Аркадьевич, Потемкин Евгений Андреевич, Ермолаева Светлана Александровна, Мешкова Светлана Сергеевна
Журнал: Вестник Красноярского государственного аграрного университета @vestnik-kgau
Рубрика: Ветеринария и зоотехния
Статья в выпуске: 12, 2020 года.
Бесплатный доступ
Листериоз - инфекционное заболевание человека и животных, вызываемое бактериями рода Listeria. В настоящее время различные производители ПЦР тест-систем предлагают наборы реактивов для качественного и количественного методов детекции в биологическом материале исключительно L. monocytogenes. В настоящей статье описан универсальный протокол для идентификации этиологических агентов листериоза - L. monocytogenes и L. ivanovii. Метод позволяет детектировать непосредственно микроорганизмы рода Listeria с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) на основе амплификации фрагментов генов, кодирующих факторы патогенности бактерий перечисленных видов. При скрининге коллекционных штаммов были выбраны уникальные фрагменты генов-мишеней inlA и smcL, кодирующих интерналин А L. monocytogenes и сфингомиелиназу С L. ivanovii соответственно. На основании подобранных нуклеотидных последовательностей праймеров были подобраны оптимальные условия для детекции возбудителей листериоза с помощью ПЦР-РВ. Установлен порог чувствительности обнаружения патогенных бактерий рода Listeria. Для L. monocytogenes он составил 3×102, а для L. ivanovii 3×103 бактериальных клеток в 1 мл. Определена специфичность ПЦР-РВ для детекции L. ivanovii и L. monocytogenes на основе генов smcL и inlA. Для этого помимо штаммов L. ivanovii и L. monocytogenes были использованы штаммы нескольких видов листерий (L. innocua, L. seeligeri, L. welshimeri), а также изоляты других родов бактерий. Описанный протокол является родоспецифичным для выявления штаммов рода Listeria, в том числеL. monocytogenes, а также позволяет обнаруживать непосредственно L. ivanoviiс помощью видоспецифичной мишени.
Пцр-рв, листериоз, интерналин а, сфингомиелиназа с
Короткий адрес: https://sciup.org/140250577
IDR: 140250577 | DOI: 10.36718/1819-4036-2020-12-117-125
Список литературы Детекция патогенных микроорганизмов рода Listeria методом полимеразной цепной реакции в реальном времени
- Herrador Z., Gherasim A., López-Vélez R. et al. Listeriosis in Spain based on hospitalisation records, 1997 to 2015: need for greater awareness // Euro Surveill. 2019. Vol. 24, № 21. P. 1-10.
- Dreyer M.; Thomann A.; Böttcher S. et al. Outbreak investigation identifies a single Listeria monocytogenes strain in sheep with different clinical manifestations, soil and water // Vet. Microbiol. 2015. Vol. 179. P. 69-75.
- Choi M. H., Park Y. J., Kim M. et al. Increasing Incidence of Listeriosis and Infection-associated Clinical Outcomes // Annals of laboratory medicine. 2018. Vol. 38, № 2. P. 102-109.
- Orsi R.H.; Wiedmann M. Characteristics and distribution of Listeria spp., including Listeria species newly described since 2009 // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2016. Vol. 100 № 12. Р. 5273-87.
- Sanschagrin S., Yergeau E. Next-generation sequencing of 16S ribosomal RNA gene amplicons // J Vis Exp. 2014. № 90.
- Liu D. Molecular approaches to the identification of pathogenic and nonpathogenic listeriae // Microbiol Insights. 2013. Vol. 6. P. 59-69.
- Camejo A., Carvalho F., Reis O. et al. The arsenal of Virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle // Virulence. 2011. Vol. 2 № 5. P. 379-394.
- Guillet C., Join-Lambert O., Le Monnier A., Leclercq A., Mechaï F., Mamzer-Bruneel M. et al. Human Listeriosis Caused by Listeria ivanovii // Emerging Infectious Diseases. 2010. Vol. 16 № 1: Р. 136-138.
- Vazquez-Boland J. A., Kuhn M., Berche P. et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants // Clin. Microbiol. 2001. Vol. 14 № 3. Р. 584-640.
- Бакулов И.А., Васильев Д.А., Ковалева Е.Н. [и др.]. Листерии и листериоз: монография. 2-е изд. Ульяновск: НИИЦМиБ, 2016. 334 с.
- Kralik P, Ricchi M. A Basic Guide to Real-Time PCR in Microbial Diagnostics: Definitions, Parameters, and Everything // Front Microbiol. 2017. Vol. 8 P. 108.
- Marino M., Braun L., Cossart P. et al. A framework for interpreting the leucine-rich repeats of the Listeria internalins // Proc Natl Acad Sci U S A. 2000. Vol. 97 № 16. Р. 8784-8.
- Su X., Cao, G., Zhang, J. et al. Characterization of internalin genes in Listeria monocytogenes from food and humans, and their association with the invasion of Caco-2 cells. Gut Pathog. 2019; 11: 30.
- Psareva E.K., Egorova I.Y., Liskova E.A. et al. Retrospective Study of Listeria Monocytogenes Isolated in the Territory of Inner Eurasia from 1947 to 1999 // Pathogens. 2019. Vol. 8. № 4. P. 1-16.
- Rossi F., Amadoro C., Conficoni D. et al. Occurrence, Diversity of Listeria spp. Isolates from Food and Food-Contact Surfaces and the Presence of Virulence Genes // Microorganisms. 2020. Vol. 8 № 2. Р. 294.
