Лабораторные и экспериментальные исследования. Рубрика в журнале - Сибирский онкологический журнал
Статья научная
Цель исследования - скрининг отобранных нами ранее ингибиторов ddit4 по способности подавлять базальную и глюкокортикоид-индуцированную экспрессию данного гена в клетках рака молочной железы (РМЖ), а также оценка антипролиферативных и цитотоксических эффектов исследуемых комбинаций препаратов. Материал и методы. В исследовании использованы клетки РМЖ люминального, HeR2-положительного и тройного негативного подтипов. Методами количественной ПЦР и Вестерн-блоттинга было оценено влияние препаратов (рапамицина, вортманнина, lY-294002, апигенина, ресвератрола, куркумина, cgp-60474 и эметина) на базальный и индуцированный глюкокортикоидами уровень экспрессии гена DDIT4 и его белкового продукта. Результаты. Наиболее эффективными ингибиторами ddit4 оказались рвотное средство эметин, ингибитор протеинкиназы С cgp-60474 и модуляторы сигнального пути pi3K/akt/mtoR рапамицин, вортманнин и lY-294002. В отношении клеточных линий РМЖ были продемонстрированы цитотоксические эффекты и антипролиферативная активность комбинаций глюкокортикоида дексаметазона с противорвотным соединением эметином, ингибитором протеинкиназы С cgp-60474, а также фитонутриентами ресвератролом и куркумином. Заключение. Выявлены новые ингибиторы как базального, так и глюкокортикоид-индуцированного уровня белка и мРНК гена DDIT4 в клеточных моделях РМЖ in vitro . По итогам работы эметин и cgp-60474 являются наиболее перспективными препаратами для дальнейших исследований.
Бесплатно
Статья научная
Водорастворимые полисахариды мать-и-мачехи обыкновенной и аира болотного снижают гематотоксический эффект паклитаксела у мышей-самок линии С57В1/6 с карциномой легких Льюис. Растительные полисахариды повышают уровень нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови, увеличивают количество незрелых и зрелых нейтрофилов в кост- ном мозге, а также количество эритроидных клеток, при этом их гемостимулирующий эффект на гранулоциты сравним с таковым у препарата рекомбинантного колониестимулирующего фактора нейпогена
Бесплатно
Статья научная
Исследовано содержание NO-производных (NO-гемоглобина, NO-глутатиона, NO-тирозина, пероксинитрита) и показате- ли эндогенной интоксикации в плазме крови больных с церебральными метастазами. Выявлено нарушение детоксикацион- ной функции альбумина, повышение концентрации NO-производных в плазме крови в зависимости от распространенности метастатического поражения головного мозга при нарастании эндогенной интоксикации вследствие значительного снижения связывающей способности альбумина. Полученные результаты позволяют судить о роли NO-производных в диссеминации опухоли и участии их в развитии эндотоксикоза.
Бесплатно
Статья научная
Цель исследования - изучить опухолеобразующую активность «диких» клеток mcF-7, несущих полный набор поринов (Vdac1, Vdac2, Vdac3), а также их генетически модифицированных клеток, из которых удалена одна из изоформ (mcF-7 Vdac1 Ko, mcF-7 Vdac2 Ko, mcF-7 Vdac3 Ko). Материал и методы. Исследование направлено на создание животной модели ортотопических опухолей в молочной железе иммунодефицитных мышей BalB/c Nude путем имплантации суспензии клеток рака молочной железы человека (mcF-7) и производных этих клеток, полученных нокаутом одной из выбранных изоформ митохондриальных поринов (Vdac1, Vdac2 или Vdac3). Опухоли создавались путем инъекции в жировую ткань молочной железы мышей BalB/c Nude суспензии клеточных линий либо диких mcF-7 (содержащих все три изоформы поринов, Vdac1, Vdac2 и Vdac3) либо ее Vdac-дефицитных производных «mcF-7 Vdac1 Ko», «mcF-7 Vdac2 Ko» и «mcF-7 Vdac3 Ko» в дозе 4х106 клеток на одну инъекцию. Проведён патоморфологический анализ места имплантации опухолевых клеток, самой опухоли, а также органов брюшной и грудной полости. результаты. Показана возможность успешного создания ортотопических опухолей в жировой ткани иммунодефицитных голых мышей BalB/c Nude эпителиальными клетками рака молочной железы человека «mcF-7 Wt», содержащими полный набор изоформ митохондриальных поринов и ее Vdac-дефицитными производными. Опухолеобразующая активность имплантированных клеток коррелирует с их цитотоксическим действием на внутренние органы животного. По результатам патоморфологического анализа можно сделать вывод о том, что за исключением клеток типа «mcF-7 Vdac1 Ko», которые не образовали опухолей, все остальные имплантированные клеточные культуры «mcF-7 Wt», «mcF-7 Vdac2 Ko» и «mcF-7 Vdac3 Ko» вызывали патологические изменения состояния легких, печени и селезенки, а также наличие других опухолевидных новообразований. заключение. Полученные данные будут использованы для оптимизации объема инъекции и количества клеток, а также для уточнения динамики роста опухолей, пригодного для изучения действия противоопухолевых препаратов на опухолях, образованных клетками рака молочной железы человека (mcF-7) и ее генетически модифицированными Vdac-дефицитными производными.
Бесплатно
Создание ортотопической модели рака эндометрия
Статья научная
Цель исследования - создание модели карциномы матки у самок белых беспородных крыс путем трансплантации опухоли Герена непосредственно в рог матки. Материал и методы. Эксперимент был проведен на нелинейных белых крысах (n=15), массой 250 ± 25 гр. Белым беспородным крысам-самкам в условиях ксилазин-золетилового наркоза в асептических условиях скальпелем проводилась срединная лапаротомия. Длина разреза 2 см. В просвет правого маточного рога с помощью внутривенного катетера с инъекционным портом 22G (0,9 × 25 mm) вводили 0,5 мл опухолевой взвеси, содержащей 2,5-3,5×106 клеток. Подсчет опухолевых клеток производился на клеточном анализаторе ADAMII LS (Nano Entek, Korea). Длительность эксперимента - 21 сут. После декапитации животных производилась морфологическая оценка препаратов опухолевого узла, окрашенных гематоксилин-эозином и по Ван-Гизон.
Бесплатно
Создание пациентоподобной модели рака пищевода на иммунодефицитных мышах
Статья научная
Введение. Для изучения противоопухолевого действия веществ in vivo требуется создание модели, отражающей основные характеристики заболевания человека. Такому требованию могут отвечать пациентоподобные ксенографты (Patient Derived Xenograft - PDX) на иммунодефицитных мышах. Пациентоподобные модели опухолей считаются наиболее прогрессивными по причине их способности сохранять после имплантации свои первоначальные свойства, характеризующиеся разнообразием на гистологическом и молекулярном уровне. Целью исследования явилось создание PDX-модели рака пищевода человека в шейном отделе пищевода иммунодефицитных мышей. Материал и методы. Для создания PDX-модели рака пищевода человека было использовано 11 самцов иммунодефицитных мышей линии Balb/c Nude массой 19-22 г. Фрагмент опухоли был взят от пациента с диагнозом инфильтративно-язвенного рака - умереннодифференцированной плоскоклеточной карциномы без ороговения. Результаты. В результате имплантации донорского фрагмента опухоли наблюдалось полное приживление материала у 6 (54,5 %) из 11 животных, что согласуется с литературными данными. По результатам морфологических исследований, пациентоподобный ксенографт является плоскоклеточной карциномой, что гистологически соответствует опухоли пациента.
Бесплатно
Статья научная
Цель исследования - изучение сопряженности между показателями цитокинового профиля супернатантов образцов инвазивной карциномы молочной железы неспецифического типа (ИКНТ), ее молекулярными и гистопатологическими параметрами, экспрессией CD34 как маркера ангиогенеза и метастазированием в регионарные лимфатические узлы (РЛУ). Материал и методы. в биоптатах ИКНТ от 28 пациенток в возрасте 37-60 лет исследовали продукцию 14 цитокинов. Концентрацию цитокинов в супернатантах биоптатов (КЦСБ) определяли (в пг/мл) с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Экспрессию CD34 и маркеров молекулярных подтипов ИКНТ (HER2/neu, ER, PR, Ki67) в биоптатах ИКНТ оценивали иммуногистохимическим методом. Относительное содержание опухолевых клеток различной степени дифференцировки в образцах ИКНТ оценивали гистопатологическим анализом.
Бесплатно
Состояние парных лимфатических узлов при спонтанных опухолях системы крови у мышей
Статья научная
Обнаружена асимметрия поражения ренальных лимфатических узлов у лабораторных мышей (BALB/c) со спонтанными опухолями системы крови (лимфомами и лейкозами): левый орган вовлекался значительно чаще и его поражение (увеличение) было более выраженным по сравнению с правым. Различия не зависели от гистологической формы опухоли и пола. Mикроскопическая картина в пораженных лимфатических узлах также не различалась. Вовлечение других лимфатических узлов не проявляло закономерной асимметрии. Вероятно, обнаруженные различия связаны с описанным в литературе феноменом более интенсивного синтеза правым надпочечником глюкокортикоидов по сравнению с левым и, соответственно, большим количеством этих гормонов, оказывающих антипролиферативное действие на клетки лимфом в лимфе, оттекающей в ипсилатеральные лимфатические узлы.
Бесплатно
Состояние про- и антиоксидантной активности сыворотки крови у крыс с карциносаркомой Walker-256
Статья научная
Исследована динамика про- и антиоксидантной активности, а также состояние перекисного окисления липидов в сыворотке крови крыс-самцов линии Вистар с перевиваемой карциносаркомой Walker-256. Суспензию клеток переви- ваемой карциносаркомой Walker-256 вводили в мышцу бедра в дозе 106 клеток. Для получения сыворотки крови крыс декапитировали под эфирным наркозом, спустя пять суток с момента перевивки опухоли, на 3, 7 и 14-е сут эксперимента. Для оценки баланса в системе «оксиданты-антиоксиданты» были произведены расчеты коэффициента соотношения между показателями про- и антиоксидантной активности сыворотки крови крыс. На всех сроках развития карциносаркомы Walker-256 наблюдалось повышение коэффициента соотношения про- и антиоксидантной активности сыворотки крови крыс, свидетельствующее о смещении баланса в системе «оксиданты-антиоксиданты» в сторону оксидантов, что говорит о развитии окислительного стресса
Бесплатно
Состояние секреторной и регенераторной функций желудка при канцерогенезе
Статья научная
Проведено комплексное обследование 32 больных раком желудка, проходивших лечение в Мордовском республиканском онкологическом диспансере в 2010–2011 гг. Для дифференциации в исследование включены пациенты с обострением хронического гастрита и язвенной болезни желудка. Методом твердофазного иммуноферментного анализа в сыворотке крови обследуемых определяли концентрации пепсиногена-1, -2 и их соотношение. Выявлены изменения маркеров секреции слизистой оболочки желудка, обратно взаимосвязанные со стадией опухолевого процесса. Низкие значения соотношения пепсиногенов у большинства больных раком желудка свидетельствуют о роли атрофических изменений слизистой оболочки в канцерогенезе.
Бесплатно
Статья научная
С помощью метода газожидкостной хроматографии изучен спектр высших жирных кислот опухолевой ткани при раке шейки матки (РШМ) с различной дифференцировкой. Независимо от степени дифференцировки РШМ наблюдается высокий уровень насыщенных жирных кислот по сравнению с контролем, главным образом, за счет увеличение количества С14:0 и появления нехарактерной для организма человека С19:0. Наблюдается повышенное содержание моноеновых ЖК в опухолевой ткани по сравнению с контрольными образцами. Дефицит полиеновых ЖК ω-6 серии отмечается во всех участках тканей. Выявлены особенности жирнокислотного состав РШМ с различной степенью дифференцировки.
Бесплатно
Спектр мутаций BRCA1/2 у пациенток армянского происхождения с раком молочной железы и яичника
Статья научная
Цель исследования - сравнить спектры патогенных вариантов BRCA1 и BRCA2 у пациенток с наследственными формами рака молочной железы (РМЖ) и рака яичников (РЯ) - представительниц двух групп этнических армян: из Еревана и городов юга России. Материал и методы. В исследование включено 106 больных РМЖ из Национального центра онкологии им. В.А. Фанарджяна (Ереван, Республика Армения) и 117 пациенток с РМЖ и РЯ армянского происхождения, которые были направлены в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова (Санкт-Петербург) из нескольких онкологических диспансеров России (Краснодар, Сочи, Пятигорск). Анализ кодирующих последовательностей генов BRCA1 и BRCA2 выполнялся методом таргетного высокопроизводительного секвенирования.
Бесплатно
Статья научная
Цель исследования - оценить способность ДНК-конструкций pMEL-TCI и pMEL-A0201, кодирующих искусственные полиэпитопные антигены меланомы, стимулировать противоопухолевый ответ в системе индукции Т-клеточного ответа ex vivo. материал и методы. Изучение цитотоксической активности проводилось в системе индукции Т-клеточного ответа ex vivo с использованием мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови HLA-A*02:01 позитивных доноров. Цитотоксическую активность оценивали двумя методами: 1) по способности МНК, стимули-рованных дендритными клетками, трансфицированными плазмидами pMEL-TCI и pMEL-A0201, вызывать лизис клеток меланомы человека линии Mel Is, а также 2) по уровню их гранзим-продуцирующей активности. В качестве положительного контроля использовалась рекомбинантная плазмида, кодирующая полноразмерный антиген клеток меланомы MART-1. Результаты. Полученные результаты показали, что дендритные клетки HLA-A*02:01+ доноров, трансфицированные плазмидными конструкциями pMel-A0201 и pMel-TCI, стимулировали цитотоксическую актив-ность аутологичных МНК в отношении клеток меланомы Mel Is. Как по эффективности индукции цитотоксического ответа, так и по уровню стимуляции продукции гранзима B аллелеспецифическая конструкция достоверно пре-взошла конструкцию, кодирующую полноразмерный белок MART1. заключение. ДНК-вакцинные конструкции, кодирующие искусственные полипептиды, составленные из эпитопов опухолевых антигенов, способны стимулиро-вать противоопухолевый цитотоксический ответ. Данный подход может послужить основой для разработки новых способов иммунотерапии онкологических заболеваний.
Бесплатно
Способность модифицированных витаминов Е и C модулировать терапевтическое действие циклофосфана
Статья научная
На мышах линии C57Bl/6 с карциномой легких Льюис проведено экспериментальное исследование способности новых модифицированных витаминов с антиоксидантными свойствами - гликозидов витамина Е (TMG) и витамина С (AAG) - модулировать терапевтическую активность циклофосфана. Было показано, что применение циклофосфана в дозе 60 мг/кг совместно с TMG и AAG дает в результате выраженный антиметастатический эффект, который сопоставим с эффектом действия одного циклофосфана в максимальной терапевтической дозе 120 мг/кг.
Бесплатно
Статья научная
Важным фактором, влияющим на качество нейтронной терапии, является относительная биологическая эффективность (ОБЭ) нейтронов, поэтому количественной оценке этой величины уделяют значительное внимание. Для получения необходимой информации применяют экспериментальные и клинические исследования, различные математические и радиобиологические модели. Исследования проводят для различных источников нейтронов, отличающихся способом получения частиц, энергией и энергетическим спектром. Цель исследования - проанализировать зависимости ОБЭ нейтронов от дозы в дистанционной нейтронной терапии на циклотроне У-120 и генераторе НГ-12И. Материал и методы. Рассмотрены известные способы оценки относительной биологической эффективности нейтронов для нейтронной терапии и выбран оптимальный способ решения данной задачи. Для получения зависимости ОБЭ нейтронов от дозы применена многомишенная модель клеточной выживаемости. Результаты. Получены зависимости ОБЭ нейтронов циклотрона У-120 и генератора НГ-12И от дозы для однократного облучения биологических объектов. Показано, что характер функций в области доз, интересующих нейтронную терапию, находится в согласии с характером аналогичных зависимостей, найденных другими авторами в экспериментальных и клинических исследованиях.
Бесплатно
Статья научная
Введение. Понимание последовательности событий, обеспечивающих инвазивность малигнизированных клеток, имеет важное прогностическое значение. Изучение клеточных и молекулярных основ метастатического процесса закладывает основу для дальнейшего прогресса в лечении онкологических больных. Цель исследования - провести сравнительный анализ in vitro процессов миграции и инвазии культивируемых клеток солидных опухолей человека, выделенных из первичных и метастатических очагов. Материал и методы. Исследование проведено на клеточных культурах меланомы кожи (МК, n=29), рака почки (РП, n=2), колоректального рака (КРР, n=1), сарком мягких тканей (СМТ) и остеогенных сарком (ОС, n=39), выделенных из операционного материала пациентов, получавших лечение в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова. Миграцию и инвазию оценивали в режиме реального времени на приборе xCelligence (ACEA Bioscience inc., США). Осуществляли корреляционный анализ экспрессии раковых тестикулярных антигенов и продукции опухолевыми клетками спектра иммуносупрессивных факторов с параметрами миграции и инвазии. Результаты. Все исследованные культуры клеток солидных опухолей (n=65) демонстрировали in vitro инвазивный потенциал (iP), который составил для клеток РП 73,79 %; МК - 53,16 %; СМТ и ОС - 43,96 %; КРР - 5,16 %. Скорость миграции (MS) и инвазии (Slopeinv) была выше у клеток СМТ и ОС по сравнению с МК - 39,33 и 25,3 мкм/ч (p-3 соответственно (p function show_abstract() { $('#abstract1').hide(); $('#abstract2').show(); $('#abstract_expand').hide(); }
Бесплатно
Статья научная
Немелкоклеточный рак легкого занимает лидирующую позицию в структуре онкологической заболеваемости и смертности, несмотря на улучшение качества хирургических и терапевтических методов лечения. Поиск маркеров, позволяющих прогнозировать риск прогрессирования опухоли, остается актуальным. Изучение морфологии эпителия в бронхах разного калибра имеет большой потенциал для решения данной проблемы. Цель исследования - сравнительное изучение особенностей и частоты встречаемости разных вариантов сочетания морфологических изменений эпителия в бронхах крупного и мелкого калибра при плоскоклеточном раке и аденокарциноме легкого. Материал и методы. Морфологический материал был взят от 151 пациента, прооперированного в НИИ онкологии ТНИМЦ РАН с диагнозом немелкоклеточный рак легкого T1-4N0-3M0 стадии. Определяли различные варианты морфологических изменений бронхиального эпителия.
Бесплатно
Статья научная
Введение. В развитии и прогрессировании колоректального рака (КРР) важную роль играют различные гены опухолевого контроля и микроРНК. Экспрессия этих генов может значительно отличаться в опухолевой и перифокальной здоровой ткани. Нет точных данных, на каком расстоянии от опухоли находится перифокальная здоровая ткань с точки зрения экспрессии генов. Цель исследования -изучить профили экспрессии генов опухолевого контроля ( E2F3, TGFB, NFKB, KLF-12, EGFR и MMP9 ), а также экспрессии генов микроРНК ( микроРНК-15, -16, -21 и -210 ) в опухолевой и перифокальной здоровой тканях при КРР. Материал и методы. В исследование были включены 19 пациентов с диагнозом КРР. В рамках постановки диагноза при колоноскопии забирался материал опухолевой и рядом расположенной перифокальной визуально здоровой ткани на расстоянии 1-2 см от края опухоли. В полученном материале исследовали уровни экспрессии генов опухолевого контроля ( E2F3, TGFB, NFKB, KLF-12, EGFR и MMP9 ), а также уровни экспрессии генов микроРНК ( микроРНК-15, -16, -21 и -210 ). Результаты. Было обнаружено снижение уровня экспрессии E2F3 (Медиана 3,73, Q1-Q3 2,64 УЕ против Медиана 6,5, Q1-Q3 6,39 УЕ, p=0,01) и микроРНК-16 (Медиана 2,83, Q1-Q3 4,74 УЕ против Медиана 4,29, Q1-Q3 3,73 УЕ, p=0,027) и повышение уровня экспрессии микроРНК-21 (Медиана 2,64, Q1-Q3 1,38 УЕ против Медиана 1,41, Q1-Q3 1,21 УЕ, p function show_abstract() { $('#abstract1').hide(); $('#abstract2').show(); $('#abstract_expand').hide(); }
Бесплатно
Статья научная
Целью исследования явилась оценка уровней гормонов, вовлеченных в патогенез рака молочной железы в лимфе грудного протока. Методы. РМЖ индуцировали введением N-метил-N-нитрозомочевины у крыс линии Wistar. Часть животных подвергалась только оперативному вмешательству или же только полихимиотерапии (циклофосфан, метотрексат, 5-фторурацил). У части животных сочетали оперативное вмешательство с последующим курсом ПХТ, а также у части животных дополнительно проводили терапию фрагментированной ДНК. В лимфе исследовали содержание фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), пролактина, лютеинизирующего гормона (ЛГ), эстрадиола (Е 2) и тириоглобулина (ТГ). Результаты. Показано, что оперативное удаление опухоли молочной железы приводит к снижению уровней ЛГ и Е 2 в лимфе. Сочетание операции с курсом ПХТ приводит к снижению уровней ФСГ в лимфе. ПХТ без оперативного удаления опухоли молочной железы приводит к уменьшению концентрации Е 2 в лимфе. Заключение. Концентрация половых гормонов и тириоглобулина в лимфе грудного протока при РМЖ у крыс зависит от вида проводимого лечения.
Бесплатно
Статья научная
Определены концентрации метилированных и неметилированных форм генов опухолевой супрессии RARβ2 и RASSF1A в свободно циркулирующих ДНК плазмы крови (цирДНК) и в циркулирующих ДНК, связанных с поверхностью клеток крови, и концентрации белковых маркеров (РЭА, CYFRA 21.1) в крови больных немелкоклеточным раком легкого до лечения. Показано, что индекс метилирования генов RASSF1A и RARβ2, определеный как отношение концентрации метилирован- ных копий гена к сумме концентраций метилированных и неметилированных копий в крови, позволяет дискриминировать больных НМРЛ от здоровых лиц с чувствительностью 90 % и специфичностью 82 %. Иммунохимическая детекция белковых онкомаркеров РЭА и CYFRA 21.1 позволяет дискриминировать больных НМРЛ от здоровых доноров с чувствительностью 43 % и 56 %, специфичностью 88 % и 97 %. Показана ассоциация между концентрацией эпигенетических (RARβ2, RASSF1A, RARβ2 + RASSF1A) и белковых онкомаркеров (РЭА, РЭА + CYFRA 21.1) в крови больных НМРЛ, отдельно для белкового маркера CYFRA 21.1 ассоциация не выявлена. Полученные данные свидетельствуют о том, что анализ индекса метилиро- вания генов RASSF1A, RARβ2 в сочетании с определением концентрации белковых маркеров РЭА и CYFRA 21.1 может быть более эффективен, чем детекция отдельных маркеров, при диагностике немелкоклеточного рака легкого.
Бесплатно
