Изучение противоопухолевого действия капель Плетнева №7 (селеглитен)

Онкологические заболевания в мире занимают второе место по смертности после сердечно-сосудистых болезней. По прогнозам Всемирной организации здравоохранения, заболеваемость и смертность будут повышаться.

Несмотря на определенные успехи в диагностике и методах лечения, темпы прироста заболеваемости раком неуклонно растут. Лечение пациентов больных раком является сложной задачей. Вот почему проблема разработки и применения инновационных препаратов, а также выбора адекватных схем терапии в онкологии является на сегодняшний день актуальной.

Исходя из вышесказанного, задачей настоящего исследования явилось изучение противоопухолевого действия капель Плетнева №7.

Для проведения исследований использовали комплексный растительный препарат «Капли Плетнева №7», запатентованный в России. Для получения капель Плетнева №7 используются листья подорожника большого. Препарат представляет собой прозрачную жидкость зеленого цвета и имеет в своем составе β-каротин, гиспидулин, байкалеин и хлорофилл [2].

Целью исследования являлось экспериментальное изучение противоопухолевого действия капель Плетнева №7.

Материалы и методы исследования

Исследование противоопухолевого действия капель Плетнева №7 (КП №7) проведено в лаборатории экспериментальной терапии метастазов НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (руководитель лабо- ратории д.м.н., А.М. Козлов) в соответствии с требованиями Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств от 2012 года [1].

Исследования выполнены на 80 мышах линии F1(CBAxC57Bl6) и 40 мышах линии DBA/2.

Подкожная трансплантация опухолей.

Штамм солидной карциномы легкого Льюиса (LLC) поддерживали путем серийных внутримышечных перевивок на мышах-донорах F1(CBAxC57Bl6) (самцы, масса тела 18-20 г) каждые 11 дней, а штамм беспигментной меланомы М-3 – на мышах DBA/2 (самцы, масса тела 18-20 г).

Для проведения химиотерапевтических экспериментов опухоли LLC или М-3 удаляли в асептических условиях у мышей-доноров, измельчали ножницами до гомогенной консистенции, затем пропускали через набор сит с уменьшающимся диаметром пор. Измельченную ткань обрабатывали коллагеназой (0,1 % раствор, 30 минут) до получения моноклеточной суспензии, трижды отмывали средой 199, определяли жизнеспособность опухолевых клеток, путем окрашивания трипановым синим, затем инокулировали по 1,0х106 клеток в 0,3 мл среды 199 мышам-реципиентам подкожно в область подмышечной впадины.

Противоопухолевый эффект в отношении карциномы легкого Льюиса оценивали по торможению роста первичной опухоли (ТРО, %) по сравнению с контролем.

Торможение роста опухоли вычисляли по формуле:

ТРО, % =^Ц^х 100 %, где

V к и V o – средний объем опухоли (в мм³) в контрольной и опытных группах, определяемый как произведение ее трех взаимно перпендикулярных диаметров. Минимально значимый терапевтический эффект при ТРО > 50 %.

Все болезненные процедуры при изучении противоопухолевого действия препарата проводили под анестезией. Эвтаназию животных после завершения экспериментов проводили передозировкой диэтилового эфира.

Результаты и их обсуждение

Исследование проведено на мышах F1(CBAxC57Bl6) и на мышах DBA/2 в двух сериях экспериментов. В I серии оценивали влияние КП №7 на рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса, во II серии – влияние препарата на рост подкожно трансплантированной меланомы М-3.

I серия. Исследования проведены на 8 группах мышей F₁(CBAxC₅₇Bl₆) (самцы, масса тела 18-20 г) по 10 животных в каждой: 1 группа – КП №7 100 мкг/кг, внутрибрюшинное введение (в/б); 2 группа – КП №7 100 мкг/кг, в/б; 3 группа – КП №7 100 мкг/кг, подкожное введение (п/к); 4 группа – КП №7 100 мкг/кг, п/к; 5 группа – КП №7 50 мкг/кг, в/б; 6 группа – КП №7 100 мкг/кг, в/б; 7 КП – препарат №7 10 мкг/кг, внутривенное введение (в/в); 8 группа – КП №7 10 мкг/кг, в/в. Капли Плетнева №7 вводили внутрибрюшинно, подкожно и внутривенно в указанных дозах.

Противоопухолевый эффект в отношении карциномы легкого Льюиса оценивали по торможению роста первичной опухоли (ТРО, %).

Проведенные исследования показали, что пятикратное внутрибрюшинное введение КП №7 в дозе 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором (СФР) в соотношении 1:5 и 1:10 оказывало ингибирующее действие на рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса (таблица 1).

Таблица 1

Влияние пятикратного введения КП №7 на рост карциномы легкого Льюиса

Группы животных, способ введения	Разведение	Торможение роста опухоли (ТРО, %)
		Дни после прививки
		7	17	21
1 – КП №7, 100 мкг/кг, в/б	1:5	69	28	26
2 – КП №7, 100 мкг/кг, в/б	1:10	49	0,6	1
3 – КП №7, 100 мкг/кг, п/к	1:5	11	3	7
4 – КП №7, 100 мкг/кг, п/к	1:10	35	13	10

Таким образом, пятикратное внутрибрюшинное введение мышам КП №7 в дозе 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 ингибирует рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса на 69 %.

Увеличение кратности введения КП №7 до 14 дней привело к возрастанию противоопухолевого эффекта препарата. Как видно из таблицы 2, внутрибрюшинное введение КП №7 в дозе 50 мкг/кг при разведении СФР в соотношении 1:5 ингибировало рост первичной опухоли Льюиса максимально на 80 %. Длительность противоопухолевого действия также возрастала.

Таблица 2

Влияние КП №7 на рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса

Группы животных, способ введения	Разведение	Торможение роста опухоли (ТРО, %)
		Дни после прививки
		7	12	18	25
5 – КП №7, 50 мкг/кг, в/б	1:5	80	71	72	37
6 – КП №7, 100 мкг/кг, в/б	1:5	75	59	39	9
7 – КП №7, 10 мкг/кг, в/в	1:5	-	-	69*	42
8 – КП №7, 10 мкг/кг, в/в	1:10	-	-	51*	28

Примечание: * – терапию начали через 10 дней после трансплантации опухоли.

Внутривенное введение КП №7 в дозе 10 мкг/кг в течение 8 суток через 10 дней после трансплантации опухоли также оказало противоопухолевое действие. После окончания курса терапии рост первичной опухоли был ингибирован на 69 %.

Таким образом, четырнадцатикратное внутрибрюшинное введение КП №7 в дозах 50 и 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 ингибирует рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса у животных на 80 и 79 % соответственно.

Внутривенное введение КП №7 в дозе 10 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 через 10 дней после трансплантации опухоли ингибирует рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса у лабораторных животных на 69 %.

II серия. Исследования проведены на 40 мышах DBA/2 (самцы, масса тела 18-20 г), которые были разделены на 4 группы, по 10 животных в каждой: 1 группа – КП №7 50 мкг/кг, в/б; 2 группа – КП №7 100 мкг/кг, в/б; 3 группа – КП №7 50 мкг/кг, п/к; 4 группа – КП №7 100 мкг/кг, п/к. КП №7 вводили внутрибрюшинно и подкожно в указанных дозах. Перед началом терапии мышам подкожно трансплантировали штамм беспигментной меланомы М-3.

Противоопухолевый эффект в отношении подкожно трансплантированной меланомы М-3 оценивали по торможению роста первичной опухоли (ТРО, %).

В таблице 3 отражены результаты оценки влияния КП №7 на торможение роста меланомы М-3. Из данных, представленных в таблице 3 следует, что 14-ти кратное внутрибрюшинное введение КП №7 в дозах 50 и 100 мкг/кг при разведении СФР в соотношении 1:10 ингибировало рост подкожно трансплантированной меланомы М-3 максимально на 80 % и 81 % соответственно. Препарат не проявил противоопухолевую активность при подкожном введении.

Таблица 3

Влияние КП №7 на рост подкожно трансплантированной меланомы М-3

Группы животных, способ введения	Разведение	Торможение роста опухоли (ТРО, %)
		Дни после прививки
		7	17	21
1 – КП №7, 50 мкг/кг, в/б	1:10	80	78	50
2 – КП №7, 100 мкг/кг, в/б	1:10	81	72	42
3 – КП №7, 50 мкг/кг, п/к	1:10	13	23	29
4 – КП №7, 100 мкг/кг, п/к	1:10	28	13	39

Таким образом, четырнадцатикратное внутрибрюшинное введение КП №7 в дозах 50 и 100 мкг/кг при разведении СФР в соотношении 1:10 ингибирует рост подкожно трансплантированной меланомы М-3 у мышей на 80 и 81 % соответственно.

Заключение

Капли Плетнева №7 в дозах 10, 50 и 100 мкг/кг обладают противоопухолевым действием на подкожно трансплантированные карциному легкого Льюиса и меланому М-3 у мышей.

Пятикратное внутрибрюшинное введение Капли Плетнева №7 в дозе 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 ингибирует рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса у животных на 69 %.

Четырнадцатикратное внутрибрюшинное введение Капли Плетнева №7 в дозах 50 и 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 ингибирует рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса у лабораторных животных на 80 и 79 % соответственно.

Внутривенное введение Капли Плетнева №7 в дозе 10 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 в течение 8 суток через 10 дней после трансплантации опухоли ингибирует рост подкожно трансплантированной карциномы легкого Льюиса у мышей на 69 %.

Четырнадцатикратное внутрибрюшинное введение лабораторным животным Капли Плетнева №7 в дозах 50 и 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10 ингибирует рост подкожно трансплантированной меланомы М-3 на 80 и 81 % соответственно.

Внутрибрюшинное введение капель Плетнева №7 в дозах 50 и 100 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10 в течение 5 и 14 суток мышам, а также внутривенное введение препарата №7 в дозе 10 мкг/кг при разведении стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 в течение 8 суток лабораторным животным не оказывало местнораздражающего действия.