Роль грелина в регуляци фагоцитарной и микробицидной активности нейтрофилов

Рецепторы к грелину обнаружены на большинстве клеток иммунной системы, в том числе и на нейтрофилах [Tena - Sempere, 2007], Нейтрофилы

(С Ширшев С. В.; Орлова Е. Г., Сабанцева Ю П., 2015

являются важнейшими эффекторами воспаления. Это профессиональные охотники за микробами, обладающие самой высокой подвижностью среди всех клеток организма. Они первыми (в течение 30 мию) приходят в очаг воспаления, где захватывают и поглощают чужеродные объекты, реализуют комплекс бактерицидных эффектов, продуцируют хемоаттрактанты и медиаторы, регулирующие активность других клеток [Шмагель, Черешнев, 2011], При беременности активация нейтрофилов периферической крови матери может приводить к спонтанным абортам [Ширшев, 2009: Грелин_.к 2011], Поэтому исследование роли грелина в регуляции функциональной активности нейтрофилов в аспекте беременности является актуальным.

Цель работы - изучить влияние грелина в кон-центрацияхк характерных для беременности, на функциональную активность нейтрофилов.

Материалы и методы

Объектом исследования являлись нейтрофилы периферической крови здоровых небеременных женщин, находящихся в ранней фолликулярной фазе менструального цикла (п=7). Нейтрофилы получали центрифугированием на двойном градиенте плотности фиколл — верографина. Плотность верхнего градиента составляла - 1.077 г/см³, нижнего - 1,112 г/см³ . Нейтрофилы собирали с нижней интерфазы. Полученные клетки отмывали в избытке раствора Хэнкса и инкубировали с грелипом («Sigma», Израиль) в течение часа при 37°С. Гормон использовали в концентрациях, соответствующих уровню гормона в периферической крови в 1-11 (1,25 нг/мл) и 111 (0,83 нг/мл) триместрах беременности [Fuglsang., Espelund, Frystyk, 2005]. После инкубации оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов по степени снижения свечения люм инесцентного генно-инженерного штам ма бактерий E.coh к$х , которые являлись объектом фагоцитоза, в течение 30 мин, с интервалом в 5 мин, [Пат, № 2292 5 5 3, 2007J, Оценку окислительной способности нейтрофилов проводили по интенсивности люминол-зависимой хемилюм инес-ценции (ЛЗХЛ). Оценивали как спонтанную, так и стимулированную зимозаном ЛЗХЛ [Dahlgren, 1984], Данные представлены в виде средней арифметической и ее ошибки (М ± т). Статистический анализ результатов выполняли по парному t — критерию Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

На первом этапе исследования оценивалось влияние грелина на фагоцитарную активность нейтрофилов по степени гашения биолюминесценции. В динамике исследований грелин? в концентрациях, характерных для беременности, приводил к достоверному угнетению фагоцитарной активности

Время инкубации е ЕсоЙ Lux*, мин

■ контроль --*- -грелим(1.2 яг/ып)

—•— трелим (0.8 нг^мт)

Рис. L Влияние грелина на фагоцитарную активность нейтрофилов.

Здесь и далее * - достоверные отличия при р < 0.05 по парному't - критерию Стьюдента

При оценке регулирующего действия грелина на окислительную активность нейтрофилов установлено, что гормон снижает интенсивность спонтанной ЛЗХЛ в концентрации 1.2 нг/мл (рис. 2).

3500 -----------------------------------------------

Рис. 2, Влияние грелина на спонтанную ЛЗХЛ нейтрофилов:

г - грепии

Стимулированную зимозаном ЛЗХЛ грелин достоверно угнетает в концентрации, характерной для I - II триместра беременности в течение первых 20 мин. исследования, а в концентрации, соответствующей III триместру беременности, на всем протяжении (45 мин.) эксперимента (рис. 3).

■ контроль •  грел инО .2 нг/мл)   —♦—грел кн(0.3 нг/мп)

Рис. 3. Влияние грелина на стимулированную зимозаном ЛЗХЛ нейтрофилов

Заключение

Таким образом, представленные данные свидетельствуют об эффективном регуляторном влиянии грелина на функции нейтрофилов периферической крови h В целом, грел ин при беременности угнетает поглотительную и окислительную активность нейтрофилов в отношении бактериальных объектов. В аспекте беременности можно полагать, что грелин оказывает фетопротективное влияние, предотвращая как спонтанную, так и зимозан-индуцированную активацию нейтрофилов.