Получение специфических компонентов бактерий Clostridium perfringens для иммуноферментного анализа
Автор: Спиридонов А.Г.
Статья в выпуске: 4 т.232, 2017 года.
Бесплатный доступ
В статье представлены методы получения специфических компонентов бактерий Clostridium perfringens и гипериммунной сыворотки для иммуноферментного анализа. Антиген получили методом озвучивания суспензии бактерий Cl. perfringens, содержащей в 1 см3 по 5 млрд. м.к. бактерий серотипов А, В, С, Д, на ультразвуковом дезинтеграторе с частотой 20 мГц в течение 10-15 минут при 40С с последующим осаждением эндотоксина сульфатом аммония и диализом против водопроводной воды. Положительную сыворотку получили путем гипериммунизации молодняка крупного рогатого скота корпускулярным антигеном и анатоксином бактерий Cl. perfringens серотипов А, В, С и Д. Гипериммунизацию животных проводили 4-х кратно с интервалом 14 дней. При этом животным вводили одновременно корпускулярный антиген подкожно и анатоксин - внутримышечно. Провели стандартизацию основных условий проведения реакции ИФА: определение оптимальной концентрации и времени адсорбции антигена на полистироловый планшет, подбор времени экспозиции исследуемых сывороток. Наиболее приемлемый показатель титра сывороток крови животных выявили при разведении конъюгата 1:2500 и концентрации сорбированного антигена 5-8 мкг/см3. Установили, что эффективно использовать режим иммобилизации антигена в течение 18 часов при температуре 40С. Межлабораторное комиссионное испытание показало, что все компоненты тест-системы активны и специфичны. Специфический антиген не реагирует с гетерогенными гипериммунными сыворотками (сальмонеллезной, эшерихиозной), тогда как с гомологичными сыворотками (гипериммунной и сыворотками крови от вакцинированных и больных анаэробной энтеротоксемией животных) дают положительную реакцию в высоких титрах - 1:3200 - 1:12800
Анаэробная энтеротоксемия, диагностика, ифа
Короткий адрес: https://sciup.org/142212957
IDR: 142212957 | УДК: 619:616-091:616.636.2
Production of specific components of bacteria Clostridium perfringens for ELISA
The article describes a new method to produce components specific to Clostridium perfringens and hyperimmune serum for ELISA test. The antigen was produced by ultrasonification of CL.perfringens bacterial suspension containing 5 billion of each A, B, C, D serotypes per 1 cm3. The ul- trasonication was performed using ultrasonic disintegrator at 20 mHz frequency during 10-15 min at 4 C. It was followed by endotoxin sedimentation with ammonium sulfate and dialysis against tap water. Positive serum was produced by young calves hyperimmunization with corpuscular antigen and anatoxin from Cl. perfringens A, B, C, D serotypes. The 4-fold hyperimmunization was performed with 14-days intervals. Simultaneously the animals were introduced corpuscular antigen subcutaneously and anatoxin intravenously. The basic conditions for ELISA test (determining optimal and antigen absorption time in polysterol plates, appropriate exposure time of tested sera) were standardized. The most appropriate titration in animal blood sera was determined at 1:2500 conjugate solution and 5-8 mkg/cm3 absorbed antigen concentration. The most efficient mode of antigen fixation was was 18hours at 4C. Interlaboratory commission trial showed that ll the components of the test-system were active and specific. Specific antigen does not respond to heterogenic hyperimmune sera (salmonella, escherichia) while with homogenic sera (hyperimmune and blood sera sampled from vaccinated and infected with anaerobic enterotoxemy) it responses at high titers - 1:3200-1:12800.
Список литературы Получение специфических компонентов бактерий Clostridium perfringens для иммуноферментного анализа
- Куриленко, А.Н. Бактериальные и вирусные болезни молодняка с.-х. животных/А.Н. Куриленко, В.Л. Крупальник, Н.В. Пименов. -М.: КолосС, 2005. -С. 84-91.
- Патент РФ на изобретение №2428202. Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят/Г.Н. Спиридонов, А.А. Иванов, Х.Н. Макаев, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов, Э Р. Галиуллина; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»; опубл. 10.09.2011, Бюл. №25.
- Салимов, В.А. Некоторые особенности патологоанатомической диагностики анаэробной энтеротоксемии телят, вызванной Cl. perfringens типа А/В.А. Салимов, Н.П.Салимова//Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. науч.-практ. конф. -Воронеж, 2002. -С. 527-528.
- Спиридонов, Г.Н. Инфекционная энтеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных в регионе Среднего Поволжья и Предуралья/Г.Н. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов//Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: Матер. науч.-практ. конф. -Краснообск, 2010. -С. 134-139.
